ADOUCISSANTE SUR LA PEAU DESCRIPTION

Domaine technique

La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'une association d'extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L., ainsi qu'à une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L., et à un procédé et un dispositif impliquant cette composition.

La présente invention trouve une application dans le domaine de la cosmétique et de la dermatologie, plus particulièrement de la cosmétique cutanée.

Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([ ]) renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. Etat de la technique

La peau est un organe vital à part entière qui se compose de trois tissus distincts, assumant chacun différents rôles grâce à différents types cellulaires et différentes structures.

L'hypoderme, situé en profondeur et constitué en majeure partie de lobules graisseux (adipocytes), assure une fonction de support primaire, de protection mécanique et thermique et joue aussi un rôle de stockage des réserves énergétiques rapidement mobilisables pour tous les besoins biologiques, comme par exemple le renouvellement cellulaire, la défense de l'organisme ou la contraction musculaire.

En position intermédiaire, le derme est un tissu conjonctif investi majoritairement de fibroblastes et de protéines matricielles donnant à la peau ses qualités de compressibilité et d'élasticité connues. Les modifications de sa texture et de sa composition sont largement responsables des altérations de la peau qui surviennent au cours du vieillissement. Le relief de la couche cornée est, par ailleurs, directement conditionné par la qualité et la densité du derme qui la sous-tend. Plus que l'épiderme, dont le renouvellement est rapide et constant, le derme subit des troubles importants liés à l'âge, par le vieillissement de ses cellules et de sa matière. En vieillissant, les fibroblastes sont de moins en moins réactifs et de moins en moins prolifératifs. Avec l'âge, les synthèses des macromolécules de la matrice ne sont plus assurées par les fibroblastes. De plus, ces macro-molécules constitutives du derme telles que les fibres de collagène, les fibres élastiques, les protéoglycanes et les glycosaminoglycanes (acide hyaluronique notamment) ont tendance à dégénérer et à se fragmenter. Leurs réseaux se désorganisent et se réorientent parallèlement à la jonction dermo-épidermique, notamment sous l'action d'enzymes de dégradations des protéines matricielles, les MMP (Matrix Métallo Proteases), aussi appelées collagénases ou élastases. Ces phénomènes d'altération du tissu dermique provoquent en surface un défaut d'organisation de l'épiderme et, d'une façon plus visible et plus directe, une perte de fermeté pouvant aller jusqu'à la ptôse cutanée et/ou la formation de rides.

Au sein de la trame conjonctive, s'intercalent aussi d'autres cellules et structures, tel un important réseau circulatoire et nutritif, constitué des vaisseaux sanguins et des capillaires lymphatiques, ainsi que les annexes épidermiques : cheveux, poils, ongles, glandes pilosébacées et glandes sudoripares, qui prennent naissance dans le derme profond.

Le tissu le plus en surface et donc le plus exposé est l'épiderme. Cet épithélium pluristratifié (Malpighien) et kératinisé, se compose de différentes cellules associées à de nombreuses fonctions de barrière et de protection. Les cellules majoritaires sont les kératinocytes qui se divisent dans la couche basale et entament leur différenciation jusqu'à la couche cornée (couche la plus externe) puis sont éliminés par desquamation, en 21 à 28 jours, en moyenne. Le rôle majeur de l'épiderme est d'apporter à la peau, et donc au corps humain, une première ligne de protection contre les agressions extérieures, comme les agressions physiques, chimiques, hydriques et bactériologiques. Cette protection est notamment assurée par les couches les plus différenciées et la couche cornée connue pour ses propriétés hydrophobes, son aspect compacte et étanche.

Les conditions de vie actuelles font subir à l'organisme toutes sortes d'agressions auxquelles il est difficile de se soustraire de façon permanente et efficace, comme les stress environnementaux, les différentes qualités d'eau, des soins d'hygiène plus ou moins agressifs ou des frottements avec des matériaux plus ou moins abrasifs. Ces stress peuvent être à l'origine de diverses réactions à la surface de la peau (rougeurs, chaleurs, prurit, démangeaisons, inconforts ...). Toutes les peaux réagissent à ces agents externes, mais leur seuil de tolérance n'est pas le même. Les « peaux sensibles et/ou réactives » sont plus sensibles aux irritations récurrentes que les peaux « normales » et vont déclencher une réaction de type inflammatoire : elles rougissent plus vite et plus souvent que d'autres. Cette typologie de peau ne relève pas de la dermatologie, c'est-à-dire du domaine de la thérapeutique, car l'état peut être transitoire et/ou sans raisons apparentes. L'inflammation cutanée, provoquée par les agressions extérieures, est à l'origine de la sensibilisation de la peau. Il s'agit d'un phénomène complexe mettant en jeu de nombreuses cellules de la peau et de nombreuses cellules sanguines. Il semblerait que les peaux sensibles sécrètent en excès certains neuromédiateurs par les terminaisons des nerfs superficiels et des cytokines pro-inflammatoires. Ces sécrétions anormales seraient ainsi à l'origine des sensations désagréables ressenties par les sujets. L'une des premières étapes est de la réaction est ainsi l'expression de médiateurs proinflammatoires comme l'interleukine-6 (IL6) et le tumor necrosis factor alpha (TNFa), notamment par les kératinocytes sous l'effet du stress/ de l'agression. Il convient donc de calmer cette réaction inflammatoire par une action légère mais globale.

S'il existe de très nombreux produits cosmétiques destinés à tous les soins de la peau, comme les crème hydratantes, les laits démaquillants, les sérums anti-âge ou encore les masques purifiants, ils ne sont pas tous conseillés aux peaux sensibles. En effet, celles-ci nécessitent des produits spécialement conçus pour éviter la sensibilisation de la peau, tout en apportant aussi un bénéfice cosmétique complémentaire, comme l'hydratation, ou une action anti-âge par exemple.

De plus, il existe des formulations adaptées aux peaux sensibles qui excluent certains composants connus pour leur propension à irriter les peaux sensibles comme les parfums par exemple. Ces formulations permettent donc d'éviter le risque de sensibilisation.

Toutefois, ces formulations ne permettent pas, en tant que telle, d'apaiser les peaux sensibles.

Il existe donc un réel besoin de trouver de nouvelles compositions et/ou composés permettant d'assurer de façon effective un effet apaisant de la peau, de ses annexes et des muqueuses. En particulier, il existe un réel besoin de trouver des composés naturels qui permettent de prévenir, c'est-à- dire inhiber ou, à tout le moins, retarder la sécrétion de facteurs inflammatoires lors de réactions propres aux peaux sensibles ou réactives.

Description de l'invention

La présente invention a précisément pour but de répondre à ces besoins et inconvénients de l'art antérieur.

Les inventeurs sont les tout premiers à utiliser un extrait ou l'association de plusieurs extraits de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. permettant précisément de répondre efficacement aux besoins précités. Les inventeurs ont montré de manière surprenante qu'un extrait ou une association de plusieurs extraits de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. possède des effets calmants, apaisants, adoucissants et apportant des bénéfices de confort pour la peau, notamment des peaux sensibles et/ou réactives.

En outre, les inventeurs ont notamment mis en évidence un effet supérieur d'un extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. constitué des parois cellulaires desdites cellules et du contenu cellulaire desdites cellules, par rapport à l'utilisation des constituants de ces extraits pris séparément, sur l'expression de médiateurs pro-inflammatoires par les kératinocytes épidermiques, notamment la sécrétion d'IL-6 et TNFa. Les inventeurs sont les premiers à proposer un extrait ou l'association d'extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. en tant qu'agent cosmétique calmant, apaisant, adoucissant et apportant des bénéfices de confort pour le soin des peaux dites normales et des peaux dites sensibles et/ou réactives.

Ainsi, un premier objet de l'invention se rapporte à un extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. constitué des parois cellulaires desdites cellules et/ou du contenu cellulaire desdites cellules.

Un deuxième objet de l'invention se rapporte à l'utilisation cosmétique de l'extrait de cellules méristématique de Syringa vulgaris L. selon l'invention pour une action pour une action apaisante de la peau et/ou des muqueuses.

Un troisième objet de l'invention se rapporte à une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. de l'invention, et éventuellement un véhicule cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable. La composition comprenant avantageusement 0,00001 à 5 % en poids dudit extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. par rapport au poids total de la composition.

Un quatrième objet de l'invention se rapporte à un dispositif se présentant sous une forme choisie parmi un pot, un flacon-pompe, une lingette, un masque, un dispositif transdermique, un patch, un spray, ledit dispositif comprenant une composition selon l'invention.

Un autre objet de l'invention se rapporte à un procédé cosmétique pour adoucir et/ou apaiser la peau, comprenant une application sur la peau d'une composition cosmétique selon l'invention ou d'un extrait tel que défini dans l'une quelconque des revendications selon l'invention.

Un autre objet de l'invention se rapporte à une utilisation d'une composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention, pour améliorer l'aspect la peau d'un sujet.

Un autre objet de l'invention se rapporte à un procédé de préparation d'une composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention, comprenant le mélange d'un extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. selon l'invention et d'un véhicule cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable.

Syringa vulgaris L. (Oleaceae) également appelé Lilas commun en Français est un arbuste originaire d'Europe centrale et d'Orient et largement cultivé et introduit en Europe et en Amérique du Nord. Réputé pour son utilisation en ornementation, il est également utilisé en médecine traditionnelle pour sa faculté à traiter les rhumatismes (arthroses) ou encore le diabète (Su et al., Phytochemical and pharmacological progresson the genus Syringa. Chemistry Central Journal, 2015, 9, 2 ([1])).

Les cellules méristématiques de Syringa vulgaris L., sont obtenues à partir de culture in vitro de cellules de Syringa vulgaris L. Les technologies de culture cellulaires végétales in vitro ont débuté en 1939 avec la démonstration de l'obtention de cals qui sont des amas de cellules indifférenciées appelés également cellules méristématiques. Leur production à l'échelle industrielle remonte aux années 1990 (Trevor A.Thorpe. History of plant tissue culture. Molecular biotechnology, 2007, 37, 2, 169-180 ([2])). Le principe consiste, à partir d'un échantillon végétal, à dédifférencier les cellules constitutives de l'échantillon, puis induire ensuite la multiplication cellulaire de ces cellules méristématiques. Le but est d'accroître la biomasse afin que les cellules soient récupérées entières, ou fragmentées avec une concentration importante en métabolites d'intérêt.

Les « métabolites », au sens de la présente invention, des composés ou molécules produits par des cellules méristématiques de Syringa vulgaris L.. Il peut s'agit de métabolites primaires, par exemples des sucres, protéines/acides aminés et/ou des lipides. Alternativement ou complémentairement, il peut s'agir de métabolites secondaires comme par exemple des polyphénols, des terpènes et/ou d'alcaloïdes (Bruneton J, Pharmacognosie-plantes médicinales, 5eme édition, Lavoisier, 2016 ([3])). Il est ensuite possible de récupérer les cellules (ou fragments de cellules) pour les incorporer en tant qu'actifs cosmétiques ou alors une étape supplémentaire peut être réalisée dans le but d'extraire et de récupérer les métabolites des cellules sous une forme plus ou moins purifiée. De nombreux avantages existent en ce qui concerne l'utilisation de la culture cellulaire in- vitro pour produire des actifs cosmétiques : la possibilité de fragmenter les cellules permet d'avoir avantageusement accès aux macromolécules de la paroi cellulaire et il est également possible de rajouter dans le milieu de culture des précurseurs métaboliques pour induire la production de métabolites et ainsi les concentrer dans le milieu intra-cellulaire (Franck DiCosmo and Masanaru Misawa, Plant cell and tissue culture : alternatives for metabolite production, Biotechnology Advances 1995, 13, 425-453 ([4])). Par exemple, les cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. peuvent être obtenues, mises en culture et conservées selon les méthodes décrites dans les brevets EP1736167 ([5]) et EP2319914 ([6]).

Les cellules méristématiques de Syringa vulgaris L peuvent appartenir à la lignée cellulaire Syringa vulgaris IRB-SV25/B DSMZ, déposée le 15/09/2004 à la DMSZ (Deutsche Sammlung Von Mikroorganismen and Zelikulturen, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunscheid, Allemagne) sous le numéro DSM 16857 par la société IRB (Instituto di Richerche Biotechnologiche S.p.A, 7 Via Lago di Tovel, 36077 Altavilla Vicentina (VI), Italie). Cette lignée cellulaire est décrite dans le document EP1736167 ([5]).

Avantageusement, l'extrait peut être constitué de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. constitué des parois cellulaires desdites cellules et/ou du contenu cellulaire desdites cellules.

Dans la présente invention, le ou les constituants de l'extrait peu(ven)t être issu(s) de la lyse d'une culture cellulaire de cellules méristématiques entières de Syringa vulgaris L..

Par exemple, les cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. peuvent être mises en culture selon la méthode décrite dans le brevet

EP1736167 ([5]) puis lysées de façon à obtenir deux fractions distinctes : une fraction A constituée de fragments de parois cellulaires et une fraction B constituée du contenu cellulaire. Les fractions A et/ou B peuvent éventuellement être mises en suspension dans la glycérine pour obtenir une préparation glycérinée de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. Par exemple, la fraction A et la fraction B peuvent être présents dans l'extrait dans un ratio allant de 1 :99 à 99 :1 , par exemple être un ratio d'environ 50 :50. Avantageusement, le contenu cellulaire contient tout ou partie des métabolites tels que décrits ci-avant.

Un extrait selon l'invention est susceptible d'être préparé selon le procédé comprenant les étapes de :

a) culture cellulaire in-vitro, obtention de cellules méristématiques entières,

b) lyse desdites cellules de l'étape a) par procédé haute pression,

c) filtration desdites cellules lysées à l'étape c),

d) association du retentât qui contient les parois cellulaires des cellules lysées et du filtrat qui contient le contenu cellulaire des cellules lysées, et

e) mise en suspension dudit rétentât et dudit filtrat dans la glycérine avec ajout de gomme xanthane et d'acide citrique.

Selon l'invention, les cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. peuvent être sous toute forme appropriée, notamment dans le cadre d'une utilisation cosmétique ou dermatologique. Par exemple, les cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. peuvent être entières ou lysées. Elles peuvent être mise en suspension sous forme liquide ou être séché. Sous forme liquide, le solvant utilisé peut être choisi parmi le propylène glycol, le butylène glycol, le méthylpropanediol, le propane-1 .3-diol, la glycérine, un solvant eutectique composé de molécules d'origine végétale ou naturelle comme ceux décrit dans le document FR3017292 ([7]) ou un mélange de ces solvants, cette liste n'étant pas limitative. Les mélanges de ces solvants peuvent être réalisés dans toutes les proportions possibles. Sous forme sèche, la préparation de cellules peut être obtenue par évaporation sous vide, par atomisation, par lyophilisation ou par tout autre moyen approprié connu de l'homme du métier.

On entend par « utilisation cosmétique », au sens de la présente invention, toute utilisation visant à mettre en contact l'extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. avec une partie superficielle du corps humain, par exemple, l'épiderme, les organes externes ou les muqueuses externes, pour une action sur l'aspect de la peau. Il peut s'agir notamment d'une action esthétique sur la peau, ou une action visant à restaurer une sensation de confort des peaux sensibles/réactives. L'utilisation cosmétique présente, de manière avantageuse, une action calmante, apaisante, adoucissante et apportant des bénéfices de confort, apaisante de la peau et/ou des muqueuses sensibles et/ou réactives.

On entend par « action apaisante », au sens de la présente invention, au moins une action choisie parmi l'atténuation des rougeurs diffuses, l'amélioration du teint, la restitution du teint, la restitution du grain de peau, la restitution de éclat de la peau, la restitution d'une luminosité de la peau plus uniforme, la diminution des sensations de tiraillements, d'inconfort, de picotements, de chaleur diffuse, d'irritabilité de la peau. Par action apaisante, au sens de la présente invention, on peut entendre une action de type antiinflammatoire à encontre des sensations désagréables ressenties par les sujets à peau sensible/réactive. Cette réaction peut s'expliquer par une diminution de l'expression des médiateurs pro-inflammatoires induits consécutivement à un stress de quelque nature que ce soit à l'origine des sensations désagréables ressenties par les sujets. Il peut s'agir par exemple de l'expression de l'interleukine 6 (IL6), ou du Tumor Necrosis Factor alpha (TNFa) produits par les kératinocytes épidermiques.

On entend par « peaux ou muqueuses sensibles et/ ou réactives » au sens de l'invention, toute peau ou muqueuse sujette à des sensations d'inconfort pouvant se manifester par des rougeurs plus ou moins diffuses et localisées, des démangeaisons, des tiraillements, des irritations, des sensations d'échauffement. Ces sensations d'inconfort peuvent être dues à des agressions extérieures comme le stress hydrique, le stress thermique, les rayonnements UV, le vent, la pollution ou les irritations par frottements. Ces sensations peuvent être passagères ou récurrentes. En tout état de cause, ces sensations ne sont pas assimilées à une pathologie de la peau.

On entend par « muqueuse », au sens de la présente invention, notamment les muqueuses externes comme les lèvres. On entend par « adoucissant », au sens de la présente invention, l'obtention d'un effet plus soyeux de la peau au toucher après utilisation de l'extrait, et/ou une diminution de l'effet de rugosité de la peau au toucher.

On entend par « améliorer l'éclat de la peau », au sens de la présente invention, l'obtention d'une peau plus lumineuse. Cet effet peut être observé qualitativement, par exemple visuellement, ou quantitativement, par exemple par des études de Chromamétrie où les composantes L ^* a ^* b ^* sont mesurées.

On entend par « améliorer l'homogénéité de la couleur de la peau », au sens de la présente invention, l'obtention d'une couleur plus homogène après utilisation de l'extrait sur la peau notamment via une meilleure répartition de la composante rouge de la peau, par une limitation des rougeurs.

On entend par « composition cosmétique », dans la présente invention, toute composition à visée cosmétique, c'est à dire esthétique, une composition pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, par exemple l'épiderme, les systèmes pileux et capillaires. Avantageusement, une composition cosmétique permet, exclusivement ou principalement de les protéger, de parfumer, de maintenir en bon état, de modifier leur aspect ou en corriger les défauts superficiels.

Dans la présente invention, on entend par « composition dermatologique » toute composition à visée dermatologique, c'est à dire une composition pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, pour un traitement de la peau, des muqueuses, et des phanères, comme les ongles, les cheveux, ou les poils. Une telle composition peut comprendre des actifs additionnels autres que l'extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L, susceptibles d'être qualifiés de dermatologiques ou thérapeutiques, ce qui explique la qualité de « dermatologique » de la composition.

Par « véhicule cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable », on entend un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines et animales cutanées, en particulier les cellules de l'épiderme, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable. Le véhicule cosmétiquement acceptable peut être choisi parmi l'eau, l'allantoïne, la glycérine, le méthylpropanediol ; cette liste n'étant pas limitative.

La composition de l'invention peut être obtenue par tout procédé approprié et connu de l'homme du métier pour la fabrication d'une composition cosmétique. Il peut s'agir, par exemple d'un simple mélange. Il peut s'agir alternativement, par exemple, d'un procédé comprenant une étape d'incorporation d'une phase interne dans une phase externe au moyen d'un émulseur, par exemple d'une turbine de type rotor-stator. Il peut s'agir également par exemple d'un procédé utilisant la Température d'Inversion de Phase (TIP), ce procédé étant classiquement utilisé par l'homme de l'art pour obtenir des émulsions huile dans eau dont les gouttelettes dispersées sont particulièrement fines, par exemple avec un diamètre de 0,1 à 1 μιτι.

Selon l'invention, la composition cosmétique ou dermatologique peut comprendre 0,00001 à 5 % en poids dudit extrait ou dudit mélange par association d'extraits de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. par rapport au poids total de la composition, par exemple de 0,0001 à 5,0 % en poids, ou de 0,001 à 5,0 % en poids, ou de 0,01 à 5,0 % en poids ou de 0,1 à 5,0 % en poids, ou de 1 ,0 à 5,0 % en poids, ou de 2,0 à 4,0 % en poids dudit extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. par rapport au poids total de la composition.

La composition cosmétique ou dermatologique de la présente invention peut se trouver sous toute forme appropriée pour une application cosmétique ou dermatologique. Avantageusement, la composition peut être une composition à usage topique.

Il peut s'agir par exemple d'une composition sous une forme choisie dans le groupe comprenant une émulsion huile dans eau ou eau dans huile ou un mélange de ces émulsions.

Selon l'invention, la composition cosmétique ou dermatologique peut par exemple se trouver sous une forme choisie dans le groupe comprenant un gel aqueux ou hydroalcoolique, une crème aqueuse ou hydroalcoolique et une lotion aqueuse ou hydroalcoolique. Ces formulations utilisables pour la mise en œuvre de la présente invention sont connues dans l'état de la technique par les formulateurs. Dans ces exemples de composition, il suffit d'ajouter l'extrait ou l'association d'extraits de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. de la présente invention pour obtenir une composition conforme à la présente invention.

Selon l'invention, la composition peut être sous une forme choisie parmi un onguent, une crème, une huile, un lait, une pommade, une poudre, un tampon imbibé, une solution, un gel, un sérum, un baume, un beurre, une lotion, une suspension, un savon ou une émulsion.

L'extrait de la présente invention peut être utilisé dans une composition cosmétique ou dermatologique seul ou en combinaison avec d'autres substances ou ingrédients actifs ou inactifs cosmétiquement ou dermatologiquement. Les substances ou ingrédients inactifs sont ceux qui n'agissent pas cosmétiquement ou dermatologiquement. Il s'agit des éléments de la composition permettant notamment d'accompagner l'extrait, de constituer une formulation particulière, de conserver l'extrait actif dans le temps, cette liste n'étant pas limitative. Il peut s'agir en d'autres termes de tout produit de base pouvant se trouver dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques classiques. Par opposition, les substances ou ingrédients actifs sont ceux qui dans l'application cosmétique ou dermatologique visée ont une action esthétique et/ou médicale.

Ainsi, l'extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. de la présente invention, peut être la seule substance ou ingrédient actif d'une composition, ou il peut être associé à d'autres substances ou ingrédients actifs d'une composition cosmétique ou dermatologique.

Le procédé de soin cosmétique ou dermatologique de l'invention permet notamment d'apporter un effet apaisant et/ou d'améliorer les qualités de surface de la peau, par exemple au moins un effet choisi parmi l'atténuation des rougeurs diffuses, l'amélioration de l'uniformité du teint, du grain de peau, la diminution des sensations de tiraillements, de picotements, de chaleur diffuse, d'irritabilité.

Dans le cadre des procédés cosmétiques selon l'invention, ou de l'utilisation selon l'invention, l'utilisation s'entend d'une utilisation non- thérapeutique, par exemple pour le traitement des peaux normales, c'est-à- dire des peaux ne présentant pas un état pathologique, à l'exclusion de toute utilisation thérapeutique.

Ainsi, toute utilisation cosmétique et tout procédé cosmétique selon l'invention sont respectivement des utilisations cosmétiques non- thérapeutiques et procédés cosmétiques non-thérapeutiques.

D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, donnés à titre illustratif.

EXEMPLES

Exemple 1 : Préparation d'extrait de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L.

Dans les exemples suivants, la préparation d'une suspension glycérinée de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L a été préparé comme suit, et conformément au protocole décrit dans le document EP1736167 ([5]).

1 - Culture cellulaire in-vitro, des cellules de la lignée DSM 16857 pour l'obtention de cellules méristématiques entières. Les cellules cultivées sur un milieu solide (GAMBORG B5 dans une agarose à 1 % supplémentée avec 20 g / 1 de saccharose, 2 g / 1 de peptone végétale, 1 mg / 1 de kinétine, 1 mg / 1 d'acide naphtalène acétique, 0,2 mg / 1 d'acide indolacétique à pH 6,5) sont inoculées dans des flacons de 20 x 300 ml, chacun contenant 50 ml de milieu liquide (GAMBORG B5 supplémenté avec 20 g / 1 de saccharose, 2 g / 1 de plante peptone, 1 mg / 1 de kinéine, 1 mg / 1 d'acide naphtalénacétique, 0,2 mg / 1 d'acide indolacétique à pH 6,5). Après la fermentation pendant 7 jours, les cultures sont utilisées pour inoculer également des flacons de 1000 ml contenant chacun 250 ml de milieu liquide qui sont ensuite déchargés après une période de 14 jours. La biomasse est combinée.

2- Lyse des cellules par procédé haute pression à l'aide d'un ultraturrax.

3- Filtration des cellules lysées à travers une maille de nylon avec une porosité d'au moins 100 μιτι. 4- Le retentât qui contient les parois cellulaires des cellules lysées est appelé fraction A

5- Le filtrat qui contient le contenu cellulaire des cellules lysées est appelé fraction B

6- Les fractions A et B sont associées et mises en suspension dans la glycérine (>80% en poids) avec ajout de gomme xanthane (stabilisant) et d'acide citrique (conservateur).

Pour les exemples suivants, les retentât et le filtrat sont associés et mis en suspension dans la glycérine à hauteur de 10%.

Exemple 2 : Effet de l'association des deux extraits de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. obtenus dans l'Exemple 1 sur l'expression de médiateurs pro-inflammatoires

L'inflammation cutanée est un phénomène complexe mettant en jeu toutes les cellules de la peau et des cellules sanguines. L'une des premières étapes est l'expression de médiateurs pro-inflammatoires, notamment, l'interleukine 6 (IL-6) et le tumor necrosis factor alpha (TNFa) par les kératinocytes sous l'action d'un stress.

Les études ont été réalisées sur des kératinocytes épidermiques humains normaux, obtenus à partir de plasties abdominales, ensemencés en monocouche dans les conditions de culture adéquates, à savoir dans un milieu KSFM (Kératinocytes sérum free médium, Invitrogen) à une température de 37°C, sous atmosphère à 5% de CÛ2 et saturée en humidité. Les cellules ont été traitées avec l'extrait de cellules meristématique de Syringa vulgaris L. (à 10 ^A % ou 10 ^"3 %).

Après 24h de traitement avec les extraits, les cellules sont soumises aux radiations du simulateur solaire à raison de 760W/m ² (Suntest CPS+). Puis 24 h après irradiation, les surnageants sont récoltés et les expressions de NL6 et du TNFa sont mesurées grâce à un test ELISA commercialisé par Bender MedSystem (BMS213INSTCE pour IL6 et BMS223INSTCE pour le TNFa). Ces résultats sont analysés qu regard de la viabilité résiduelle des cellules (dosage d'activité mitochondriale au MTT).

Les données du tableau I ci-dessous résument les résultats obtenus. Tableau I Expression de l'IL6 et du TNFa après irradiation des kératinocytes.

Plaque témoin Plaque irradiée

non irradiée

[IL-6] [TNFa] [IL-6] [TNFa] %

% IL6

pg/ml pg/ml pg/ml pg/ml TNFa

Témoin milieu

97,6 85,4 415,3 100 275,8 100 de culture

Association

Fractions 10 ^" 74,0 81 ,4 221 ,7 47 229,3 83

⁴ %

Association

Fractions 10 ^" 62,9 60,7 270,3 35 261 ,3 95

³ % Cet exemple montre que les deux fractions (A ou B) présentent chacune une action antiinflammatoire anti-IL6 et anti-TNF.

Il démontre aussi que le traitement avec l'association des extraits (fractions A + B) de cellules méristématiques de Syringa vulgaris L. dans le milieu de culture présente un effet anti-inflammatoire puisque le traitement permet de limiter l'expression des messagers pro-inflammatoires jusqu'à 65% pour l'IL6 à 10 ^"3 % d'extraits et jusqu'à 17% pour le TNFa à 10 ^"4 % d'extraits. De plus, cette association d'extraits présente un effet supérieur sur l'inhibition de l'expression de NL6 par rapport aux extraits pris séparément.

Exemple 3 : Formulation de l'extrait de cellules méristématiques de

Syringa vulgaris L. dans un soin de type sérum

Pourcentage

Composants

(% en poids)

Eau qsp 100

Glycérine 5,000

Jus d'/A/oe barbadensis 5,000

Sorbitol 4,000

Huile de noix de coco 5,000

Alcool 2,800

Stéarate de sorbitane 1 ,700

Extrait d'Acer saccharum 1 ,400

Beurre de Butyrospermum parkii 1 ,100

Extrait d 'Agave tequilana 1 ,000

Alcool stéarylique (Octadécanol) 0,700 cellules méristématiques de Syringa vulgaris 1 ,000

Parfum 0,400

Acide salicylique 0,300

Gomme xanthane 0,300

Acide sorbique 0,150 Soude 0,120

Acétate de tocophérol 0,100

Mangiférine 1

Exemple 4 : Formulation de l'extrait de cellules méristématiques de Syrinqa vulqaris L. dans un soin de jour

Pourcentage

Composants

(% en poids)

Eau qsp 100

Glycérine 5,000

Huile de Coco 5,000

Huile de Helianthus annuus 3,000

Myristate de myristyle 2,000

Huile de sésame 2,000

Acide stéarique 1 ,500

Eau ô'Hamamelis virginiana 1 ,100

Stéarate de glycérol AE 1 ,000 cellules méristématiques de Syringa vulgaris 0,500

Parfum 0,500

Eau de Calendula officinalis 2

Gomme xanthane 0,150

Acide sorbique 0,100

Allantoïne 0,100

Acétate de tocophérol 0,100

Soude 0,030

Mangiférine 1 ,000 Exemple 5 : Formulation de l'extrait de cellules méristématiques de

Syrinqa vulqaris L. dans un soin de nuit.

RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

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