[0001] La présente demande de brevet revendique la priorité de la demande de brevet Français FR 2207893 déposée le 29 juillet 2022 et incorporée par la présente par référence.

Domaine de l’invention :

[0002] La présente invention concerne le domaine de l’agriculture et, plus spécifiquement, l’utilisation d’une bactérie pour inhiber la germination des plantes.

Art antérieur

[0003] Dans le domaine du contrôle de la croissance des mauvaises herbes, l'utilisation généralisée d'herbicides chimiques n'est pas sans poser problème. C'est ainsi que les autorités de plusieurs pays se sont récemment émues devant le niveau de pollution des nappes phréatiques engendré par certains herbicides dits "résiduaires" de la famille des triazines (atrazine, simazine...) et des urées substituées (diuron, etc..), ce qui a conduit à des interdictions d'utilisation ou à leur limitation d'emploi (dose maximum autorisée sur certaines cultures) dans la plupart des pays européens.

[0004] De nouvelles molécules moins polluantes ont été découvertes depuis, mais leur coût est très élevé, ce qui limite leur utilisation.

[0005] Il est donc souhaitable de bénéficier de nouvelles solutions pour contrôler la croissance des mauvaises herbes.

Exposé de l’invention

[0006] Les inventeurs ont maintenant constaté que, de manière surprenante, différentes souches bactériennes appartenant à l’espèce Bacillus pseudomycoïdes permettaient d’inhiber la germination de plantes sur des surfaces de sol sur lesquelles elles ont été pulvérisées.

[0007] L'invention a donc pour but de fournir une nouvelle composition, alternative aux herbicides chimiques, pour inhiber la germination des plantes. [0008] En conséquence, un premier objet de l’invention vise une méthode pour inhiber la germination des plantes qui comprend une étape d’application d’une quantité efficace, sur une surface de sol, d’une composition comprenant au moins une souche bactérienne vivante permettant d’inhiber la germination des plantes et appartenant à l’ espèce Bacillus pseudomycoïdes.

[0009] Avantageusement, la quantité efficace est comprise entre 10 ⁶ et 10 ⁹ CFU/m ² .

[0010] Avantageusement toujours, ladite au moins une souche bactérienne est choisie parmi les souche de Bacillus pseudomycoïdes déposée à la CNCM le 2 février 2022 sous le n° CNCM 1-5813 (Bio Jll) et le 22 juillet 2022, sous le n° CNCM 1-5874 (J211) et le n° CNCM 1-5873 ( J58).

[0011] Un deuxième objet de l’invention porte sur l’utilisation d’au moins une souche bactérienne vivante appartenant à l’espèce Bacillus pseudomycoïdes comme anti-germinatif.

[0012] Un troisième objet de l’invention porte sur souche bactérienne est choisie parmi les souche de Bacillus pseudomycoïdes déposée à la CNCM le 2 février 2022 sous le n° CNCM 1-5813 (Bio Jll) et le le 22 juillet 2022, sous le n° CNCM 1-5874 (J211) et le n° CNCM 1-5873 ( J58).

[0013] Un quatrième objet de l’invention concerne une composition destinée à inhiber la croissance des plantes des plantes comprenant au moins une souche telle que définie précédemment.

[0014] Description détaillée

[0015] La germination est le début de développement d'une nouvelle plante, à partir d'une graine. Elle désigne plus spécifiquement la reprise du développement et du métabolisme (absorption d'eau, respiration, activité enzymatique, etc.) d'un embryon de spermatophyte (contenu dans une graine), jusqu'à émergence de la radicule.

[0016] Par inhibition de la germination des plantes, on entend une diminution d’au moins 10% du nombre de plantes ayant germé par unité de surface traitée et ceci par rapport à la surface équivalent non traitée, de préférence une diminution d’au moins 25%. [0017] Par plantes, on entend de préférence les « mauvaises herbes » ou « adventices », qui sont des plantes dont la pousse n’est pas souhaitée.

[0018] De façon générale, les plantes sont des plantes herbacées ou des plantes ligneuses qu’elles soient monocotylédones ou dicotylédones.

[0019] Avantageusement, les plantes sont choisies dans le groupe consistant en les familles des Astéracées, des Poacées, des Cyperacées, des Polygonacées, des Brassica- cées et des Apiacées.

[0020] De préférence, les plantes appartiennent à la famille des Poacées ou graminées.

[0021] L’étape d’application de la composition selon l’invention peut être effectuée par des techniques bien connues de l’homme du métier telles que, par exemple, la pulvérisation sur la surface de sol, ou encore l’injection ou la diffusion dans le sol.

[0022] Dans le cadre d’une inhibition de la croissance des plantes, l’étape d’application pourra être répétée, par exemple tous les 3 à 6 mois.

[0023] L’étape d’application est avantageusement effectuée dans des conditions météorologiques favorables.

[0024] De préférence, cette étape d’application est effectuée lorsque la température extérieure est comprise 0 et 30°C, de préférence entre 15 et 25°C.

[0025] Par sol, on entend aussi bien un sol qui présente des plantes à sa surface (plantes dont on veut contrôler la prolifération) qu’un sol dénué de plantes et contenant potentiellement des graines non germées et/ou en cours de germination. Avantageusement, le sol présente un taux d’humidité supérieur à 30%, de préférence supérieur à 40%.

[0026] Ainsi, on préférera réaliser l’étape d’application avant un épisode pluvieux ou après une irrigation. De la sorte, on sera à même de créer l’environnement le plus favorable possible pour la pénétration dans les sols et le développement de la souche bactérienne appliquée.

[0027] Par « quantité efficace pour inhiber la germination des plantes », on entend la quantité de ladite au moins une souche bactérienne pour diminuer d’au moins 10% le nombre de plantes ayant germé par unité de surface traitée et ceci par rapport à la surface équivalent non traitée, de préférence pour diminuer d’au moins 25% ce nombre de plantes ayant germé par unité de surface traitées.

[0028] Les inventeurs ont mis en évidence de façon surprenante que, pour les souches bactériennes dont ils ont découvert le potentiel anti-germinatif, ce potentiel n’était pas strictement corrélé à la quantité de bactéries appliquée par surface de sol. Ainsi, si une action anti-germinative maximale a été observé à une concentration de 10 ⁸ CFU/m ² , cette action diminue avec l’augmentation de la quantité de bactéries appliquée.

[0029] Aussi, et selon un mode de réalisation préféré, la quantité efficace de ladite au moins une souche bactérienne est comprise entre 10 ⁶ et 10 ⁹ CFU/m ² de ladite au moins une souche bactérienne, de préférence entre 5x10 ⁶ et 5x10 ⁸ CFU/m ² et, de manière particulièrement préférée entre 10 ⁷ et 10 ⁸ CFU/m ² .

[0030] Par « souche bactérienne vivante », on entend une souche bactérienne ayant la capacité de se multiplier après application. Aussi, une telle souche bactérienne peut se trouver sous la forme de spores.

[0031] En partant de la découverte des inventeurs, l’homme du métier est à même d’identifier simplement d’autres souches bactériennes ayant la capacité d’inhiber la germination des plantes.

[0032] Selon un autre mode de réalisation préféré, ladite au moins une souche bactérienne vivante appartient au genre Bacillus, de préférence elle appartient à l’espèce Bacillus pseudomycoïdes. ou au genre Rhodobacter , de préférence elle appartient à l’espèce sphaeroides

[0033] En dehors de leur activité antigerminative, les bactéries de l’espèce Bacillus pseudomycoïdes sont considérées comme sans danger, notamment parce qu’elles sont naturellement présentes dans les sols. C’est d’ailleurs à partir de prélèvements de sol que les inventeurs ont isolées les différentes souches testées.

[0034] De préférence, ladite au moins une souche bactérienne est choisie parmi les souche de Bacillus pseudomycoïdes déposée à la CNCM le 2 février 2022 sous le n° CNCM 1-5813 (Bio Jll) et le le 22 juillet 2022, sous le n° CNCM 1-5874 (J211) et le n° CNCM 1-5873 ( J58).

[0035] Maintenant, la composition pourra comprendre un mélange de deux ou plus de ces souches.

[0036] La composition selon l’invention pourra prendre l’une des multiples formes adaptées à une utilisation en agriculture comme les formes solides (ex. poudres, notamment les poudres mouillables, ou granulés, notamment les micro-granulés), liquides (ex. suspensions) ou de gels.

[0037] La composition selon l’invention comprendra typiquement de 10 ⁴ à 10 ¹² CFU/g ou CFU/ml, notamment de 10 ⁵ à 10 ¹⁰ CFU/g ou CFU/ml, de préférence de 10 ⁶ à 10 ⁸ CFU/g ou CFU/ml des souches de Bacillus pseudomycoïdes.

[0038] En termes de poids, la composition selon l’invention pourra comprendre de 0,005 à 4 % en poids (par rapport au poids total de la composition) de Bacillus pseudomycoïdes, de préférence de 0, 1 à 3 en poids (par rapport au poids total de la composition) de Bacillus pseudomycoïdes.

[0039] De préférence, on utilise une formulation sèche de ladite au moins une souche bactérienne. Une telle formulation sèche peut être obtenue par des méthodes bien connues de l’homme du métier comme la dessication sous congélation, le séchage à l’air, le séchage par atomisation ou encore le séchage par lit fluidisé.

[0040] La composition selon l’invention peut comprendre au moins un support acceptable en agriculture.

[0041] De tels supports sont bien connus et comprennent notamment le talc, la craie, la maltodextrine, le lactose, le dextran, l’amidon, le glucose, le kaolin, la terre de diatomée, la chitine, les alginates ou encore le carraghénane.

[0042] La composition selon l’invention pourra comprendre en outre au moins un autre agent actif. [0043] A titre d’agents actifs, on entend, à titre d’exemple, des herbicides, des insecticides, des fongicides.

[0044] D'autres caractéristiques et avantages de l'invention sont donnés, à titre illustratif, dans les exemples qui suivent et sur la Figure unique qui rapporte les résultats d'essai sur des plants de tomates en chambre de culture.

Exemples :

1) Mise en évidence d’une activité anti-germinative associée à différentes souches bactériennes

[0045] Après avoir identifié par hasard une potentielle activité anti-germinative d’une souche bactérienne de l’espèce Bacillus pseiidomycoïdes. les inventeurs ont cherché à confirmer celle-ci et à rechercher cette activité chez d’autres souches appartenant à cette espèce.

[0046] Pour ce faire, des herbes présentes sur un site d’intérêt ont été séchées et égrainées.

[0047] Ces graines ont ensuite été semées dans des pots contenant 1 litre de sol agricole.

[0048] Après semis, le sol a été recouvert d’une couche de 3 cm de gravier.

[0049] Un inoculum comprenant une des souches Bacillus pseudomycoïdes Jll, J211 ou J58 a été pulvérisé à une concentration équivalente à 10 ⁸ CFU/m ² à raison de 10 pots par souche bactérienne.

[0050] Une nouvelle inoculation est réalisée une semaine plus tard.

[0051] Les pots sont maintenus sous serre à une température de 20°C la journée et de 16° la nuit. Le taux d’humidité de l’air est maintenu constant à 70%.

[0052] Après un mois sous serre, le nombre de plantes et le nombre d’espèces de plantes ayant poussé par pot est déterminé. Les résultats sont présentés dans le tableau I qui suit.

[0053] Tableau I

[0054] Les résultats démontrent que les trois souches testées ont une action anti-germinative.

[0055] Les inventeurs ont démontré l’action antigerminative de la souche la plus efficace

(BioJll) en condition naturelle et à trois concentrations différentes (10 ⁸ CFU/m ² ; 5. 10 ⁸ CFU/m ² et 10 ⁹ CFU/m ² ) à raison de 7 parcelles de 1m ² traitées par concentrations. Une nouvelle inoculation est réalisée 1 mois plus tard

[0056] Pendant trois mois, le nombre de plantes ayant poussé par parcelle est déterminé tous les 15 jours. Les résultats sont présentés dans le tableau II qui suit.

Tableau II : [0057] De façon étonnante, Faction anti-germinative est maximale à la plus faible concentration. A la lueur de résultats préliminaires, les inventeurs ont également potentiellement identifié une telle activité chez des bactéries de l’espèce Rhodobacter sphaeroides.

Revendications

1. Une méthode pour inhiber la germination des plantes qui comprend une étape d’application d’une quantité efficace, sur une surface de sol, d’une composition caractérisée en ce que ladite composition comprend au moins une souche bactérienne vivante permettant d’inhiber la germination des plantes et appartenant à l’ espèce Bacillus pseudomycoïdes.

2. La méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite au moins une souche bactérienne est choisie dans pami les souches de Bacillus pseudomycoïdes déposée à la CNCM le 2 février 2022 sous le n° CNCM 1-5813 (Bio Jll) et le 22 juillet 2022, sous le n° CNCM 1-5874 (J211) et le n° CNCM 1-5873 (J58).

3. La méthode selon l’une quelconque des revendications précédentes, en ce que la quantité efficace est comprise entre 10 ⁶ et 10 ⁹ CFU/m ² de ladite au moins une souche bactérienne, de préférence entre 5x10 ⁶ et 5x10 ⁸ CFU/m ² et, de manière particulièrement préférée entre 10 ⁷ et 10 ⁸ CFU/m ² .

4. La méthode selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition comprend en outre au moins un autre agent actif, tel qu’un herbicide, un insecticide ou un fongicide.

5. Une utilisation d’au moins une souche bactérienne vivante appartenant à l’espèce Bacillus pseudomycoïdes comme anti-germinatif.

6. L’utilisation selon la revendication précédente, caractérisée en ce que ladite au moins une souche bactérienne est choisie pami les souches de Bacillus pseudomycoïdes déposée à la CNCM le 2 février 2022 sous le n° CNCM 1-5813 (Bio Jll) et le 22 juillet 2022, sous le n° CNCM 1-5874 (J211) et le n° CNCM 1-5873 ( J58).

7. Une souche de Bacillus pseudomycoïdes choisie pami les souches de Bacillus pseudomycoïdes déposée à la CNCM le 2 février 2022 sous le n° CNCM 1-5813 (Bio Jll) et le 22 juillet 2022, sous le n° CNCM 1-5874 (J211) et le n° CNCM 1-5873 ( J58). 8. Une composition destinée à inhiber la germination des plantes comprenant au moins une souche telle que définie à la revendication précédente.

Abrégé

L’invention a pour objet une méthode pour inhiber la germination des plantes qui comprend une étape d’application d’une quantité efficace, sur une surface de sol, d’une composition comprenant au moins une souche bactérienne vivante permettant d’inhiber la germination des plantes et une telle composition destinée à inhiber la germination des plantes.

TRAITÉ DE BUDAPEST SUR LA RECONNAISSANCE INTERNATIONALE DU DÉPÔT DES MICRO-ORGANISMES AUX FINS DE LA PROCÉDURE EN MATIÈRE DE BREVETS

FORMULE INTERNATIONALE

DESTINATAIRE

BIOINTRANT RÉCÉPISSÉ EN CAS DE DÉPÔT INITIAL

139 RUE PHILIPPE DE GIRARD délivré en vertu de la règle 7.1 par l’AUTORITÉ DE DÉPÔT INTERNATIONALE 84120 PERTUIS identifiée au bas de cette page

FRANCE

NOM ET ADRESSE DU DÉPOSANT

I. IDENTIFICATION DU MICRO-ORGANISME

Référence d’identification donnée par le Numéro d’ordre attribué par DÉPOSANT : l’AUTORITÉ DE DÉPÔT INTERNATIONALE :

BîoJll CNCM 1-5813

II. DESCRIPTION SCIENTIFIQUE ET/OU DÉSIGNATION TAXONOMIQUE PROPOSÉE

Le micro-organisme identifié sous chiffre I était accompagne : | X [ d’une description scientifique

S d'une désignation taxonomique proposée

(Cocher ce qui convient).

III. RÉCEPTION ET ACCEPTATION

La présente autorité de dépôt internationale accepte le micro-organisme identifié sous chiffre I, qu’elle a reçu le 02 FÉVRIER 2022 (date du dépôt initial)

IV. RÉCEPTION D’UNE REQUÊTE EN CONVERSION

La présente autorité de dépôt internationale a reçu le micro-organisme identifié sous chiffre I le

(date du dépôt initial) ¹ et a reçu une requête en conversion du dépôt initial en dépôt conforme au Traité de Budapest le (date de réception de la requête en conversion).

V. AUTORITÉ DE DÉPÔT INTERNATIONALE

Nom : COLLECTION NATIONALE Signature(s) de la (des) personne(s) compétente(s)p

DE CULTURES DE MICROORGANISMES représenter l’autorité de dépôt internationale

(CNCM) employas ^RAQUEL HURT

Adresse : INSTITUT PASTEUR

25 RUE DU DOCTEUR ROUX 75724 PARIS CEDEX 15 Date : PARIS, 01 AVRIL 2022

En cas d’application de la règle 6.4.d), cette date est la date à laquelle le statut d’autorité de dépôt interrii(«ife

Formule BP/4 (page unique) TRAITÉ DE BUDAPEST SUR LA RECONNAISSANCE INTERNATIONALE DU DÉPÔT DES MICRO-ORGANISMES AUX FINS DE LA PROCÉDURE EN MATIÈRE DE BREVETS

FORMULE INTERNATIONALE

DESTINATAIRE

BIOINTRANT RÉCÉPISSÉ EN CAS DE DÉPÔT INITIAL 139 RUE PHILIPPE DE GIRARD délivré en vertu de la règle 7.1 par l ’AUTORITÉ DE DÉPÔT INTERN AT10N ALE 84120 PERTUIS identifiée au bas de cette page

NOM ET ADRESSE DU DÉPOSANT

I. IDENTIFICATION DU MICRO-ORGANISME

Référence d’identification donnée par le Numéro d’ordre attribué par DÉPOSANT : l’AUTORITÉ DE DÉPÔT INTERNATIONALE :

BioJ58 CNCM 1-5873

II. DESCRIPTION SCIENTIFIQUE ET/OU DÉSIGNATION TAXONOMIQUE PROPOSÉE

Le micro-organisme identifié sous chiffre I était accompagné : j~X~| d’une description scientifique

| X | d’une désignation taxonomique proposée

(Cocher ce qui convient).

III. RÉCEPTION ET ACCEPTATION

La présente autorité de dépôt internationale accepte le micro-organisme identifié sous chiffre I, qu’elle a reçu le 22 JUILLET 2022 (date du dépôt initiai) *.

IV. RÉCEPTION D’UNE REQUÊTE EN CONVERSION

La présente autorité de dépôt internationale a reçu le micro-organisme identifié sous chiffre I le

(date du dépôt initial) ' et a reçu une requête en conversion du dépôt initial en dépôt conforme au Traité de Budapest le (date de réception de la requête en conversion).

V. AUTORITÉ DE DÉPÔT INTERNATIONALE

Nom : COLLECTION NATIONALE Signature(s) de la (des) personne(s) compétente(s)pour

DE CULTURES DE MICROORGANISMES représenter l’autorité de dépôt internationale ou de l’jd»

(CNCM) employc(s) autonsefsi RAQUEL HURT

Adresse : INSTITUT PASTEUR

25 RUE DU DOCTEUR ROUX tfC’if 75724 PARIS CEDEX 15 Date : PARIS; OBRE 20

■HLÏURt ,

En cas d’application de la règle 6.4. d), cette date est la date à laquelle le statut d’autorité de dépôt int

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FORMULE INTERNATIONALE