COMPOSES POUR LA PREPARATION DE MEDICAMENTS DESTINES AU TRAITEMENT DE PATHOLOGIES IMPLIQUANT LE GLUTAMATE EXTRACELLULAIRE, ET LEURS PROCEDES D'OBTENTION La présente invention a pour objet des composes à activité antiradicalaire, ainsi que des compositions pharmaceutiques les contenant, leurs procédés d'obtention, et leur utilisation dans le cadre du traitement de pathologies dans lesquelles interviennent des concentrations anormalement élevées en glutamate extracellulaire.

Les concentrations neurotoxiques de glutamate extracellulaire causent la mort neuronale dans divers cas pathologiques aigus : traumatismes, ischémies, toxiques exogènes. Le même type de processus de mort neuronale prend également place au cours d'affections chroniques neurodégénératives Alzheimer, Parkinson, sclérose latérale amyotrophique.

Des molécules capables d'antagoniser l'action neurotoxique du glutamate dans les cas pathologiques aigus cités plus haut, ont fait l'objet de la demande de brevet européen 0 396 734 du 20 novembre 1989. Il s'agit d'arylcyclohexylamines agissant en tant qu'antagonistes non compétitifs du récepteur N-méthyl-D-aspartate (NMDA). Ce récepteur, sur lequel agit le glutamate, est responsable de l'entrée massive des ions Ca2+ à l'intérieur des neurones, en présence de concentrations anormalement élevées de glutamate extracellulaire, ce qui provoque la mort neuronale. Ces antagonistes non compétitifs du NMDA se fixent sur le récepteur de la phencyclidine (PCP) et bloquent ainsi l'entrée des ions Ca2+.

Toutefois, ces molécules n'agissent pas sur la concentration extracellulaire en glutamate, et sont surtout susceptibles d'être utilisées dans les cas d'urgences dans le cadre du traitement des pathologies aiguës susmentionnées.

Des travaux italiens récents tendent à démontrer que la libération de radicaux libres issus de l'oxygène, qui accompagne la libération de glutamate, pourrait amplifier l'action délétère de ce dernier (Volterra A et al. Reactive oxygen species inhibit high-affinity glutamate uptake : molecular mechanism and neuropathological implications. Ann. N. Y. Acad. Sci. 738,153-162 (1994). Volterra A et al. Glutamate uptake is inhibited by arachidonic acid and oxygen radicals via two distinct and additive mechanisms. Mol. Pharmacol. 46, 986-992 (1994). Volterra A et al. Glutamate uptake inhibition by oxygen free radicals in rat cortical astrocytes. J. Neurosci. 14,2924-2932 (1994). Volterra A

et al. Inhibition of high-affinity glutamate transport in neuronal and glial cells by arachidonic acid and oxygen-free radicals. Molecular mechanisms and neuropathological relevance. Ren Physiol Biochem 17,165-167 (1994)).

En effet, le transporteur astrocytaire du glutamate, qui est le principal mécanisme de retrait du glutamate extracellulaire par recapture, est inhibe par l'action des radicaux. Il en résulte une accumulation de glutamate non seulement due à une libération importante mais également, peut-être de façon prédominante, à une non-capture.

Les radicaux dans le système nerveux central (SNC) font actuellement l'objet de très nombreux travaux. De nombreuses molécules souvent d'origine naturelle comme la vitamine E, la vitamine C, la mélatonine, les dérivés de ginkgo biloba, le glutathion sont proposées comme capteurs de radicaux de même que des molécules d'origine synthétique. Le principal problème à résoudre est le tropisme de ces structures pour le SNC. Comme la chaine de formation des radicaux débute en général par la production d'anion supéroxyde et qu'une enzyme assez ubiquitaire (supéroxyde dismutase, SOD) est chargée de les détruire au cours d'un métabolisme normal, de nombreuses recherches s'y intéressent. Des travaux essaient d'utiliser directement cette enzyme convenablement vectorisée. C'est notamment l'une des voies envisagées pour le traitement de la sclérose latérale amyotrophique d'origine familiale (Ikeda K. et al., 1995,5 (5), 383-390). II faut noter cependant que ces techniques de vectorisation d'enzymes s'adressent plutôt à des actions intracellulaires, et sont donc susceptibles d'être accompagnées d'effets secondaires importants.

La présente invention a pour but de fournir des composés dont les principales propriétés sont celles : -de pénétrer facilement et rapidement le SNC (composés lipophiles passant la barrière hématoencéphalique), -de posséder de préférence une faible affinité, voire aucune affinité, pour le récepteur de la PCP, -de ne pas pénétrer dans les cellules (ayant donc une action extracellulaire), ce qui limite leur domaine d'action donc leurs effets secondaires éventuels, -et d'être capables de protéger le (s) transporteur (s) de glutamate des astrocytes, en agissant en tant que capteurs de radicaux libres issus de t'oxygène dans 1'espace extracellulaire du SNC. De cette façon, en protégeant les transporteurs non encore inhibés, la recapture de glutamate astrocytaire demeure active, capable donc de limiter les taux de glutamate et, par conséquent, les effets neurotoxiques.

Il convient de souligner que 1'expression SNC utilisée dans ce qui précède et ce qui suit, comprend le cerveau, le cervelet et la moelle épinière.

L'invention a également pour but de fournir des compositions pharmaceutiques susceptibles d'être utilisées dans le cadre du traitement de pathologies affectant le SNC et dans lesquelles sont impliquées des concentrations anormalement élevées de glutamate extracellulaire.

L'invention a également pour but de fournir des procédés de préparation desdits composés et compositions pharmaceutiques.

L'invention a pour objet les composés ayant les propriétés susmentionnées, et de formule générale (I) suivante : dans laquelle : -RI et R2 indépendamment l'un de l'autre représentent un atome d'hydrogène, un groupe alkyle de 1 à 5 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, un groupe hydroxyle, un atome d'halogène, notamment un atome de chlore, brome, iode ou fluor, ou RI et R2 forment, en association avec les atomes de carbone qui les portent, un cycle, aromatique ou non, substitué ou non, de 4 à 8 atomes de carbones dans le cycle, notamment un cycle benzénique, -R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle de 1 à 5 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, -X et Y indépendamment l'un de l'autre représentent CH2, ou un hétéroatome tel qu'un atome de soufre S, ou un groupe de formule dans laquelle R4 et Rs représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle de 1 à 5 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, ou R4 et Rs forment en association avec l'atome d'azote qui les porte un hétérocycle, aromatique ou non, substitué ou non, de 4 à 8 atomes de carbone dans le cycle, comportant le cas échéant un hétéroatome supplémentaire dans le cycle, notamment un cycle de formule

dans laquelle A représente : . un groupe dans lequel Z représente CH ou N, R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle de 1 à 5 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, ou un groupe hydroxyle, ou un hétéroatome tel que O ou S.

L'invention concerne plus particulièrement les composés de formule (I) susmentionnée dans laquelle l'un au moins de X ou de Y représente un groupe de formule dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus.

L'invention a plus particulièrement pour objet les composés de formule (I) susmentionnée, dans laquelle : -R1 et R2 représentent un atome d'hydrogène, ou RI et R2 forment en association avec les atomes de carbone qu'ils portent un cycle benzénique, -R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle de l à 5 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, -l'un de X ou de Y représente un groupe de formule dans laquelle R4 et Rs représentent un atome d'hydrogène, ou R4 et Rs forment en association avec l'atome d'azote qui les porte un hétérocycle de formule :

dans laquelle A représente : . un groupe dans lequel Z représente CH ou N, R6 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, ou un groupe hydroxyle, . ou un hétéroatome tel que O ou S.

L'invention a plus particulièrement pour objet encore les composes tels que définis ci-dessus, de formule (II) suivante : dans laquelle R3, R4, et Rs ont les significations indiquées ci-dessus, et Y représente CH2 ou un atome de soufre S.

Des composés de formule (II) particulièrement préférés sont ceux représentés par les formules suivantes :

Un composé de formule (II) particulièrement préféré, est le composé IC023 représenté par la formule suivante : Un autre composé de formule (II) particulièrement préféré, est le composé IC 180 représente par la formule suivante : L'invention a plus particulièrement pour objet encore les composés tels que définis ci-dessus, de formule (III) suivante :

dans laquelle R3, R4 et Rs ont les significations indiquées ci-dessus.

Des composés de formule (III) particulièrement préférés sont ceux représentés par les formules suivantes : L'invention a plus particulièrement pour objet encore les composés tels que définis ci-dessus, de formule (IV) suivante : dans laquelle R3, R4, et Rs ont les significations indiquées ci-dessus.

Des composes de formule (IV) particulièrement préférés sont ceux représentés par les formules suivantes :

L'invention a plus particulièrement pour objet encore les composés tels que définis ci-dessus, de formule (V) suivante : Des composés de formule (V) particulièrement préférés sont ceux représentés par les formules suivantes : L'invention a également pour objet l'utilisation d'au moins un composé de formule générale suivante

dans laquelle : -R1 et R2 sont tels que définis ci-dessus, -X, Y, U et V, indépendamment l'un de l'autre, représentent CHR3, R3 étant tel que défini ci-dessus, ou un hétéroatome tel qu'un atome de soufre S, l'un au moins de X, Y, U ou V, représente un groupe de formule dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, pour la préparation d'un médicament (neuroprotecteur) destiné au traitement de pathologies liées à des concentrations anormalement élevées de glutamate extracellulaire.

L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) décrite ci-dessus dans laquelle l'un au moins de X ou Y représente un groupe de formule dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, et notamment les composés décrits ci-dessus de formules (II), (III), (IV) et (V).

Parmi les pathologies susceptibles d'être traitées dans le cadre de la présente invention, on peut citer : -les cas pathologiques aigus de mort neuronale tels que : . les ischémies, notamment celles causées par les hémorragies cérébrales, les caillots sanguins, les accidents vasculaires cérébraux (AVC) tels que ceux provenant d'accidents cardiaques, ou encore les spasmes artériels causés par un manque d'alimentation des cellules, . les traumatismes du système nerveux central en général, notamment ceux de la moelle épinière, l'attaque cérébrale (STROKE), les effets de toxiques exogènes sur le SNC, -les affections chroniques neurodégénératives telles que : . la maladie d'Alzheimer,

la maladie de Parkinson, . la chorée de Huntington, . la sclérose latérale amyotrophique, les effets du vieillissement.

L'invention a également pour objet toute composition pharmaceutique, comprenant, à titre de principe actif, au moins un composé tel que décrit ci- dessus, le cas échéant sous forme de sel, notamment de chlorhydrate, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

Avantageusement, les compositions pharmaceutiques susmentionnées de l'invention se présentent sous une forme administrable par voie orale, parentérale ou rectale.

Les doses de principe actif dans lesdites compositions pharmaceutiques sont avantageusement comprises entre environ 0,1 à environ 50 mg/kg/jour.

L'invention a plus particulièrement pour objet toute composition pharmaceutique telle que décrite ci-dessus, caractérisée en ce que : -le dosage des formes administrables par voie parentérale dans le cadre du traitement des affections aiguës est compris entre 0,1 à 10 mg/kg/jour par voie intraveineuse, et entre 0,5 à 30 mg/kg/jour par voie intramusculaire, -le dosage des formes administrables par voie orale ou parentérale dans le cadre du traitement des affections chroniques est compris, respectivement, entre 5 à 50 mg/kg/jour per os, et entre 0,1 à 5mg/kg/jour par voie intramusculaire.

Avantageusement, les composés susmentionnés de l'invention peuvent être obtenus par mise en oeuvre des procédés de préparation suivants : 1) les composés de formule (II) dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, Y représente CH2 et R3 représente un atome d'hydrogène, à savoir les composés de formule (IIa) suivante : sont obtenus par le procédé comprenant les étapes suivantes : -réaction du thiophène et de l'anhydride succinique, avantageusement en présence d'AlC13 sous agitation pendant environ 5 heures à température

ambiante, ce qui conduit à l'obtention du compose (1), selon le schéma réactionnel suivant : -traitement du composé (1) ainsi obtenu par de 1'hydrazine en présence de potasse sous agitation avantageusement pendant environ 7 heures à 190°C, ce qui conduit à l'obtention du composé (2) suivant : -cyclisation du composé (2) ainsi obtenu par traitement de ce dernier par de l'anhydride acétique en présence d'acide orthophosphorique avantageusement pendant environ 2 heures 30 minutes à 120°C, ce qui conduit à l'obtention du composé (3) suivant : -réaction entre le composé (3) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4R5, dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (IIa) susmentionnée, 2) les composés de formule (II) dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, Y représente un atome de soufre S, et R3 représente un atome d'hydrogène, à savoir les composés de formule (IIb) suivante :

sont obtenus par le procédé comprenant les étapes suivantes : -réaction du thiophène et du soufre, avantageusement en présence de n- butyllithium sous agitation pendant environ 1 heure à 0-5°C, ce qui conduit à l'obtention du composé (4) suivant : -traitement du composé (4) ainsi obtenu par de 1'acide 3- bromopropanoïque, avantageusement sous agitation pendant environ 24 heures à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (5) suivant : -cyclisation du composé (5) ainsi obtenu par traitement de ce dernier par de l'anhydride trifluoroacétique avantageusement pendant environ 3 heures 30 minutes à 36°C, ce qui conduit à l'obtention du composé (6) suivant : -reaction entre le composé (6) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4Rs, dans laquelle R4 et R5 sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (IIb) susmentionnée, 3) les composés de formule (II) dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, Y représente CH2 ou un atome de soufre S, et R3 représente

un groupe alkyle de 1 à 5 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, à savoir les composés de formule (IIc ; Y = CH2), et les composés de formule (IId ; Y = S) suivantes : sont respectivement obtenus par les procédés a) et b) comprenant les étapes suivantes : a)-traitement du composé (3) susmentionné avec un halogène d'alkyle de formule XR3 dans laquelle X représente un atome d'halogène, notamment un atome d'iode, et R3 est tel que défini ci-dessus, sous agitation, avantageusement pendant environ 2 heures à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (7) suivant : -réaction entre le composé (7) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4Rs, dans laquelle R4 et R5 sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (IIc) susmentionnée, b)-traitement du composé (6) susmentionné avec un halogène d'alkyle de formule XR3 dans laquelle X représente un atome d'halogène, notamment un atome d'iode, et R3 est tel que défini ci-dessus, sous agitation, avantageusement pendant environ 2 heures à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (8) suivant :

-réaction entre le composé (8) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4R5, dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (IId) susmentionnée, 4) les composés de formule (III) dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, et R3 représente un atome d'hydrogène, à savoir les composés de formule (IIIa) suivante : sont obtenus par : -traitement du composé (3) susmentionné par de l'hydrazine en présence de potasse sous agitation, avantageusement pendant environ 8 heures à 190°C, puis par une hydrolyse à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (9) suivant : -traitement du composé (9) ainsi obtenu par du nitrate de cérium IV sous agitation, avantageusement pendant environ 2 heures à-15 -C puis environ 2 heures supplémentaires à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (10) suivant :

-réaction entre le compose (10) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4R5, dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (IIIa) susmentionnée, 5) les composés de formule (III) dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, et R3 représente un groupe alkyle de 1 à 5 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, à savoir les composés de formule (IIIb), et les composés de formule (IIIc) suivantes : sont obtenus par : a)-traitement du composé (10) susmentionné avec un halogène d'alkyle de formule XR3 dans laquelle X représente un atome d'halogène, notamment un atome d'iode, et R3 est tel que défini ci-dessus, sous agitation, avantageusement pendant environ 2 heures à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (11) suivant : -réaction entre le composé (11) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4R5, dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (IIIb) susmentionnée, b)-traitement du composé (7) susmentionné par de l'hydrazine en présence de potasse sous agitation, avantageusement pendant environ 8 heures à 190°C, puis par une hydrolyse à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (12) suivant :

-traitement du composé (12) ainsi obtenu par du nitrate de cérium IV sous agitation, avantageusement pendant environ 2 heures à-15°C puis environ 2 heures supplémentaires à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (13) suivant : -réaction entre le composé (13) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4RS, dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (IIIc) susmentionnée, 6) les composés de formule (IV) dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, et R3 représente un atome d'hydrogène, à savoir les composés de formule (IVa) suivante : sont obtenus par : -réaction du benzothiophène et du soufre, avantageusement en présence de n-butyllithium sous agitation pendant environ 1 heure à 0-5°C, ce qui conduit à l'obtention du composé (14) suivant :

-traitement du composé (14) ainsi obtenu par de l'acide 3- bromopropanoïque, avantageusement sous agitation pendant environ 24 heures à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (15) suivant : -cyclisation du composé (15) ainsi obtenu par traitement de ce dernier par de l'anhydride trifluoroacétique avantageusement pendant environ 3 heures 30 minutes à 36°C, ce qui conduit à l'obtention du composé (16) suivant : -réaction entre le composé (16) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4Rs, dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (IVa) susmentionnée, 7) les composés de formule (V) dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, et R3 représente un atome d'hydrogène, à savoir les composés de formule (Va) suivante :

sont obtenus par : -réaction du benzothiophène et de l'anhydride succinique, avantageusement en présence d'AIC13 sous agitation pendant environ 5 heures à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (17), selon le schéma réactionnel suivant : -traitement du composé (17) ainsi obtenu par de l'hydrazine en présence de potasse sous agitation avantageusement pendant environ 6 heures à 180°C, ce qui conduit à l'obtention du composé (18) suivant : -cyclisation du composé (18) ainsi obtenu par traitement de ce dernier par de l'anhydride acétique en présence d'acide orthophosphorique avantageusement pendant environ 7 heures à 130°C, ce qui conduit à l'obtention du composé (19) suivant :

-réaction entre le composé (19) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4R5, dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (Va) susmentionnée, 8) les composés de formule (IV) dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, et R3 représente un groupe alkyle de 1 à 5 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, à savoir les composés de formule (IVb) suivante : sont obtenus par : -traitement du composé (16) susmentionné avec un halogène d'alkyle de formule XR3 dans laquelle X représente un atome d'halogène, notamment un atome d'iode, et R3 est tel que défini ci-dessus, sous agitation, avantageusement pendant environ 2 heures à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (20) suivant : -réaction entre le composé (20) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4R5, dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (IVb) susmentionnée, 9) les composés de formule (V) dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, et R3 représente un groupe alkyle de 1 à 5 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, à savoir les composés de formule (Vb) suivante :

sont obtenus par : -traitement du composé (19) susmentionné avec un halogène d'alkyle de formule XR3 dans laquelle X représente un atome d'halogène, notamment un atome d'iode, et R3 est tel que défini dans ci-dessus, avantageusement pendant environ 2 heures à température ambiante, ce qui conduit à l'obtention du composé (21) suivant : -réaction entre le composé (21) ainsi obtenu et un composé de formule HNR4Rs, dans laquelle R4 et Rs sont tels que définis ci-dessus, avantageusement sous forme d'un sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) pendant environ 5 jours à environ 80°C, ce qui conduit à l'obtention des composés de formule (Vb) susmentionnée.

L'invention sera davantage illustrée à l'aide de la description détaillée qui suit d'exemples de synthèse de composés de l'invention, et d'étude de leurs propriétés de capture des radicaux OH-, et de leurs effets sur la recapture du glutamate par les astrocytes. a) exemples de synthèse de composés de l'invention Les produits finaux ont été obtenus à partir des dérivés cétoniques correspondants par réaction d'amination réductrice. C'est pourquoi t'élaboration des différentes cétones nécessaires est abordée avant les réactions d'amination elles mêmes.

!-Synthèse des dérivés cétoniques

A) oxo-4-tétrahydro-4,5,6,7-benzothiophène a) acide 4-(2-thiényl)-4-céto-butyrique Dans un tricoi sous atmosphère d'azote, muni d'un agitateur magnétique et refroidi au bain de glace on place 3,57 g (0,036 mole) d'anhydride succinique, 10.46 g (0, 036 mole) d'AICl3 ainsi que 35 ml de nitrobenzène. On introduit alors goutte à goutte 2,85 ml (0,036 mole) de thiophène dissous dans 17ml de nitrobenzène. Le milieu jaune devient brun hétérogène au cours de l'addition.

L'agitation est maintenue 5h à température ambiante. Le milieu refroidi au bain de glace est hydrolyse par 25 ml d'HCl 36 % dilué dans 20 ml d'eau glacée. Le nitrobenzène est entraîné à la vapeur et le résidu restant est repris dans une solution de Na2CO3. Un nouvel entraînement à la vapeur élimine les produits volatils et le solvant restant. La phase aqueuse est acidifiée puis extraite à l'éther qui est séché sur MgSO4 et concentré. L'acide est obtenu sous forme de 3, 6 g de paillettes jaune clair brillantes après recristallisation dans l'eau. Rendement = 55 'S0.

RMN 1H (DCl3) # ppm : 7,77 (d, 1H, H5') ; 7,66 (d, 1H, H3') ; 7, 15 (m, 1H, H4') : 3,28 (t, 21-13) ; 2,82 (t, 2H, H2).

RMN 13c (CDC13) 6 ppm : 192,27 (C4) ; 180 (C1) ; 144,54 (C2') ; 133,7 ( C3') ; 132,04 (C5') ; 128,071 (C4') ; 33,58 (C3) ; 27,87 (C2). b) acide 4- (2-thiényl)-butyrique Dans un bicol muni d'un agitateur magnétique on place 3,6 g (0,019 mole) d'acide 4- (2-thiényl)-4-céto-butyrique, 2,74 ml (0,07 mole) d'hydrazine 98%, 3,69 g (0, 066 mole) de potasse ainsi que 42 ml de diéthylène glycol. Le milieu est

chauffé 7h à 190°C. Le milieu est jaune limpide homogène. Revenu à température ambiante, on hydrolyse par 200 ml d'eau. Le diéthylène glycol est extrait par 5 fois 100 ml d'éther. La phase aqueuse est alors acidifiée jusqu'à pH 1 et extraite.

L'acide est repris dans une solution de soude 5 % lavée à l'éther puis acidifié et repris une dernière fois dans l'éther que l'on sèche sur MgS04 et concentre. On obtient 2,74 g d'une huile jaune clair. Rendement = 85 %.

RMN IH (CDC13) 6 ppm : 7,15 (d, 1H, H3') ; 6,96 (t, III, 1-14') ; 6,84 (d, IH, H5') ; 2*93 (t, 211, H2) ; 2,45 (t, IHt H4) ; 2,04 (q, 2H, H3).

RMN 13c (CDC13) 6 ppm : 143,63 (Cl); 127,27 (C3') : 124,84 (C5') ; 123 (C4') : 33. 3 (C2); 28, 48 (C4) ; 26,06 (C3). c) oxo-4 tétrahydro-4,5,6,7-benzothiophène 1) Dans un bicol muni d'un agitateur magnétique, on place 2,74 g (0.023 mole) d'acide 4-(2-thiényl)-butyrique dissous dans 3,91 ml d'anhydride acétique en présence de 0,08 ml d'acide orthophosphorique à 85 %. Le milieu rouge-brun homogène est chauffé à 120°C durant 2h30. Refroidi au bain de glace. le milieu est hydrolyse par 20 ml d'eau. La phase aqueuse est basifiée par une solution de soude à 20 % et est extraite par 3 fois 12 ml de CH2CI2. La phase organique est rincée à 1'eau jusqu'à pH 7, séchée sur MgS04 et concentrée. On obtient 2,23 g de solide blanc recristallisé dans l'éther de pétrole. Rendement = 65 % 2) Dans un tricol sous atmosphère d'azote, muni d'un agitateur magnétique et d'une ampoule d'addition, on place 1 g (0,006 mole) d'acide 4-(2-thiényl)- butyrique dissous dans 5 ml d'éther anhydre. On ajoute alors goutte à goutte une solution de 0,51 ml (0,007 mole) de chlorure de thionyle dissous dans 1 ml d'éther anhydre. Le milieu orange-brun est placé 4h au reflux. L'éther et le chlorure de thionyle en excès sont distillés. Le résidu est repris dans quelques millilitres de CS2 puis est refroidi au bain de glace. On ajoute lentement 0,67 ml (0,006 mole) de SnC14 dissous dans 5 ml de CS2. Le milieu devenu noir hétérogène est vivement agité à température ambiante durant une nuit. Le milieu rouge-noir est décomposé sur glace et 20 ml d'HCl 5 %. Le CS2 est concentré puis la phase

aqueuse est extraite par 3 fois 10 ml d'ether. La phase organique est lavée à) a soude 5 %. à l'eau, séchée sur MgS04 et concentrée. On obtient 550 mg de solide blanc recristallisé dans l'éther de pétrole. Rendement = 62 % RMN #ppm:7,24-7,21(d,1H,d,1H,H2-H3)J23=0,34;3,04(t,1H,(CDCl3) H5) ; 2 57 (m, 1H, H7) ; 2,22 (m, 1H, H6).

RMN C (CDC13) 5 ppm : 193, 33 (C4) ; 155,75 (C9) ; 136, 97 (C8) ; 124.8 (C2) ; 122,4 (C3) : 38,18 (C7) ; 25,45 (C5) ; 24,24 (C6).

B) oxo-7-tetrahydro-4,5,6,7-benzothiophène a) tetrahydro-4,5,6,7 benzothiophène Dans un tricol muni d'un agitateur magnétique, on place 1,1 g (0,007 mole) d'oxo-4-tétrahydro-4, 5,6,7 benzothiophène, 0,96 ml (0,028 mole) d'hydrazine 98 %, 1. 36 g (0,024 mole) de potasse dissous dans 20 ml de diéthylène glycol. Le milieu est placé 8h à 190°C. Revenu à température ambiante, le milieu est hydrolyse par 100 ml d'eau. La phase aqueuse est extraite à l'éther qui est lavé plusieurs fois par de petites quantités d'eau, séché sur MgS04 et concentré. On obtient 950 mg d'huile transparente. Rendement = 95 % RMN 1H (CDCl3) # ppm : (d, IH, d, IH, H2-H3) J23=0, 29 : 2.75-2,63 (t, 2H, t, 2H, H4-H7) ; 1,82 (m, 4H, H5-H6).

RMN 13c (CDC13) 6 ppm : 129,18 (C9), 125,98 (C8), 123,31 (C3), 119.62 (C2), 25. 49 (C4). 24,87 (C7), 23,63 (C5), 22,88 (C6).

b) oxo-7-tetrahydro-4,5,6, 7-benzothiophène Dans un tricol muni d'un agitateur magnétique, d'une ampoule d'addition et refroidi à-15°C, on place 1 g (0,0072 mole) de tétrahydro-4, 5, 6,7-benzothiophène dissous dans 35 ml d'un mélange AcOH/H2O (50/50). On ajoute goutte à goutte 15,88 g (0,03 mole) de nitrate de cérium IV dissous dans 70 ml d'AcOH/H2O (50/50). Tout au long de l'addition le milieu doit rester jaune clair (voire légèrement orangé). Après 2h d'agitation à - 15°C on laisse revenir à température ambiante et agiter 2h supplémentaires. Le milieu est alors jaune intense. Le milieu est dilué par 50 ml d'eau puis est extrait à l'éther. La phase organique est lavée à la soude 5 %, à 1'eau, séchée sur MgSO4 et concentrée. L'huile obtenue est chromatographiée sur silice, éluant EP/Et2O (60/40), pour donner 800 mg d'huile jaune. Rendement = 72 %.

RMN IH (CDC13) â ppm : 7,62-6,98 (d, 1H, d, 1H, H2-H3) J23=0,63; 2,89 (t, 2H, H6); 2, 62 (t, 2H, H4) ; 2,18 (q, 2H, H5).

RMN 13C (CDC13) å ppm : 170,8 (C7) ; 153,13 (C8) ; 136, 27 (C9) ; 133,702 (C2) ; 128,152 (C3) ; 38,09 (C6) ; 25,87 (C4) ; 24,26 (C5).

C) oxo-4-méthyl-5-tétrahydro-4,5,6,7-benzothiophène Dans un tricol sous atmosphère d'azote, muni d'un agitateur magnétique et d'une ampoule d'addition, on place 3, 68 ml (0, 026 mole) de diisopropylamine dissous dans 20 ml de THF anhydre. On ajoute goutte à goutte 16,42 ml (0, 026 mole) de n-butylllithium à 1,6 M dans l'hexane. L'introduction terminée le milieu est agité

une demie heure à température ambiante. Le milieu est refroidi à-80°C puis 4 g (0,026 mole) d'oxo-4-tétrahydro-4,5,6,7-benzothiophène dissous dans 3 ml de THF sont ajoutes. La température est lentement ramenée à-30°C (maintenue une dizaine de minutes). Le milieu est ensuite refroidi à-78°C pour l'introduction en une seule fois de 4,9 ml (0,078 mole) d'iodure de méthyle. Le milieu est agité 2h à température ambiante. On hydrolyse par 30 ml d'eau glacée. Le THF est concentré puis la phase aqueuse est extraite à l'éther qui est séché sur MgSO4 et concentré.

On obtient 4,09 g d'huile transparente. L'huile est chromatographiée en HPLC préparative sur 250 g de silice 0,04 mm - éluant : heptane. Une fraction de 1 g de mélange des produits mono-et di-méthylés est isolée suivie d'une fraction de 2, 3 g de produit monométhylé pur. Enfin la cétone de départ est récupérée. Taux de transformation = 72 %. Rendement en monométhylé isolé = 52 %.

RMN III (CDCI3) 5 ppm : 7,38-7, 06 (2d, 2H, H2-H3) J23=0, 32 ; 3.07 (m, 2H, H7) ; 2, 61-2, 3-2.08 (3m 3H, H5-H6), 1,26 (d, 3H, Me).

RMN 13C (CDC13) å ppm : 196,5 (C4) ; 155,9 (C8) ; 136.4 (C9) ; 124, 33 (C3) ; 123,079 (C2) ; 41, 35 (C5) ; 32,51 (C7) ; 24,53 (C6) ; 14,83 (C10).

D) oxo-4-tetrahydro-4,5,6,7-thio-7-benzothiophène a) acide S- (2'-thiophényl)-3-thio-propanoique Dans un tricol sous atmosphère inerte, muni d'une agitation magnétique, d'une ampoule d'addition et refroidi à 0°C à l'aide d'une machine à froid on place 6,7 ml (0,083 mole) de thiophène dissous dans 40 ml de THF. On ajoute goutte à goutte 49 ml (0,079 mole) de n-butyllithium 1,6M dans l'hexane de telle manière que la température reste inférieure à 20 °C. Après une heure d'agitation à 0-5°C on ajoute en 20 min 2,51 g (0,079 mole) de soufre préalablement séché à l'étuve ; on laisse agiter 2h. puis le milieu est hydrolyse par 16 ml d'eau purgée à l'azote ; la température reste inférieure à 10 °C et le milieu est jaune intense. Dans un autre bicol une solution de 4,8 g de K2C03 dissous dans 16 ml d'eau est purgée à 1'azote. On ajoute par spatulée 10,94 g d'acide 3-bromo-propanoïque et laisse agiter jusqu'à ce que le milieu soit limpide. Cette solution est alors ajoutée goutte à goutte au premier milieu tout en maintenant la température inférieure à 5°C ; le

milieu devenu vert est agite 24h à température ambiante. Le Tlll concentré, la phase aqueuse est lavée par 10 ml de toluène, acidifiée par 16 ml d'IICl 6N puis extraite par 3 fois 40 ml de toluène. La phase organique est concentrée, l'eau restante est éliminée par un deuxième entraînement azéotropique réalisé avec 20 ml de toluène. On obtient 13,5 g d'huile jaune. Rendement = 86 %.

RMN 1H (CDCl3) # ppm : 9,61 (s, 1H, acide) ; 7,39 (d, 1H. H5') ; 7,18 (d, IH, H3') : 7.00 (q, 1H, H4) ; 3,02 (t, 1H, H3) ; 2,68 (t, 1H, H2).

RMN 13C (CDCl3) 8 ppm : 177,84 (Cl) ; 134,82 (C5') ; 132.66 (C2') ; 130.09 (C3') : 127.62 (C4') ; 34,22 (C3) ; 33, 14 (C2). b) oxo-4-tétrahydro-4,5,6, 7-thio-7-benzothiophène Dans un bicol sous azote, muni d'une agitation magnétique, on place 13,5 g (0,072 mole) d'acide S- (2'-thiophényl)-3-thio-propanoïque et ajoute lentement 11 ml d'anhydride trifluoroacétique. Le milieu devenu noir est placé 3h30 à 36°C. On refroidit au bain de glace, hydrolyse par 50 ml d'eau puis basifie la solution jusqu'à pH9. La phase aqueuse est extraite au toluène qui est à son tour lavé à l'eau puis concentré. Le produit obtenu est rapidement chromatographié sur silice- éluant EP/Et2O (50/50). On obtient 10 g de solide jaune clair qui une fois recristallisé dans l'éther de pétrole donne 8,5 g de cristaux blancs. (lors de la <BR> <BR> <BR> recristallisation quelques traces de produit oxo-7 sont éliminés). Rendement = 70%.

RMN IH (CDC13) â ppm : (2d, 2H, H2-H3) ; 3,37 (t, 11H, H6) ; 2,87 (t.

2H,H4).

RMN13C (CDC13) å ppm : 188,96 (C4), 150,91 (C9), 135,00 (C8), 126,08 (C3).

121, 81 (C2), 38, 16 (C6), 30,04 (C5).

E) synthèse oxo-1-tétrahydro-1,2,3,4-thio-9-fluorene a) acide 4-oxo-4-(3'-benzothiophényl)-butyrique Dans un tricot sous atmosphère d'azote, muni d'une agitation magnétique et refroidi au bain de glace, on place 16 g (0,119 mole) de benzothiophène, 11,9 g (0.19 mole) d'anhydride succinique dissous dans 250 ml de dichlorométhane Le milieu est transparent hétérogène. On introduit en 40 minutes 32 g (0.24 mole) d'A ! Cl3, le milieu est alors rouge-noir hétérogène et très épais. L'introduction finie on agite lh à 0°C puis une nuit à température ambiante. Le milieu est hydrolyse par 30 ml HCl 36 % dilué dans 40 ml de glace. L'agitation devient très difficile.

La phase organique est lavée à 1'eau puis extraite par une solution de carbonate de sodium. La phase aqueuse est chauffée en présence de charbon actif, filtrée puis acidifiée et extraite au dichlorométhane. Cette dernière phase est séchée sur MgS04 et concentrée. On obtient 18 g d'huile jaune très épaisse qui cristallise à froid. Le produit majoritaire est le produit désiré mais un tiers est alkylé en position 2'du benzothiophène ; les deux produits seront séparés ultérieurement.

Rendement global = 65 %.

RMN 1H (Acétone d6) 8 ppm : 8,73 (d, 11-1, H4') ; 7,96 (d, 1H, H7') ; 7,45 (m, 2H, H5'-H6') ; 3, 36 (t, 2H, H3) ; 2,76 (t, 2H, H2).

RMN 13C (Acétone d6) 8 ppm : 194,9 (C4), 174,57 (Cl), 140,095 (C9) ; 138,72 (C8) ; 137,61 (C2) ; 135,49 (C3) ; 14 (C4-C5-C7) ; 123,28 (C6) ; 35, 32 (Cl 1) ; 28, 30 (C12). b) acide 4- (3'-benzothiophényl)-butyrique

Dans un bicol muni d'un agitateur magnétique, on place 18 g (0,077 mole) d'acide 4-oxo-4- (3'-benzothiophényl)-butyrique, 11,12 ml (0 3 mole) d'hydrazine 98 %. 16,8 (0, 3 mole) de potasse dissous dans 150 ml de diéthylène glycol. Le milieu est chauffé 6h à 180°C. Le milieu est repris à 1'eau, lavé à l'éther puis acidifié jusqu'à pH 1 et extrait à l'éther, La phase organique est lavée à 1'eau, séchée sur MgSO4 et concentrée. On obtient 11, 11 g d'huile orange. Rendement = 60 %.

RMN (CDCI3) 5 ppm : 7,76-7,67 (2d, 2H, H4'-H7') ; 7. 35 (m, 3H, H2'-H5'- H6') ; 3,02 (t, 2H, H2) ; 2,49 (t, 2H, H4) ; 2,14 (q, 2H, H3).

RMN 13c (CDC13) 6 ppm : 179,14 (Cl) ; 144,8 (C9') ; 140,04 (C8') ; 139,3 (C3') ; (C2', C4', C5', C6', C7') c) oxo-1-tétrahydro-1, 2, 3,4 thio-9-fluorène 1) Dans un bicol sous atmosphère d'azote, muni d'un agitateur magnétique, on place 11, 11 g (0,05 mole) d'acide 4- (3-benzothiophényl)-butyrique, 8,65 g d'anhydride acétique ainsi que 0,17 ml d'acide orthophosphorique à 85 %. Le milieu est placé 7h à 130°C. On hydrolyse par 10 ml d'eau glacée et extrait la cétone à l'éther. La phase organique est lavée à la soude 10 % puis à 1'eau jusqu'à pI-I 7, séchée sur MgS04 et concentrée. On obtient 10,37 g de solide rouge.

Ce solide est rapidement chromatographié sur silice et élue par un mélange EP/Et2O (60/40). On obtient 9 g de solide blanc contenant 25 % de dérivé oxo-4

et 75 % de dérivé oxo-1. Rendement = 60 %. Le produit pur est obtenu par chromatographie sur silice, éluant EP/Acétone (9/1). puis recristallisation de la fraction enrichie en dérivé oxo-1 dans l'éther.

2) Dans un bicol sous atmosphère d'azote, muni d'un agitateur magnétique, on place 5,7 g (0,026 mole) d'acide 4- (3-benzothiophényl) butyrique dans 10 ml de toluène. On ajoute goutte à goutte 6,1 ml (0,028 mole) d'anhydride trifluoroacétique Le milieu devient noir. Après 24h d'agitation à température ambiante la réaction est arrêtée. Traitée comme précédemment, on obtient 5,2 g d'un solide rougeâtre puis après chromatographie rapide 5 g de solide blanc contenant un tiers de dérivé oxo-4 et 2/3 de dérivé oxo-1. Rendement = 65 % RMN 1H (CDC13) b ppm : 8,61 (d, 1H, H5) ; 7,56 (d, 1H, H8) ; 7, 31 (m, 2H, H6- H7) ; 2,85 (t, 2H, H4) ; 2,46 (t, 2H, H2) ; 2,03 (m, 2H, H3).

RMN 13c (CDC13) o ppm : 193,18 (Cl) ; 159,99 (C9a) : 137,17 (C4b) ; 137 (C8a) ; 129, 48 (C4a) ; 1-119,9 (C5-C6-C7-C8) ; 35,52 (C4) ; 26,14 (C2) ; 24,00 (Cil).

F) oxo-4-tetrahydro-1,2,3,4-dithio-1,9-fluorène a) acide S- (2'-benzothiophényl)-3-thio-propanoïque Dans un tricol sous atmosphère inerte, muni d'une agitation magnétique, d'une ampoule d'addition et refroidi à-20°C à l'aide d'une machine à froid on place 16,66 g (0,124 mole) de benzothiophène dissous dans 15 ml de THF. On ajoute goutte à goutte 77,8 ml (0,124 mole) de n-butyllithium 1, 6M dans l'hexane en gardant la température entre-25°C et-20°C. A la fin de l'addition, le milieu est orangé onctueux hétérogène et est placé à reflux. Après 2h00, le reflux est arrêté et le lithium est refroidi à-20°C. 3,96 g (0,124 mole) de soufre en poudre préalablement séché à l'étuve sont introduits par spatulées puis l'agitation est maintenue trois heures supplémentaires à 0°C-5°C avant 1'hydrolyse qui s'effectue

par 24 ml d'eau purgée à l'azote. Dans un autre bicol, une solution de 7,18 g de K2CO3 dissous dans 24 ml d'eau est purgée à l'azote. On ajoute par spatulée 16,36 g d'acide 3-bromo-propanoïque et laisse agiter jusqu'à ce que le milieu soit limpide. Cette solution est alors ajoutée goutte à goutte au premier milieu qui se trouve à 0°C, tout en maintenant la température inférieure à 5°C; le milieu rouge biphasique est agité 16hO0 à température ambiante. Le THF concentré, la phase aqueuse est lavée par quelques millilitres de toluène puis est basifiée par HCl 6N avant d'être extraite au toluène. La phase organique est concentrée (I'eau restante est éliminée azéotropiquement par quelques millilitres de toluène supplémentaires). On obtient 29,35 g (0,123 mole) de solide jaune clair.

Rendement quantitatif.

RMN H (CDC13) 5 ppm : 7,74 (m, 2H, H4'-H7'), 7, 36 (m, 3H, H3'-H5'-H6'), 3.14 (t, 1H, H3). 2.74 (t, I H, H2).

RMN13C (CDC13) 6 ppm : 177,34 (C1), 141,98 (C9'). 139, 53 (C8'), 135. 11 (C2').

129,90 (C3'). 124, 64 (C5'), 124,47 (C6'), 123,22 (C7'), 121, 86 (C4'), 32,24 (C3), 31 *92 (C2). b)oxo-4-tétrahydro-1, 2, 3, 4-dithio-1, 9-fluorène Dans un tricol sous atmosphère inerte muni d'une agitation magnétique et d'une ampoule d'addition sont ajoutés goutte à goutte 40 ml d'anhydride trifluoroacétique sur 29,35 g (0,123 mole) d'acide S- (2'-benzothiophényl) 3-thio- propanoique dissous dans 90 ml de toluène. Le milieu est placé à 40°C pendant 3h30, puis on refroidit au bain de glace, hydrolyse par 50 ml d'eau puis basifie la solution jusqu'à pH 9. La phase aqueuse est extraite au toluène qui est à son tour lavé à 1'eau puis concentré. On obtient 20 g de solide jaune clair contenant quelques traces de produit 1-oxo (3-alkylation sur le benzothiophène).

Rendement=75%. Le produit secondaire est éliminé par recristallisation dans l'acétate d'éthyle.

RMN Ill (CDC13) 6 ppm : 8,65 (t, 1H, II8), 7,68 (t, IH, H5), 742 (m, 2H, H6- H7), 3,42 (t, 2H, H2), 2,97 (t, 2H, H3).

RMN13C (CDC13) 6 ppm : 189,30 (C4), 157,1 (C4a), 1 s6,94 (C4b), 136,05 (C8a). 127,32 (C9a), 127,32-125,96 (C6-C7), 124,82-121,0 (C5-C8), 39.04 (C3), 29,82 (C2).

II) Synthèse des dérivés aminés Mode opératoire global Pour les dérivés pipéridine, N-méthyl pipérazine, morpholine et thiomorpholine, on forme dans un premier temps les sels d'acide acétique correspondants : on place I eq d'amine dans de l'éther anhydre et ajoute goutte à goutte un équivalent d'acide acétique (2 eq dans le cas de la N-méthyl pipérazine) dissous dans l'éther. (La formation du sel s'effectue sous azote dans le cas de la thiomorpholine). Après une heure d'agitation on concentre l'éther et sèche le sel une nuit à 40°C sous vide.

Dans le cas de la 4-hydroxypipérazine on forme le sel chlorhydrique dans l'éther chlorhydrique 3N, concentre et sèche une nuit à 40°C sous vide.

Dans un bicol sous azote, muni d'une agitation magnétique et d'une garde à actigel, on place 1 eq de cétone et 10 eq d'amine sous forme de sel d'acide acétique (ou chlorhydrique) dissous dans 20 volumes de MeOH. On ajoute 1,5 eq de NaBH3CN et chauffe 5 jours à 80°C. Le milieu est hydrolyse par de 1'eau glacée, le méthanol est concentré puis la phase aqueuse basique est extraite à l'éther.

L'amine est reprise dans de 1'eau acide (jusqu'à pHl) rincée à l'éther puis basifiée (pH 9) avant d'être une dernière fois extraite à l'éther, qui est alors séché sur MgS04 et concentré. Les dérivés sont purifiés par chromatographie sur alumine neutre-éluant EP/Et2O (60/40). Le passage au chlorhydrate se fait par dissolution de l'amine dans un minimum d'éther et ajout goutte à goutte dans de l'éther chlorhydrique 3N.

A)(IC023) L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole/éther (50/50). Rendement=73%.

Base : RMN 1H (CDCl3) # ppm : 7,10-7,08 (2d, 2H, H2-H3) J23=0, 073ppm ; 3,79 (t, 1H, H4) ; 2,77 à 0,94 (m, 16H, alkyls).

RMN 13C (CDCl3) 8 ppm : 138,32 (C9) ; 137,27 (C8) ; 127,34 (C3) ; 121,07 (C2) ; 61,9 (C4) ; 49,66 (CIO-C14) ; 26,72-25,05-24,94-22,88 (C5-C7-C12-C13-CI4) ; 21,21 (C6) GC-MS : 90°C/10°min/250°C ; 13,74 min ; 221/193/178/137/136/86.

Chlorhydrate : RMN IH (CDC13) õ ppm : 12,072 (s, 1H, ammonium) ; 7,51-7,48 (2d, 2H, H2-H3) J23=0,81 ; 4,6 (t, I H, H4) ; 3,47 à 1,42 (m, 16H, alkyls).

RMN 13c (CDC13) 6 ppm : 142,28 (C9) ; 127,72 (C3) ; 127,63 (C8) ; 123,63 (C2) ; 61,38 (C4) ; 51,66-47,39 (C11-C15) ; 36-22, 26-22,01 (C5-C6-C7- CI4-C12-C13). Pf=I82-183°C.

Microanalyse : théorique : % C (60,28) ; % H (7,84) ; % N (5,45) ; % S (12,44) ; analyse % C (60,497) ; % H (7,724) ; % N (5,322) ; % S (12,542).

B) morpholine-4-tétrahydro-4, 5, 6, 7-benzothiophene (IC180) L'amine brut est recristallisée dans l'éther. Rendement quantitatif.

Base RMN IH (CDC13) õ ppm : 7,05 (t, 2H, H2-H3) ; 3,71 (m, 5H, H4-H12-H14) ; 2,74- 2,55 (m ; 5H ; H7-H11-H15) ; 1,74 (m, 4H, H5-H6).

RMN 13C (CDC13) 6 ppm : 137,2 (C9) ; 136,8 (C8) ; 127 (C3) ; 121, 3 (C2) ; 67.9 (C12-C14) ; 60,7 (C4) ; 49,03 (C11-C15) ; 25,51 (C7) ; 22,75 (C5) ; 22,06 (C6).

Chlorhydrate : RMN IH (CDC13) b ppm : 11,8 (s, 1H, ammonium) ; 7,57-7,54 (2d, 2H, H2-H3) . 123=0,69 ; 4,7 (t, 2H, H12) ; 4,4 (t, 1H, H4) ; 3,95 (t, 2H, H14) ; 3, 38-3, 04-2,85 (m, 6H, H7-H11-H15) ; 2,24-1,98 (m, 4H, H5-H6).

RMN 13c (CDCl3) 5 ppm : 142,2 (C9) ; 128,1 (C3) ; 126,58 (C8) ; 124,06 (C2) ; 63, 43-62, 6 (C12-C14) ; 61,25 (C4) ; 49,58 (Cl1) ; 46,25 (C15) ; 25 (C7) ; 23,4 (C5) ; 22,5 (C6). Pf= 197-197, 3 °C. microanalyse : théorique % C (55,533) ; %H (6,935); %N (5,394) ; % O (6,165) ; % S (12, 33) ; analyse % C (55,461) ; % H (6,927) ; % N (5,42) ; %O (6,289); %S (12,315).

C') thiomorpholine-4-tétrahydro-4, 5, 6, 7-benzothiophène (IC 193) La réaction d'amination réductrice a été effectuée avec 0,7 eq de NaBH3CN.

L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole/éther (60/40). Rendement=63% Base : RMN 1H (CDCl3) # ppm : 7,04 (s, 2H, H2-H3) ; 3,79 (t, IH, H4) ; 2,81-2,64 (m.

10H, H11-H12-H14-H15-H17) ; 2,2-1,59 (m, 4H, H5-H6).

RMN 13C (CDCl3) # ppm : 138,6 (C9) ; 138 (C8) ; 126 (C3) ; 122 (C2) ; 62 (C4) : 50,6 (Cl 1-C15) ; 28,66 (C12-C14) ; 25 (C7) ; 23,3 (C5) ; 22 (C6).

Chlorhydrate : RMN IH (CDCl3) 6 ppm : 7,59-7,57 (2d, 2H, H2-H3) J23=0,85 ; 4,22 (t, 1H, H4) ; 27-3-2,8-2,56 (m, 10H, H7-H11-H12-H14-H15) ; 2, 16-1.87 (m, 4H.

H5-H6).

RMN 13c (CDCl3) 6 ppm : 142,71 (C9) ; 127,72 (C3) ; 127,01 (C8) ; 124,01 (C2) ; 62,80 (C4) ; 53 (Cl 1-C15) ; 48,6 (C12-C14) ; 24,82 (C7) ; 24,49 (C5); 22,18 (C6).

Pf = 201, 7-201,9 °C microanalyse : théorique % C (52,298) ; %H (6,532) ; % N (5,08); %S (23, 224) : analyse % C (52, 476); %H (6,686) ; % N (5,06) ; %S (23, 49).

D) N-méthyl-pipérazine-4-tétrahydro-4, 5,6,7-benzothiophène (IC 194) La réaction d'amination réductrice a été effectuée avec 0,7 eq de NaBH3CN.

L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole/éther (60/40). Rendement=50%.

Base : RMN III (CDC13) 8 ppm : (d, 2H, H2-H3) ; 3,79 (t, 1H, H4) ; 2,28 (s, 31-Iq Me) ; 2,75-0,89 (m, 14H, CH2).

RMN 13C (CDCl3) # ppm : 137,77 (C9) ; 137, 46 (C8) ; 127, 26 (C3) ; 121,22 (C2) ; 60,79 (C4) ; 55,68 (C12-C14) ; 45,91 (C16-C11-C15) ; 24,93 (C7) : 22,54 (C5) ; 21,34 (C6).

Chlorhydrate : RMN 1H (CDCl3) # ppm : (2d, 21-1, H2-H3) J23=057 ; 4,81 (t, IH, l14) ; 2,92 (s, 3H, Me) ; 4,5 à 1,54 (m, 14H, CH2).

RMN 13C (CDCl3) # ppm : 143,77 (C9) ; 127,07 (C8) ; 126,01 (C3) ; 124,67 (C2) ; 61, 73 (C4) ; 49,72-49,44 (C12-C14) ; 46,23 (C16); 42, 75-42,38 (C11-C15) ; 24,27 (C7) ; 21,94 (C5) ; 21,64 (C6). Pf = 176 °C. microanalyse : théorique % C (50,522) ; %H (7,12) ; % N (9, 06); %S (10,355) ; analyse % C (50,6) ; % H (7, 37) ; % N (8,75) ; % S (10, 38).

E) (4-hydroxy-pipélidine)-4-tétrahydro-4,5,6, 7-benzothiophène (IC209) La réaction d'amination réductrice a été effectuée avec 0,7 eq de NaBH3CN.

L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole/éther (80/20). Rendement=47%.

Base : RMN IH (CDC13) 6 ppm : 7,05 (t, 2H ; H2-H3) ; 3,8 (t, 114, H4) ; 3,69 (m, 1H, H13); 2,73 à 1,4 (m, 14H, CH2).

RMN 13C (CDCl3) 8 ppm : 137,95 (C9) ; 137,5 (C8) ; 127,15 (C3) ; 121,3 (C2) ; 61,14 (C4) ; 44,65 (CI1-C15) ; 35,28-35,1 (C12-C14); 24,96 (C7) ; 22, 73 (C5) ; 21,35 (C6).

Chlorhydrate : RMN IH (DMSO) 6 ppm : 10,86 (s, 1H, ammonium) ; (2d, 2H, H2-H3) J23=0, 83 ; 4,65 à 1,81 (m, 16H, alkyls).

RMN 13c (DMSO) 6 ppm : 142,2 (C9) ; 128,9 (C8) ; 127,81 (C3) ; 123,7 (C2) ; 64, 83 (C13); 59,9 (C4) ; 49,2-45,12 (C I I-C 15) ; 30, 9-29,3 (C12-C14); 24, 16 (C7); 21,72 (C5); 21,4 (C6). Pf = 220,4-220,7°C. microanalyse : théorique % C (57,058) ; %H (7,31) ; % N (5, 117); %O (5,846) ; analyse %C (57, 25) ; % H (7,485) %N (5,362) ; % 0 (6,23).

F) amino-4-tétrahydro-4,5,6,7-benzothiophène (IC088 ou IC140)

La réaction d'amination réductrice a été effectuée avec 0,7 eq de NaBH3CN et à température ambiante durant I semaine. L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant CH2C12 + 1% MeOH. Rendement=88%.

Base : RMN IH (CDC13) 8 ppm : 7,05 (t, 2H, H2-H3) ; 3,95 (t, 1H, H4); 2.77 (t, 2H.

NH2) ; 2. 2-1,42 (m, 6H, CI-12).

RMN lC (CDC13) 6 ppm : 139,2 (C9) ; 136,5 (C8); 128,36 (C3); 122,18 (C2) ; 47,39 (C4) ; 33, 63 (C7) ; 24,97 (C5) ; 20,94 (C6).

Chlorhydrate : RMN 1H (CDCL3+1%DMSO) # ppm : 8,66 (s, 3H, ammonium); 7,2-7,18 (2d, 2H, H2-H3) J23=0,39 ; 4, 32 (t, 1H, H4) ; 2,71 à 1,67 (m, 6H, cH2).

RMN 13C (CDCL3+1%DMSO) # ppm : 140,68 (C9) ; 130,69 (C8) ; 124,13 (C3) ; 123,45 (C2); 46, 55 (C4) ; 28,27 (C7) ; 24,82 (C5) ; 20 (C6). Pf = 224,5-225,3 °C. microanalyse : théorique % C (50,69) ; %H (6, 331) ; %N (7, 386) : %S (16, 88) : analyse % C (50,94) ; % H (6,438) ; % N (7,507) ; %S (16, 514).

G) (IC178) La réaction d'amination réductrice a été effectuée avec 0,7 eq de NaBH3CN.

L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant CH2C12 + 1% MeOH. Rendement=42%.

Base : RMN 1H (CDCL3) 8 ppm : 6,94 (2d, 2H, H2-H3) J23=0,38ppm ; 4,08 (t, 1H, H7) ; 2,6 (m, 2H, NH2) ; 2,21 à 1,45 (m, 6H, H4-H5-H6).

RMN 13C (CDCL3) 8 ppm : 141,65 (C9) ; 136,1 (C8) ; 127,36 (C3) ; 123,03 (C2) ; 48,27 (C7) ; 35,5 (C4) ; 25,5 (C6) ; 21,4 (C5).

GC-MS : 60°C/10°min/250°C ; 12,03 min ; 153/125/110/97/80.

Chlorhydrate : RMN 1H (CDCL3+1% DMSO) 6 ppm : 8,79 (s, 3H, ammonium) ; 6,96-6,88 (2d, 2H, H2-H3) J23=0,45 ; 4,43 (t, 1H, H7) ; 2,642 à 1,78 (m, 6H, CH2).

RMN 13C (CDCL3+1% DMSO) 6 ppm : 139,67 (C8) ; 132,13 (C9) ; 128,52 (C3) ; 125,44 (C2) ; 46,55 (C7) ; 29,5 (C4) ; 26,42 (C6) ; 20 (C5). Pf = 205- 205,5°C. microanalyse : théorique % C (50,693) ; % H (6,331) ; % N (7,386) ; % S (16,883) ; analyse % C (50,83) ; % H (6,256) ; % N (7,205) ; % S (17,037).

H) (IC146) L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole/éther (50/50).

Base : RMN IH (CDCL3) 6 ppm : 6,95-6,93 (2d, 2H, H2-H3) ; 3,99 (t, IH, H7) ; 3,05 à 1,45 (m, 16H, CH2).

RMN 13C (CDCL3) # ppm : 140 (C9) ; 137,45 (C8) ; 127,21 (C3) ; 123,92 (C2) ; 62,26 (C7) ; 51,05-49,71 (Cll-C15) ; (C4- C5-C6-C12-C13-C14).

Chlorhydrate : RMN 1H (CDCL3) # ppm : 11,79 (s, 1H, ammonium); 7,09-7,06 (2d. 2H, H2-H3) J23=0, 48 ; 4,62 (t. 1H, H7); 3,42 à 1,33 (m, 16H, cH2).

RMN 13C (CDCL3) 6 ppm : 143,3 1 (C9) ; 127,94 (C3); 126. 87 (C2) ; 125.41 (C8) ; 62,16 (C7); 51,806-48, 96 (C11-C15) ; 25,38-22,96-22,43-22,24-20,93 (C4-C5-C6- C12-C13-C14). Pf= 171-172 °C. microanalyse : théorique % C (60,68) ; % H (7,84) ; %N (5,45); %S (12, 44) ; analyse %C (60,75) ; % H (7,79) ; %N (5,365) ; % S (12,21).

I) (IC2-16) L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éthel de pétrole/éther (60/40). Rendement=58%.

Base RMN IH (CDCl3) 6 ppm : (2d, 2H, H2-H3) J23=0,4 ; 3,71 (m, 5H, H7- H12-H14) ; 2,70-2,55 (m ; 5H ; H4-H11-H15) ; 1,98-1,70 (m. 4H, H5-H6).

RMN 13C (CDCl3) # ppm : 138,62 (C9) ; 137,64 (C8) ; 127,34 (C3) ; 123,88 (C2) * 67,52 (C12-C14) ; 61,63 (C7) ; 48,77 (C11-C15) ; 25,51 (C4) ; 22,44 (C5) ; 22,08 (C6).

Chlorhydrate : RMN 1H (CDCl3) # ppm : 7,31-6,82 (2d, 2H, H2-H3) 123=0, 49 ; 4,64-1,19 (m, 14H, H7-H12-H14-H4-H11-H15-H5-H6).

RMN 13C (CDCl3) # ppm : 143,58 (C9) ; 128,05 (C3) ; 127,31 (C2) ; 124,56 (C8) ; 63, 68-63, 26 (C12-C14) ; 62,17 (C7) ; 48,33 (C11-C15) ; 25,26 (C4) ; 24.99 (C5) ; 20,52 (C6). Pf= 172,6-172,7°C.

microanalyse : théorique % C (55, 53); %H (6,93); %N (5,39); %S (12,33); analyse %C (55,54) ; %H (6, 80) ; %N (5,55); %S (12,43).

(IC237)J)pipéridino-4-tétrahydro-4,5,6,7-thio-7-benzothiop hène L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole.

Rendement=70%.

Base : RMN 1H (CDCL3) # ppm : (2d, 2H, H2-H3) 123=0, 104 ; 3,78 (t, 1H.

H4) ; 3,14-0,93 (m, 14H, CH2).

RMN l') C (CDCL3) 8 ppm : 134,68 (C9) ; 129,93 (C8) ; 128,58 (C3) ; 119,83 (C2) ; 60,32 (C4) ; 49,99 (C11-C15) ; 27,31 (C6-C5) ; 22,50 (C12-C14-C13).

Chlorhydrate : RMN 1H (CDCL3) 8 ppm : 11,93 (s, lH, ammonium) ; 7,49-7,46 (2d, 2H, H2-H3) J23=0,602 ; 4,78 (t, 1H, H4) ; 3,52 à 1,32 (m, 14H, CH2).

RMN 13c (CDCL3) 6 ppm : 136,9 (C9) ; 129 (C3) ; 124,12 (C8) ; 122,73 (C2) ; 60,07 (C4) ; 51,47-49,45 (Cl1-C15) ; 26,91 (C6) ; 24,42 (C5) ; 22,89-22,41 (C12- C14) ; 22.24 (C13). Pf= 177,9-187,1 °C. microanalyse : théorique % C (52,298) ; % H (6,532) ; % N (5,08) ; % S (23,22) : analyse % C (52,281) ; % H (6,583) ; % N (4,871) ; % S (23,481).

tétrahydro-4,5,6,7-thio-7-benzothiophène(IC241)K)morpholin e-4 I.'amine est recristallisée dans l'éther. Rendement=65%.

Base : RMN IH (CDCL3) b ppm : 7,02-7 (2d, 2H, H2-H3) J23=0,05ppm; 3, 7 (m, 5I-I, H4, H12, H14) ; 3,2 à 2,1 (m, 8H, H5-H6-H11-H15).

RMN 13C (CDCL3) 6 ppm : 130, 33 (C9) ; 126,98 (C3) ; 122 (C8) ; 118,14 (C2) ; 67,45 (C12-C14) ; 60,75 (C4) ; 52-49,4 (CI 1-C15) ; 26,47 (C5) ; 22,8 (C6).

Chlorhydrate : RMN 1H (DMSO) # ppm : 11,12 (s, IH, ammonium) ; 7,47 (d, 2H, H2-H3) J23=0, 06 ; 4,72 (t, 1H, H3) ; 3,94 à 2,12 (m, 12H, CH2).

RMN 13c (DMSO) 6 ppm : 136,9 (C9) ; 130,07 (C3); 123, 98 (C8) ; 122,12 (C2) ; 63,28-62, 99 (C12-C14) ; 59,07 (C4) ; 50,27-47,83 (CI 1-C15) ; 23,92 (C5) ; 22,22 (C6). Pf = 192,8-192,9°C. microanalyse : théorique % C (47,59) ; %H (5,76); %N (5,04) ; analyse % C (47, 498); %H (6,088) ; % N (4,886).

L)(IC242)pipérazine)-4-tétrahydro-4,5,6,7-thio-7-benzot hiophène L'aminé est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole/éther (60/40). Rendement=77%.

Base : RMN 1H (CDCL3) 6 ppm : 7,17-7,14 (2d, 2H, H2-H3), 3,8 (t, 1 H, H4), 3,44-2,09 (m, 2,18(s,3H,H16).H4-H5-H6-H11-H12-H14-H15), Chlorhydrate : RMN 1H (DMSO) 6 ppm : 12,02 (s, lH, ammonium), 7,49 (d, 2H, H2-H3), 4,75 (s, 1H, ammonium), 3,64-2,13 (m, 13H, H4-H5-H6-HII-H12-H14-H15), 2,84 (s, 3H, H16).

RMN 13c (DMSO) 8 ppm : 136,04 (C9), 129,5 (C3), 124,74 (C8), 122,25 (C2), 58,87 (C4), 49,93 (C12-C14), 46,73 (C16), 42,17 (Cll), 41,01 (C15), 24,88 (C6).

22,81 (C5). Pf=156,8-157,5°C. microanalyse : théorique % C (44,069) ; % H (6,115) ; % N (8,56) ; % S (19,57) analyse % C (44,185) ; % H (6,242) ; % N (8,69) ; % S (19,796).

M)(IC207) La réaction d'amination réductrice a été effectuée avec 0,7 eq de NaBH3CN et I eq de pyridine. L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole/éther (80/20). Rendement=30%.

Base : RMN 1H (CDCL3) # ppm : 8,5-7,78 (2d, 2H, H5-H8) ; 7,27 (m, 2H, H6-H7) ; 4,15 (t, ! H, Hl) ; 2,84 à 1,43 (m, 16H, CH2).

RMN 13C (CDCL3) # ppm : 140 (C8a) ; 139,35 (C9a) ; 138,06 (C4b) ; 130. 64 (C4a); 124,25-123,35-123, 25-121,6 (C5, C6, C7, C8) ; 60,86 (Cl) ; 49, 35 (Cll- C15) ; (C2-C3-C4-C12-CI3-C14).

Chlorhydrate : RMN 1H (CDCL3) # ppm : 11,58 (s, 1H, ammonium); (2d, 2H, H5-H8) ; 7, 39 (m, 2H, H6-H7) ; 4,53 (s, 1H, Hl) ; 3,8 à 1, 3 (m, 16H, CH2).

RMN 13c (CDCL3) 6 ppm : 147,47 (C8a) ; 138,57 (4b) ; 138,28 (C9a) ; 124,76- 124,26-122, 65-120,77 (C5-C6-C7-C8) ; 122 (C4a) ; 60,35 (C1) ; 53,65 (C15) ; 52,8 (C11) ; 84-22,38-21,83-17, 2 (C2-C3-C4-C12-C13-C14). Pf =201, 7-202°C. microanalyse : théorique %C(66,37) ; % H (7,15) ; % N (4,551) ; analyse % C (66, 59); %H (7,33) ; % N (4,251)

N)(IC219) La réaction d'amination réductrice a été effectuée avec 0, 7 eq de NaBH3CN et 1 cq de pyridine. L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole/éther (80/20). Rendement=30% Chlorhydrate : RMN I H (CDCL3) 6 ppm : 11,9 (s, 1H, ammonium); 7,78 (d, 2I 1. H aromatiques) ; 7, 32 (m, 2H, I-I aromatiques) ; 4,86 (m, 1H, I-Il) ; 4,5 à 1.24 (m. 14H, CH2).

RMN 13C (CDCL3) 6 ppm : 169,52 (C8a) ; 148,1 (C4b) ; 138,37 (C9a) ; 124.86- 124, 38-122, 75 (C5-C6-C7-C8) ; 120,57 (C4a) ; 63,42-63,21 (C12-C14); 60, 96 (Cl) ; 51. 63 (Cl 1-C15) ; 24, 63-24 (C2-C4) ; 17,59 (C3). Pf=198,4-198,5°C. microanalyse : théorique % C (62,06) ; % H (6,459) ; % N (4,522) ; analyse % C (62,084) : % H (6,445) ; % N (4,92).

(IC2-38)O)N-méthyl-pipérazine-1-tétrahydro-1,2,3,4-thio-9 -fluorène Base : RMN 1H (CDCL3) # ppm : 8,34 (d, 1H, H8) ; 7,72 (d, 1H, H5) ; 7,28 (m, 2H, H6- H7) ; 4.1 (t, 1H, H1), 2,28 (s, 3H, Me), (m, 14H, CH2).

RMN 13C (CDCL3) # ppm : 140,32 (C8a) ; 139,98 (C9a) ; 138, 41 (C4b) ; 130 (C4a) : 124. 12-123, 62-123,54-121,89 (C5-C6-C7-C8); 59,86 (C1) ; 55.90 (C12- C14-C11-C15); 46,29 (C16) ; 26,17-22,99-21,65 (C2-C3-C4). Pf=205. 2-205, 3°C. microanatyse : (C17H22SN2.2HCl.H2O) théorique %C (54,14) ; %H (6, 89) ; %N (7,42) : analyse % C (54,18) ; % H (6,5) ; % N (7,47).

P) thio-I-piperidino-4 tétrahydro-1, 2, 3, 4-thio-9-fluorène (IC249) Le milieu est porté à reflux 8 jours. L'amine est chromatographiée sur alumine neutre; éluant éther de pétrole/éther (60/40). Rendement=57%. (Dans les mêmes conditions avec ajout d'leq de LiCl lors de la réaction d'amination réductrice.

Rendement=80%).

Base : RMN 1I-I (CDCL3) 6 ppm : 8.08 (d, 1H, H5), 7,68 (d, 1H, H8), 7,28 (m, 2H, H6- (t,1H,H4),3,13-0,89(m,14H,CH2).H7),4,06 Chlorhydrate : RMN 1H (DMSO) # ppm : 10,22 (s, 1H, ammonium), 8,02 (d, 1H, H5), 7,95 (d, IN H8). 7.39 (m, 2H, H6-H7), 5,05 (t, 1H, H4), (m, 14H, CH2).

RMN 13C (DMSO) # ppm : 140,53 (C8a), 139,79 (C4b), 136,05 (C4a), 125,15 (C9a), 123,88-122,28-120,76-118,45 (C5-C6-C7-C8) 56,97 (C4), 52,14-51,07 (C11-C15), 22,55 (C2), 22,24 (C12-C14-C3), 21,45 (C13). Pf=169,2-169,4°C. microanalyse : théorique % C (59,01) ; % H (6,14) ; % N (4,23) analyse % C (59,09) ; %H(4,11).%N

Q) thio-1-morpholino-4-tétrahydro-1, 2,3,4-thio-9-fluorène (IC2-19) L'aminé est recristallisée dans l'éther. Rendement=60% Base : RMN 1H (CDCL3) 6 ppm : 7,91 (d, 1H, H5), 7,68 (d, IH, H8), 7,33 (m, 2H, H6- H7), 4,02 (t, 1H, H4), 3,70-0,90 (m, 12H, CH2).

RMN 13C (CDCL3) 8 ppm : 140,09 (C8a), 137,1 (C4b), 134,81 (C4a). 124,99 (C9a), 123.9-123,07-121,39-121,35 (C5-C6-C7-C8), 67,47 (C12-C14), 56,56 (C4), 49,89 (C11-C15), 25,16 (C2), 23,91 (C3).

Chlorhydrate : RMN 1H (CDCL3) 8 ppm : 12,08 (s, 1H, ammonium), 7,72 (m, 2H, H5-H8), 7, 33 (m, 2H, H6-H7), 4,93 (t, 1H, H4), 4,51-2,92 (m, 12H, CH2).

RMN 13C (CDCL3) 6 ppm : 142,7 (C8a), 138,66 (C4b), 136,97 (C4a), 125.26 (C9a), 124,13-122,22-119,19-116,01 (C5-C6-C7-C8), 63,58-63,12 (C12-C14), 59,44 (C4). 53,25-50,72 (Cl l-C15), 30,85 (C2), 23,85 (C3). Pf=128,6-128,7°C. microanalyse : (C15H17NOS2. HCI). 1/2 (H20) théorique % C (53,52) ; % H (5, 35) ; % N (4,16) : % S (19,01) ; % O (7,13) analyse % C (53,20) ; % H (5,77) ; % N (4, 3) ; % S (7,30).(19,00);%O

R) thio-1- (N-méthyl pipérazine)-4-tétrahydro-1,2,3,4-thio-9-fluorène (IC2-21) L'amine est chromatographiée sur alumine neutre ; éluant éther de pétrole/éther (60/40). Rendement=68%.

Base : RMN I H (CDCL3) 8 ppm : 7,92 (d, 1H, H5), 7,66 (d, 1H, H8), 7,24 (m, 2H, H6- 1-17), 4,04 (t, 1H, H4), 3, 33-0,85 (m, 12H, CH2), 2,26 (s, 3H, Me).

RMN 13C (CDCL3) # ppm : 140,16 (C8a), 137,05 (C4b), 134,39 (C4a), 125,58 (C9a). 123,81-123-121,72-121,28 (C5-C6-C7-C8), 56,42 (C4), 55,64 (C12-C14), 49,1 (C16), 45,95 (Cl 1-C15), 25,50 (C2), 23,95 (C3).

Chlorhydrate : RMN I H (DMSO) : 11,71 (s, 71 ammonium), 1H, ammonium), ammonium), 7, (m, 2H, H6-H7). 4,89 (s, 1H, ammonium), 3,51-1,90 (m, 13H, CH2-H4), 2,79 (s, 31-1* Me).

RMN 13C (DMSO) 5 ppm : 139,60 (C8a), 136,21 (C4b-C4a), 125,06 (C9a), 123,86-122,22-120,90 (C5-C6-C7-C8), 56,57 (C4-C12-C14), 47,55 (C16), 47,55- 46,28 (Cl 1-C15), 22,7 (C2), 22,58 (C3). Pf=165-165, 2°C. microanalyse : théorique % C (50,96) ; % H (5,83) ; % N (8,49) ; % S (16,97) analyse % C (50,49) ; % H (5,93) ; % N (8,36) ; % S (16,99).

ß) étude des propriétés biologiques des composés de l'invention A) Test chimique de capture des radicaux OH# : (Free Rad. Res.

Comms., Vol. 14, Nos 5-6, pp. 363-372)

Réaction : Dans des tubes à hémolyses en verre refroidis au bain de glace, sont placés 200ml de tampon (30 mM Na2HP04.40 mM NaCl, 0,1 mM EDTA), 125 ml de déoxyribose à 2.10-3 mM ainsi que 125 ml de solution 4 fois plus concentrée d'inhibiteur de radicaux (concentration finale de 0 à 0,5 mM). Au temps 0 sont ajoutés 50 ml de FeSO4 à 10-3 mM (dans 1'eau). Après 15 min d'incubation la réaction est arrêtée par 250 ml d'acide trichloroacétique à 3% auxquels sont joints 250 ml de solution d'acide thiobarbiturique à 1,5% (dans 1'eau). Les tubes sont placés à 100°C pendant 10 min puis refroidis pour être r évélés à I'UV à 532 nm. La relation linéaire AO/A= 1 + ks/kdr [(compétiteur)/(2-déoxyribose)] a été utilisée, avec AO et A les absorbances en absence et en présence de compétiteur, ks la constante de vitesse de réaction du compétiteur avec OH# et kdr=1, 9 * 109 M-1 sec-1 la constante de vitesse de réaction du 2-déoxyribose avec OH-. Ainsi ks est égal à la pente de la droite AO/A=f ((compétiteur)/(2-déoxyribose)) multipliée par kdr.

Test chimique de capture de radicaux OH' (p 36 du précédent document) M-1sec-1)Composéks(10-9 (#SEM) D-mannose 0,94#0,06 vitamine C 1,870,17 TCP ac.salicyl. 3, 020,18 <BR> <BR> <BR> IC0883,37#0,25<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> IC0233,61#0,16<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> IC193 3, 410,25 IC180 3,750, 33 IC194 IC209 3, 270,50 IC178 2,760,06 IC163 IC2-16 3, 33i0, 15 IC237 3, 450, 19 IC241 3,010,14 IC242 3,000,19

Les dérives de l'invention sont tous chimiquement des capteurs d'OH'. Ils sont majoritairement aussi voir plus efficaces pour certains (5 composes entre 3, 37 et 3.75) que l'acide salicylique (3,020,18) et bien supérieurs à la vitamine C (1.870.17) ou au D-mannose B) Mode opératoire sur cultures d'astrocytes et génération de radicaux par le couple xanthine/xanthine oxydase (X/XO) Mise en culture : Dans des boites de culture 24 puits sont placés, dans chaque puits, 400y1 de D-lysine à 25, ug/ml (9ml de D-lysine à 100, par ml de tampon borate (0, 1M pH 8,4) + 27 ml d'eau). Les puits sont placés à l'étuve (5% CO2, 37 °C) pendant une nuit. Chaque puits est rincé par 2 fois 750y1 de Hanks avant de recevoir le milieu de culture. 3 demi cortex latéraux sont prélevés sur rats de 1 à 2 jours. (L'hyppocampe, le striatum ainsi que les méninges sont retirés). Les demi cortex sont placés dans 2 ml de trypsine-EDTA puis mis à l'étuve durant 30min. L'action de la trypsine est arrêtée par 10% de sérum de veau foetal décomplémenté (200AI). Le sérum et la trypsine sont retirés puis les cellules sont dissociées à la pipette dans 10ml de milieu (MEM 225ml + SVF-D 25ml + glucose 20% 7,5ml) (MEM = milieu essentiel minimum ; SVF-D = sérum de veau foetal décomplémenté). Le milieu de culture est complété à 30ml, mélangé et placé à 400AI par puits. Le milieu est changé 2 fois par semaine durant 18 jours. Le dernier changement s'effectue 4 jours avant le traitement et par un milieu sans sérum de veau foetal décomplémenté. (MEM 31,5ml + glucose 20% 1,05ml). Le traitement a lieu au 18 ou 19°ème jour.

Test des produits : Chaque puits est lavé par 750 ; nl de tampon (NaCI 124mM, KCl 4,6mM, MgCl21,3mM,KH2PO40,416mM,NaHCO31,2mM, 26,75mM, glucose 10mM ; pH 7,4) durant 10 min. Les cellules sont incubées en présence de xanthine (500, ut) et du produit testé (de 0 à 1mM). Au bout de 10 min on ajoute la xanthine oxydase (50mU/ml) et on laisse à nouveau incuber 10 min. La libération de radicaux est arrêtée par 3 lavages à la catalase (3000U/ml). La recapture de glutamate s'effectue alors dans une solution de glutamate radioactif (3H) à 40yM (dilution isotopique 1/20000). La recapture est arrêtée par 3 lavages au tampon froid. Les cellules sont décrochées à la soude 0,2N et la radioactivité est mesurée.

Contrôles Dans un premier temps nous avons contrôlé que l'inhibition de recapture observée en présence de X/XO est bien due à un processus radicalaire. Pour cela nous avons introduit à la place des produits testés deux enzymes : la SOD (SuperOxyde Dismutase) et la catalase (figure 1). Alors que la SOD (qui active la dismutation des radicaux anions superoxides en eau oxygénée) ne peut à elle seule contrer l'effet de X/XO, la catalase (qui transforme 1'eau oxygénée en oxygène et eau) permet de retrouver un taux de recapture normal. Ainsi la réaction de Fenton transformant 1'eau oxygénée en OH-est court-circuitée.

Cette expérience ne permet pas de distinguer complètement les effets respectifs de H202 et de OH-. Cependant, puisqu'il semble y avoir suffisamment d'élément réducteur dans le milieu pour favoriser la formation d'H202 à partir de 02'-, il parait vraisemblable qu'une partie importante d'H202 donne des OH- (entité radicalaire très réactive).

Dans un deuxième temps nous avons porté notre attention sur la relation qui existe entre la quantité de radicaux (ici la quantité de X/XO) et le pourcentage d'inhibition. Comme nous le voyons sur la figure 2, cette relation est linéaire (du moins dans le domaine des concentrations utilisées). Ce résultat nous laisse donc préjuger du type de courbe attendu en présence de produit.

Les figures 3 à 8 sont la moyenne d'au moins 4 expériences indépendantes dans lesquelles le pouvoir protecteur de IC180, IC023, IC241, IC2-16, IC178, IC140, IC209, IC237, IC146, IC193, IC194, IC242, IC207, IC2-19, IC219, IC2-21, et IC249, en fonction de la dose a été testé contre une concentration fixe de radicaux, donc de X/XO. Dans le cas de IC180, le gain de recapture semble linéaire (on retrouve dans certaines expériences jusqu'à 100%). Nous avons par ailleurs montré que le produit seul (sans présence de X/XO) n'a aucune action sur la recapture. En ce qui concerne IC023, le début de la courbe est comparable mais, dès 15% de recapture retrouvée, 1'effet inverse se produit.

Comme IC023 seul ne devient"toxique"qu'à partir de lmM, l'évolution observée à partir de 0,6 mM pourrait traduire 1'existence de métabolites mal tolérés par les cellules. Le dérivé morpholine IC180 est plus intéressant.

Action des dérivés sur la xanthine oxydase : (Free Radical Biology & Medicine, Vol 20, No 1, pp. 35-43,1996) Les expériences étant réalisées en présence de X/XO, nous avons vérifié que ces résultats n'étaient pas dus à une inhibition de 1'enzyme.

Dans un volume final de 2ml on place 5ml de xanthine 20mM dans la soude 0,1N ainsi que 100mM et 500mM de produit à tester dans du tampon

phosphate à pH 7,4. La cinétique est amorcée par l'ajout de 50ml de solution de xanthine oxydase à 0.56U/ml. La formation d'urée est suivie par spectrographie UV à 290nm. L'allopurinol est un inhibiteur de référence. produit % inhibition % inhibition 100µM500µM 90%Allopurinol92% IC180 0% 2% IC023-6%- IC194-15% 10% IC 193-7% 2% IC237-9%-8% -8%IC2417% IC140-15% TCP-10%- Les composés de l'invention ne sont pas par eux-mêmes inhibiteurs de la XO.

C) tests in vivo sur perfusion intracérébrale et génération de radicaux par injection de glutamate.

Préparation expérimentale : [J. Neurosci. Methods, 72 (1997) 123-135] Les animaux sont des rats mâles de souche Wistar pesant 250 g. Sous anesthésie générale, les animaux sont placés dans un appareil de stéréotaxie. Un guide de canule est introduit par microchirurgie dans le striatum (coordonnées A : +0,02 cm ; L :-0,30 cm et H :-0,65 cm par rapport aux point 0 défini selon Paxinos et Watson). Trois à quatre vis sont disposées sur le crâne de l'animal et l'ensemble est fixé par du ciment dentaire (Durelon). Après une période de récupération pendant laquelle les animaux sont habitués à l'expérimentateur, une canule de microdialyse CMA 12 est insérée dans le guide de sorte que la membrane de cellophane dépasse de 2 mm dans le tissu cérébral. Toutes les perfusions sont réalisées sur animaux vigiles. Une solution physiologique (NaCl : 140 mM ; KCl : 5 mM ; CaCl2 : 3,9 mM) à laquelle sont ajoutés extemporanément 250 M de salicylate de Na, est injectée dans le système avec un débit constant de 1 pd. min~l. Le fluide sortant de la canule n'est pas collecté pendant les deux

premières heures de perfusion. Par la suite, des échantillons sont recueillis par traction toutes les 20 minutes pendant 8 heures, et immédiatement congelés à-30 °C.

Méthode de mesure : L'acide salicylique présent dans le liquide de perfusion réagit avec les radicaux OH libérés au site de perfusion pour former un composé. 1'acide 2, 3- dihydroxybenzoïque (2,3-DBHA), qui est spécifique de cette réaction. Ce produit de réaction est quantifié dans chaque échantillon par Chromatographie Liquide Haute l'ression suivie d'une Détection Electrochimique. La phase stationnaire est une silice greffée C18. La phase mobile est une solution (KH2PO4 : 30 mM ; EDTA. 0,1 mM ; triéthylamine 2 VLM ; octanesulfonate de sodium 1. 1 u. M) contenant 12 % d'un mélange méthanol/acétonitrile à 2/1 et équilibrée à pH 3,28 par de l'acide citrique. Cette phase mobile est maintenue à 25 °C et injectée avec un débit égal à 1, 3 utmin''. Le potentiel d'oxydation est fixé à 0,55 Volts.

Analyse: L'analyse a été effectuée en trois étapes.

Perfusion 1 : après deux heures de perfusion dans des conditions normales, servant à établir le profil de libération de base des radicaux libres, le liquide de perfusion a été remplacé par un milieu contenant en plus 1,5 mM de glutamate de Na, tous les autres composants restant identiques au milieu initial. Après I heure de perfusion par ce mélange, le milieu normal est réintroduit et la perfusion poursuivie. La figure 9 montre que l'introduction du glutamate provoque dans les fractions ultérieures une augmentation considérable de la libération de l'acide 2, 3- dihydroxybenzoïque. Compte tenu des variations individuelles, ce profil de sécrétion, montré ici chez un individu, est reproductible (sensibilité, porosité de la microdialyse). A la fin de cette perfusion, les canules de microdialyse sont extraites des cerveaux et les animaux retrouvent leurs conditions habituelles de stabulation.

Perfusion 2 : une semaine après la perfusion 1, les animaux subissent une nouvelle séance de perfusion dont le protocole diffère légèrement de la première session. Un des produits de l'invention est ajouté au milieu de perfusion, à la concentration de 1 mM, et maintenu présent une heure avant l'introduction du glutamate, pendant l'introduction du glutamate, puis une heure après le stimulus.

La figure 9 montre que la libération de radicaux libres induite par le glutamate, et visualisée par la variation de la concentration en acide 2, 3-dihydroxybenzoïque a

été totalement bloquée par injection d'un composé de l'invention. Ce blocage a été retrouvé chez tous les individus testés.

Perfusion 3 : une semaine après la seconde perfusion. les animaux sont à nouveau perfusés selon un protocole identique à la première perfusion. La figure 9, établie toujours pour le même individu, montre tout d'abord que le système est pleinement fonctionnel, en ce sens que malgré de multiples introductions et extractions de la canule de microdialyse, malgré de multiples perfusions, malgré de multiples stimulations par le glutamate, et malgré le traitement in silu par le dérivé IC 180, une injection de glutamate dans le striatum est toujours capable de promouvoir la libération locale de radicaux libres. Cet effet a été retrouvé chez tous les animaux.

Ceci démontre tout d'abord que lors de la seconde perfusion, l'absence de réponse à la stimulation glutamatergique était bien due à la présence du composé de ('invention. et non à une possible détérioration de la physiologie du système nerveux central. Ceci démontre de plus que l'introduction in situ de la drogue (IC 180) n'a pas eu de conséquence toxique secondaire, dans les conditions de l'étude. y) les composés de l'invention sont concentrés dans le cerveau Préparation expérimentale : [Amer. J. Physiol., 267 (1994) R164-R170] Sous anesthésie générale, des cathéters formés par des tubes de polyéthylène souple et inerte de PE50 (Clay Adams) sont mis en place dans la carotide droite de rats mâles de souche Wistar pesant 250 g, et glissés sous la peau pour émerger au niveau de la nuque en un site inaccessible pour l'animal. Les injections sont effectuées 5 jours après, afin de permettre aux animaux une récupération post- opératoire optimale. Ce dispositif permet des injections systémiques aisées et très rapides sur l'animal vigile.

Méthode de mesure : Au temps spécifié après l'injection, les animaux sont euthanasiés par décapitation. Les cerveaux sont extraits en moins d'une minute sans fractionnement ultérieur. Les méninges sont rapidement séparées et les cerveaux sont rincés dans un grand volume de sérum physiologique avant d'être congelés à -30°C. Le sang est recueilli sur EDTA dans des tubes maintenus à 0°C. Après centrifugation, le plasma est séparé et des fractions aliquotes sont conservées à- 30°C.

Après décongélation, les cerveaux sont pesés et homogénéisés à froid dans 3 volumes de NaOH (0,1N), au moyen d'un broyeur Ultra-Turrax. Un standard interne, en concentration adéquate, est ajouté à chaque échantillon pour tenir compte des variations individuelles de l'extraction. Les broyats sont directement extraits en trois fois par un total de 6 volumes d'acétate d'éthyle, suivis chaque fois d'une centrifugation à haute vitesse.

Hormis l'étape de broyage, les plasma sont traités de manière analogue.

Les extraits sont filtrés à travers une membrane Millipore de 0*22 ptm et après évaporation du solvant sous courant d'azote, les extraits secs sont stockés à- 30°C.

La présence et la concentration du composé IC 180 dans les échantillons a été mise en évidence par comparaison avec des échantillons standards de concentration connue après séparation par Chromatographie Liquide Haute Pression sur une colonne de silice suivie d'une détection UV à 230 nm.

Analyse : Un des composés de l'invention (IC 180), dilué dans du sérum physiologique, est injecté à une concentration égale à 20 mg. kg~l. La figure 10 montre que 30 min après, il est retrouvé préférentiellement dans le cerveau des animaux, et nettement identifiable dans le plasma. Sa concentration décroît environ de 50% dans le cerveau, 1 heure après l'injection. Cependant, dans le plasma des mêmes animaux, la drogue n'est que très faiblement détectable. Le rapport des concentrations entre le cerveau et le plasma augmente donc entre 30 et 60 minutes après l'injection.

En conséquence, il est montré que la drogue : -est dépourvue d'effet toxique rapide dans les conditions de l'étude ; -pénètre facilement et rapidement dans le système nerveux central, où elle est à même d'atteindre ses objectifs.

LEGENDES DES FIGURES -Figure 1 : histogramme de l'inhibition de la recapture du glutamate par les astrocytes ; le pourcentage de recapture de [3H] glutamate est représenté en ordonnée ; les colonnes 1 à 8 correspondent respectivement aux pourcentages de recapture en l'absence de X/XO (1), en présence de X/XO (2), en présence de X/XO et de SOD (3), en présence de X/XO et de catalase (Cat) (4), en présence

de X/XO, SOD et de Cat (5), en présence de SOD (6), en présence de Cat (7), en présence de SOD et de Cat (8).

-Figure 2 : courbe de l'inhibition de la recapture du glutamate par les astrocytes en fonction de la concentration de X/XO ; le pourcentage d'inhibition de la recapture est indiqué en ordonnée ; les concentrations en X/XO sont indiquées en abscisse enM/mU (multipliées par 10 pour XO (XO x 10 ; mU = milliUnités).

-Figure 3 : courbe de la recapture du glutamate par les astrocytes en fonction de la concentration des composés IC241 (V), IC180 (V), IC2-16 (A), IC178 (*), IC140 (o), IC209 (*) et en présence d'une quantité fixe de X/XO bloquant à 50% la recapture de glutamate ; le pourcentage de recapture de [3H] glutamate est représenté en ordonnée, et la concentration (en mM) des composés est indiquée en abscisse.

-Figure 4 : courbe de la recapture du glutamate par les astrocytes en fonction de la concentration de IC023 (-), et en présence d'une quantité fixe de X/XO bloquant à 50% la recapture de glutamate ; le pourcentage de recapture de [3H] glutamate est représenté en ordonnée, et la concentration (en mM) de IC023 est indiquée en abscisse.

-Figure 5 : courbe de la recapture du glutamate par les astrocytes en fonction de la concentration des composés IC237 (-), IC146 (o), IC193 (V), et en présence d'une quantité fixe de X/XO bloquant à 50% la recapture de glutamate ; le pourcentage de recapture de [3H] glutamate est représenté en ordonnée, et la concentration (en, uM) des composés est indiquée en abscisse.

-Figure 6 : courbe de la recapture du glutamate par les astrocytes en fonction de la concentration des composés IC194 (i), IC242 (o), et en présence d'une quantité fixe de X/XO bloquant à 50% la recapture de glutamate ; le pourcentage de recapture de [3H] glutamate est représenté en ordonnée, et la concentration (en mM) des composés est indiquée en abscisse.

-Figure 7 : courbe de la recapture du glutamate par les astrocytes en fonction de la concentration des composés IC207 (V), IC219 (O), IC2-21 (o), IC249 (D), et en présence d'une quantité fixe de X/XO bloquant à 50% la recapture de glutamate ; le pourcentage de recapture de [3H] glutamate est

représenté en ordonnée, et la concentration (en yM) des composés est indiquée en abscisse.

-Figure 8 : courbe de la recapture du glutamate par les astrocytes en fonction de la concentration des composés IC2-19 (*), et en présence d'une quantité fixe de X/XO bloquant à 50% la recapture de glutamate ; le pourcentage de recapture de [3H] glutamate est représenté en ordonnée, et la concentration (en yM) de IC2-19 est indiquée en abscisse.

-Figure 9 : courbe de la sécrétion de radicaux libres en réponse à la stimulation par le glutamate. Blocage par injection de la drogue IC 180 première perfusion (#), deuxième perfusion (A), troisième perfusion (o) ; les fractions recueillies sont indiquées en abscisse ; la concentration en fmole/51 de 2,3-DBHA formé est indiqué en ordonnée.

-Figure 10 : courbe du rapport des concentrations de IC180 dans le cerveau et le plasma ( [IC180] cerveau/ [IC180] plasma, indiqué en ordonnée), en fonction du temps (indiqué en minutes en abscisse).