以下に本発明を詳細に説明する。
 本発明の第1の態様は、被験者の血漿中、血 清中、又は肝臓中脂肪酸組成比を指標として 、被験者の状態、又は治療効果を評価する、 NASH又はNAFLDの予防/改善・治療方法、又は、� �験者の管理方法である。

 好ましくは、被験者の血漿中、血清中、� ��は肝臓中脂肪酸組成比を指標として、被験� ��にω3PUFAsを含有する医薬組成物を投与する� �NASH又はNAFLDの予防/改善・治療方法、又は、� ��験者の管理方法である。

 本発明の指標(マーカー)として用いられる� �肪酸としては、特に限定されないが、好ま� �くは、脂肪酸24分画等の公知の手法により測 定できる脂肪酸である。例えばミリスチン酸 、パルミチン酸、パルミトレイン酸(16:1)、ス テアリン酸又はオレイン酸等が挙げられ、中 でも、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイ ン酸が好ましく、とりわけオレイン酸が好ま しい。脂肪酸は、全脂肪酸中のモル%で算出� �ることが望ましい。特に好ましくは、2種以� ��の脂肪酸の比であり、2種以上の脂肪酸につ いてその比を算出する場合、具体的な脂肪酸 組成比としては、例えばオレイン酸(OA)/ステ� ��リン酸(SA)比、ステアリン酸(SA)/パルミチン� ��(PA)比、オレイン酸(OA)/パルミチン酸(PA)比、 パルミトレイン酸/パルミチン酸比、ステア� �ン酸/ミリスチン酸比、パルミチン酸/ミリス チン酸比、等が挙げられ、OA/SA比、SA/PA比、OA /PA比が好ましい。例えば、上記の脂肪酸の3� �、4種を組み合わせて用いて指標としてもよ� ��。
 脂肪酸24分画は、脂肪酸を不飽和脂肪酸も� �め、特定の24種類に分画しガスクロマトグラ フィーにより定量する検査方法である。具体 的には、血漿中の脂肪酸を、例えばFolchらの� ��法(Folch J.ら J. Biol. Chem. 226, 497-509(1957))� �より抽出する。トリコサン酸(Tricosanoic acid,C 23:0)を内部標準として、各脂肪酸を三フッ化� ��ウ素とメタノールにてメチルエステル体と� ��、各脂肪酸のメチルエステル体を、例えば� ��SHIMAZU GC-17Aなどのガスクロマトグラフィー� ��置(島津製作所社製)およびBPX70などのキャピ ラリーカラム(0.25mmID×30m, SGE International Ltd.� ��)を用いて測定、定量することができるが、 これらに限定されない。

 すなわち、本発明の治療方法は、望まし� ��は、血漿中脂肪酸組成比を指標とする治療� ��果又は疾患の程度の評価と医薬組成物の投� ��とが並行してまたは交互に繰り返し行われ� ��治療方法である。

 より具体的には、
(1)被験者の血漿中オレイン酸/ステアリン酸� �、ステアリン酸/パルミチン酸比、オレイン� ��/パルミチン酸比から選ばれる1以上を算出� �、
(2)該被験者にω3多価不飽和脂肪酸、その製薬 学上許容しうる塩及びエステルからなる群か ら選ばれる少なくとも一つを有効成分として 含有する医薬組成物を一定期間投与し、
(3)その後、再び、該被験者の血漿中オレイン 酸/ステアリン酸比、ステアリン酸/パルミチ� ��酸比、オレイン酸/パルミチン酸比から選ば れる1以上を算出し、
(4)医薬組成物の投与前後の、オレイン酸/ス� �アリン酸比、ステアリン酸/パルミチン酸比� ��オレイン酸/パルミチン酸比から選ばれる1� �上を比較して、被験者の状態、又は治療効� �を評価し、
(5)その評価に基づいて該被験者に該医薬組成 物を一定期間投与し、
(6)所望により、又は必要に応じて、(3)ないし (5)を繰り返す、
(7)非アルコール性脂肪肝炎の予防/改善・治� �方法である。

 また、本発明の医薬組成物は、望ましく� ��、血漿中脂肪酸組成比を指標とする治療効� ��又は疾患の程度の評価と医薬組成物の投与� ��が交互に繰り返し行われる医薬組成物であ� ��。

 治療前後の脂肪酸組成比を比較して治療� ��果の評価を行う場合、例えば、OA/SA比を指� �として用いた場合には、一定期間治療を行� �た後における被験者のOA/SA比が、治療前にお けるOA/SA比の値と比較して減少していれば、N ASH又はNAFLDの予防/改善・治療効果が得られる と評価できる。本発明の医薬組成物について も同様に、医薬組成物を一定期間投与した後 における被験者のOA/SA比が、投薬前におけるO A/SA比の値と比較して減少していれば、医薬� �成物による治療効果が発揮されていると評� �できる。SA/PA比、OA/PA比についても、同様に� ��価できる。

 治療効果の評価は、OA/SA比、SA/PA比、又は OA/PA比のいずれか1つを指標として評価できる が、これらの脂肪酸比のうち2つ以上を用い� �評価することが望ましく、その指標のひと� �にOA/SA比が含まれることが望ましい。

 本明細書において脂肪酸組成比は、特に� ��載のない限り、血漿中、血清中、肝臓にお� ��る脂肪酸組成比のいずれを用いてもよい。� ��た、血液中のLDL,VLDLなど特定の分画におけ� �脂肪酸組成比を指標にすることもできる。� �かし、測定の簡便さの点から、血漿中、又� �血清中の脂肪酸組成比を用いることが望ま� �い。脂肪酸組成比の算出に用いる各脂肪酸� �単位は特に限定されず、モル、モル%、重量� ��重量%等いずれを用いてもよいが、経時的に 脂肪酸組成比を比較して評価する場合には、 統一した単位、脂肪酸組成比の算出方法を用 いる。とりわけ、全脂肪酸中のモル%により� �出するのが望ましい。質量/体積濃度(μg/mlな ど)、体積モル濃度(mol/Lなど)などが用いられ� ��もよい。

 また、本明細書において血漿中脂肪酸と� ��、特に記載のない限り、血漿中総脂肪酸(pla sma total fatty acid)を指すが、被験者の状態、 又は治療効果を評価するための指標として血 漿中遊離脂肪酸(plasma free fatty acid)を用いて もよい。また、肝臓中脂肪酸とは、特に記載 のない限り、肝臓中総脂肪酸を指すが、場合 により、肝臓中遊離脂肪酸を用いてもよい。

 脂肪酸組成の測定は、本発明の属する技� ��分野における通常の知識を有する者が実施� ��うるいかなる方法を用いて行ってもよいが� ��常法に従って行うことが特に好ましい。

 血漿中総脂肪酸組成は、被験者から採血� ��て血漿を取り出し、Folch法などの方法によ� �抽出した脂質から加水分解により遊離させ� �全ての脂肪酸について、ガスクロマトグラ� �ィーなどにより分画して定量値、組成値を� �て、脂肪酸組成比を算出することができる� �臨床検査の一項目である全脂質中脂肪酸分� �(例えば、SRL株式会社等の受託臨床検査事業� ��によって実施可能である)を実施し、得られ た個々の脂肪酸の値から算出することもでき る。

 血漿中遊離脂肪酸組成は、Folch法などの� �法により抽出した脂質を薄層板展開を行う� �とで遊離型のみを掻きとり、抽出後に加水� �解をおこないメチルエステル化処理の後、� �スクロマトグラフィーなどにより分画して� �量値、組成値を得て、脂肪酸組成比を算出� �ることができる。血清にも応用可能である� �

 肝臓の脂肪酸組成比も、常法に従い、測� ��可能である。例えば、Folch法などの方法に� �い、肝臓組織5-10mgからクロロホルム/メタノ� ��ル(2:1vol/vol)により脂質を抽出し、クロマト� ��ラフィーにより分画する。これらの測定方� ��、算出方法等は特に限定されず、本発明の� ��する技術分野における通常の知識を有する� ��が実施しうる任意の方法を用いることがで� ��ることは言うまでもない。

 本発明において、ω3PUFAsを含有する医薬� �成物とは、ω3多価不飽和脂肪酸(ω3PUFAs)、そ� ��製薬学上許容しうる塩及びエステルからな� ��群から選ばれる少なくとも一つを有効成分� ��して含有する医薬組成物をいう。

 医薬組成物を一定期間投与して、その投� ��前後で脂肪酸組成比を比較して治療効果を� ��価する場合、医薬組成物が投与される一定� ��間とは、特に限定されないが、7日間以上1� �以下であることが望ましく、好ましくは14日 以上9ヶ月以下、より好ましくは1ヶ月以上6ヶ 月以下、いっそう好ましくは1ヶ月以上3ヶ月� ��下、よりいっそう好ましくは1ヶ月である。

 本発明のω3PUFAsを含有する医薬組成物を� �験者に投与すると、多くの被験者のOA/SA比は 低下傾向を示し、投薬開始から1~2月間程度は 、OA/SA比の低下率は大きく、次第に低下率は� ��さくなる。ここで、本明細書において、脂� ��酸組成比の低下率とは、一定期間あたり脂� ��酸組成比の低下した割合をいい、例えば、O A/SA比の1ヶ月あたりの低下率は、(投薬前のOA/ SA比-1ヶ月投与後のOA/SA比)/投薬前のOA/SA比×100 (%)と算出する。

 本発明の治療方法の好ましい態様は、ω3P UFAsを含有する医薬組成物を1ヶ月ないし2ヶ月 間投与し、被験者の血漿中OA/SA比、SA/PA比、OA /PA比のいずれか1以上の値を投薬前後で比較� �る。投薬後のOA/SA比、SA/PA比、OA/PA比のいず� �かが、投薬前と比較して低下していれば、� �発明の医薬組成物のNASH治療効果が得られる� ��判断できる。

 また、本発明の治療方法の好ましい態様で� ��、ω3PUFAsを含有する医薬組成物を投与開始� �ら1ヵ月後、2ヶ月後など、経時的に被験者の 血漿中OA/SA比を測定し、投薬開始前のOA/SA比� �値と比較する。NASH治療効果が得られるため� ��は、投薬開始から1ヶ月の間のOA/SA比の低下� ��が、望ましくは1%以上、より望ましくは2%以 上、さらに望ましくは3%以上、いっそう望ま� ��くは5%以上である。投薬開始から1~2ヶ月間� �低下率が大きければ、より本発明の医薬組� �物のNASH治療効果が期待できる被験者である� ��で、そのままω3PUFAsを含有する医薬組成物� �投与を継続する。投薬開始から2ヶ月あたり� ��らその低下率が小さくなるが、その後は低� ��したOA/SA比の値を維持するように、投薬を� �続することが望ましい。
 被験者にω3PUFAsを数か月以上投薬すると、� �薬開始当初は変動していた血漿中の脂肪酸� �成の変動がなくなることがある。例えば、ω 3PUFAsの投薬中に、一定期間におけるOA/SA比が� ��変となることがある。この場合には、脂肪� ��の測定数値を治療前と比較したり、他の検� ��を併用して、治療効果が得られているか判� ��する。

 一方、本発明の治療方法の好ましい態様は� ��本発明の医薬組成物を1ヶ月投薬した後のOA/ SA比、SA/PA比、OA/PA比のいずれか1以上が、又� �2以上が、投薬前と比較して上昇、または不� ��の場合には、より治療効果を高めるために� ��(1)ω3PUFAsの用量の増加、(2)他の薬剤の追加� �変更、(3)食事療法の追加、変更、(4)運動療� �の追加、変更等を行うことが望ましい。
 これに対して、OA/SA比、SA/PA比、OA/PA比のい� ��れか1以上が、又は2以上が、投薬前と比較� �て低下の場合には、治療効果があり、治療� �続けることが有効である。

 また、本発明の治療方法の好ましい態様� ��は、本発明の医薬組成物を投与開始から2ヶ 月の間のOA/SA比の低下率が小さい被験者に対� ��ても、上記の治療効果を高めるための手段� ��とることが望ましい。2ヶ月あたりのOA/SA比� ��低下率が小さいとは、特に限定されないが� ��0.5%以下である。

 すなわち、本発明の好ましい態様は、本� ��明のω3PUFAsを含有する医薬組成物を投薬開� �してから1ヶ月間のOA/SA比の低下率を、被験� �の状態、又は治療効果を評価するための指� �として、該被験者にω3PUFAsを含有する医薬組 成物を投与する、非アルコール性脂肪肝炎の 予防/改善・治療方法である。

 より好ましくは、本発明のω3PUFAsを含有� �る医薬組成物を投薬開始してから1ヶ月間のO A/SA比の低下率を、被験者の状態、又は治療� �果を評価するための指標として、1ヶ月あた� ��のOA/SA比の低下率が1%以上になるように、該 被験者にω3PUFAsを含有する医薬組成物を投与� ��る、非アルコール性脂肪肝炎の予防/改善・ 治療方法である。

 とりわけ好ましくは、本発明のω3PUFAsを� �有する医薬組成物を投薬開始してから1ヶ月� ��のOA/SA比の低下率を、被験者の状態、又は� �療効果を評価するための指標として、1ヶ月� ��のOA/SA比の低下率が1%以上になるように、該 被験者にω3PUFAsを含有する医薬組成物を投与� ��、その後、OA/SA比の低下率が小さくなった� �は、その低下率を維持するようにω3PUFAsを含 有する医薬組成物を投与する、非アルコール 性脂肪肝炎の予防/改善・治療方法である。

 本発明の好ましい態様は、上記非アルコ� ��ル性脂肪肝炎の予防/改善・治療方法に用い られる、ω3PUFAsを含有する医薬組成物である� ��

 本発明によれば、1~3ヶ月程度の比較的短� ��的な脂肪酸変動を観察することにより、被� ��者の状態を把握でき、現時点での治療が奏� ��しているか、現時点での治療で十分か、治� ��を変更する必要があるか、奏功する見込み� ��あるかを評価することができる。NASH治療を 反映する他の検査、マーカーの変動に先んじ て、評価ができるため、被験者により適した 治療を提供することが可能となる。

 本発明の予防/改善・治療方法は、少なく とも1ヶ月以上継続されることが望ましく、� �ましくは3ヶ月以上、より好ましくは6ヶ月以 上、さらに好ましくは1年以上、いっそう好� �しくは3年以上、よりいっそう好ましくは5年 以上の期間にわたり継続される。後述する他 の検査、又はマーカーを指標にして治療を終 了できると評価されるまで継続されることが 望ましい。

 本発明の医薬組成物は、少なくとも1ヶ月 以上投与されることが望ましく、好ましくは 3ヶ月以上、より好ましくは6ヶ月以上、さら� ��好ましくは1年以上、いっそう好ましくは3� �以上、よりいっそう好ましくは5年以上の期� ��にわたり投与される。後述する他の検査、� ��はマーカーを指標にして治療を終了できる� ��評価されるまで投与されることが望ましい� ��

 治療効果の評価に基づいて該被験者に前� ��医薬組成物を投与する場合には、NASH治療に とって望ましい被験者の状態、又は治療効果 を得るために、(1)ω3PUFAsの用量の増減、(2)他� ��薬剤の追加、用量の増減、中止、又は休薬� ��(3)食事療法、又は運動療法の追加、変更等� ��、所望により、又は必要に応じて行っても� ��い。

 被験者の状態、又は治療効果の判断は、� ��験者自身又は医師が、被験者の身体的、精� ��的症状から判断し、判断手法は特に限定さ� ��ないが、例えば、KleinerらのNASスコアを用い た場合には、スコアが改善することをいう。 Kleinerらは、NAFLDの肝組織所見の中から3項目� �すなわち脂肪肝(steatosis)、肝細胞風船様腫大 (hepatocellular ballooning)、実質炎症(lobular inflamm ation)の程度をスコア化し(NAFLD activity score:NAS )、NASが5以上をNASHとした。望ましい被験者の 状態、又は治療効果とはNASスコアが1以上低� �することが望ましく、より望ましくは2低下� ��さらに望ましくはNASスコアが4以下になるこ とである。

 Matteoniらは、NAFLDを病理所見から、type1:脂 肪肝のみ、type2:脂肪肝プラス小葉内の炎症(lo bular inflammation)、type3:脂肪肝プラス肝細胞風� ��様腫大(肝細胞膨化:ballooning degeneration)、type 4:脂肪肝、肝細胞風船様腫大プラス肝線維化� ��るいはマロリー体形成に分類し、type3、4をN ASHと診断することを提唱した。Bruntらは、NASH の病理所見を炎症(grading)と線維化の程度(stagi ng)で評価・分類することを提案し、NASHの病� �分類として広く用いられている。被験者の� �態、又は治療効果はこれらの分類を使って� �断してもよい。望ましい被験者の状態、又� �治療効果とは、例えば、Matteoniらの分類を用 いて、type3がtype2になる、type4がtype3になる等� ��挙げられ、例えば、Bruntらの分類を用いて� �炎症(grading)が改善すること、及び・又は、� �維化の程度(staging)が改善することなどをい� �。

 本発明の第2の態様は、被験者の血漿中オ レイン酸/ステアリン酸比が3以上の被験者に� ��与を開始し、血漿中オレイン酸/ステアリン 酸比が2.6未満になるまで投与を継続し、さら に、血漿中オレイン酸/ステアリン酸比が2.6� �満に維持するよう本発明の医薬組成物の投� �を継続する、非アルコール性脂肪肝炎、又� �NAFLDの予防/改善・治療方法である。この場� �、血漿中脂肪酸組成比は、血漿中の総脂肪� �組成を用い、測定単位はモル、又はモル%を� ��いて算出する。血漿脂肪酸24分画の検査数� �を用いて算出することが望ましい。

 本発明の第3の態様は、検査、若しくはマ ーカー、又はこれらの組み合わせを被験者の 状態、又は治療効果を評価するための指標と して、該被験者にω3PUFAsを含有する医薬組成� ��を投与する、非アルコール性脂肪肝炎、又� ��NAFLDの予防/改善・治療方法である。ここで� ��う検査、マーカーは、特に限定されず、脂� ��酸組成比をマーカーのひとつとしてもよい� ��また、脂肪酸のモル%をマーカーのひとつと してもよい。例えば、血漿中オレイン酸のモ ル%が健常人の平均値より高い被験者に対し� �、血漿中オレイン酸の測定数値を指標とし� �、該被験者にω3PUFAsを含有する医薬組成物を 投与することができる。

 検査、マーカーとしては、例えば、画像� ��断(超音波(エコー)、CT、MRIなど)、インスリ� ��抵抗性検査(HOMA-IRなど)、血中インスリン値� ��食後血糖値、BMI、血中酸化ストレスマーカ� ��(チオレドキシン、マロンジアルデヒド、4-h ydroxynonenal、一酸化窒素など)、8-イソプロス� �ン、アディポサイトカイン(アディポネクチ� ��、TNFα、レプチン、MCP1、レジスチンなど)、 線維化マーカー(ヒアルロン酸、IV型コラーゲ ン、プロコラーゲンIIIポリペプチド(PIIIP)、TI MP-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase-1)、CTGF(conn ective tissue growth factor)など)、sTNF-R、血小板� ��、血清フェリチン、血清鉄、ALT、AST、ALT/AST 比、γ-GTP、ALP(アルカリホスターゼ)、KICG、高 感度CRP、トリグリセリド(TG)、LDL-C、HDL-C、総� ��レステロール、遊離脂肪酸(FFA)、リン脂質� �アルブミン、トータルプロテイン、トータ� �ビリルビン、キニノーゲン、17-OH-oleic acid [ omega1-OH-oleic acid],18-OH-oleic acid [omega-oleic acid ]、PDGF-A、PDGF-B、IL-1β、IL-2、IL-6などが挙げら れ、これらの検査は、本発明の属する技術分 野における通常の知識を有する者が実施しう る任意の方法で行うことができる。好ましく は、常法に従って実施することが可能である 。

 特に、本発明の医薬組成物の治療効果を� ��価するための指標として望ましいものとし� ��は、AST、ALT、ALP、トータルビリルビン、チ� ��レドキシン、フェリチン、MCP1、ヒアルロン 酸、IV型コラーゲン、TIMP-1、CTGF、TG、アルブ� ��ン、トータルプロテイン、17-OH-oleic acid[omeg a1-OH-oleic acid],18-OH-oleic acid[omega-oleic acid]な� �が挙げられる。画像診断と組み合わせるの� �より望ましい。

 これらの検査、マーカーは、被験者の状� ��に合わせて組み合わせて選択されることが� ��ましい。

 例えば、前記Matteoniらの分類でtype4(脂肪� �、肝細胞風船様腫大プラス肝線維化あるい� �マロリー体形成肝線維化)に分類される被験� ��は、ヒアルロン酸、IV型コラーゲン、TIMP-1� �アルブミン、トータルプロテイン、ALP、ト� �タルビリルビンのいずれか1以上と、その他� ��検査(HOMA-IR、血中インスリン値、BMI、TGなど )と組み合わせて治療効果を評価する。

 例えば、前記Matteoniらの分類でtype3(脂肪� �プラス肝細胞風船様腫大)に分類される被験� ��は、MCP1、AST、ALT、チオレドキシン、フェリ チン、血小板数、血中インスリン値、BMI、な どにより評価されることが望ましい。

 これらの望ましい検査、マーカーは、ω3P UFAsによるNASHの治療効果、すなわち、病理所� ��の改善などを反映して段階的に検査数値が� ��善するので、これらを測定することにより� ��肝生検の検査の必要性を減らし、被験者負� ��を軽減できる。

 これらの検査、マーカーは、ω3PUFAsによ� �NASH治療効果が得られると段階的に検査数値� ��改善するため、NASH治療の進行状況を把握す るために有効である。また、これらの検査、 マーカーは、疾患が治癒し、治療を終了する 指標(目標値)を設定するために使用可能であ� ��。疾患が治癒したといえる場合の目標値設� ��は、各検査数値の正常値とすることができ� ��。

 本発明の医薬組成物は、これらの検査、� ��はマーカーを指標にして、目標とするマー� ��ー値を達成するために投与される。本発明� ��医薬組成物は、NASH又はNAFLD患者の画像によ� ��所見、検査値、又はマーカー値を改善させ� ��ための、ω3PUFAsを有効成分として含有する� �薬組成物である。本発明の治療方法は、こ� �らの検査、マーカーを指標にして、目標値� �達成するために、ω3PUFAsを含有する医薬組成 物を投与する、NASHの予防/改善・治療方法で� ��る。

 本発明の第4の態様は、NASH又はNAFLD患者の 血漿、血清、又は肝臓中の脂肪酸組成比を改 善させるための、ω3PUFAsを有効成分として含� ��する医薬組成物である。また、NASH又はNAFLD� ��者の血漿中遊離脂肪酸組成比を改善するた� ��のω3PUFAsを有効成分として含有する医薬組� �物である。

 被験者の脂肪酸組成比を改善させるとは� ��例えば、OA/SA比についていえば、医薬組成� �の一定期間投与後のOA/SA比の値が、投与前の 値と比較して、低下することをいう。SA/PA比� ��又はOA/PA比についても同様に判断する。本� �明の第4の態様の医薬組成物の製造方法及び� ��用方法は、第1の態様の治療方法で使用する 医薬組成物と同様である。

 本発明の第5の態様は、ω3PUFAsを有効成分� ��して含有する医薬組成物の投与による治療� ��応答する見込みのあるNASH、又はNAFLD患者を� ��択する方法である。ω3PUFAsに応答する見込� �のあるNASH(又はNAFLD)患者とは、特に身体的症 状の有無は問わないが、血漿中脂肪酸組成比 のOA/SA比が高値の被験者である。健常人の平� ��のOA/SA比と比較してより高値を示す被験者� �あり、具体的には、血漿中OA/SA比が1.5以上の ヒトを意味し、より好ましくは、2以上、と� �わけ好ましくは3以上のヒトを意味する。こ� ��での測定単位はモル、モル%である。

 また、本願発明のω3PUFAsを有効成分として� �有する医薬組成物の投与による治療に応答� �る見込みのあるNASH、又はNAFLD患者とは、投� �開始前と、ω3PUFAsを有効成分として含有する 医薬組成物の投薬開始から1ヶ月ないし3ヶ月� ��の血中脂肪酸濃度を測定し、OA/SA比、SA/PA比 、OA/PA比から選ばれる1以上を比較して、血中 脂肪酸比が低下している被験者である。
 望ましくは、これらの血中脂肪酸比の低下� ��が大きい被験者であり、望ましくは、前記� ��望ましい脂肪酸組成比の低下率を示す被験� ��であって、このような被験者は、本発明の� ��薬組成物により、大きな治療効果が得られ� ��。
 上記被験者を対象として本願の医薬組成物� ��投与を継続することが好ましい。

 すなわち、(1)被験者の血漿中オレイン酸/ス テアリン酸比、ステアリン酸/パルミチン酸� �、オレイン酸/パルミチン酸比から選ばれる1 以上を算出し、
(2)該被験者にω3多価不飽和脂肪酸、その製薬 学上許容しうる塩及びエステルからなる群か ら選ばれる少なくとも一つを有効成分として 含有する医薬組成物を一定期間投与し
(3)その後、再び、該被験者の血漿中オレイン 酸/ステアリン酸比、ステアリン酸/パルミチ� ��酸比、オレイン酸/パルミチン酸比から選ば れる1以上を算出し、
(4)医薬組成物の投与前後の、オレイン酸/ス� �アリン酸比、ステアリン酸/パルミチン酸比� ��オレイン酸/パルミチン酸比から選ばれる1� �上を比較して、投与後の数値が低下してい� �被験者に対して医薬組成物の投与を継続す� �、非アルコール性脂肪肝炎の予防/改善・治� ��方法である。

 また、定期的に血漿中のOA/SA比、SA/PA比、OA/ PA比の1以上を測定し、その値が前回測定時に 比較して上昇している被験者では、肝病変(NA SH、又はNAFLD)が進展している可能性がある。
 このような被験者には、これらの値が正常� ��範囲を超えているか否かに関わらず、早期� ��治療及び予防的治療を開始することができ� ��。このような被験者は、ω3PUFAsへの反応性� �期待できる。
 すなわち、本願発明のω3PUFAsを有効成分と� �て含有する医薬組成物の投与による治療に� �答する見込みのあるNASH、又はNAFLD患者とは� �血漿中のOA/SA比、SA/PA比、OA/PA比の1以上を測� ��して、過去1年以内の値と比較して、その値 が上昇している被験者である。特に、血漿中 脂肪酸組成比のOA/SA比が前回の測定時と比較� ��て0.5以上、より好ましくは1.0以上、さらに� ��ましくは1.5以上上昇した被験者を選択する� ��このとき、前回の測定は、過去1年以内に、 より望ましくは過去6ヶ月以内に行われてい� �ことが望ましい。被験者の選択は、上記の� �標による判断に加えて、肝機能の検査値の� �動も考慮して判断されることが望ましい。� �のように選択した被験者に対して、NASH治療� ��果を持つ任意の薬剤を投与する。薬剤は、� ��験者の身体状態に応じて適宜選択できるが� ��ω3PUFAsを使用することが好ましい。薬剤の� �与は、患者の身体状況を観察しながら、用� �の増減、他の薬剤の追加を行うことができ� �。

 本願発明のω3PUFAsを有効成分として含有� �る医薬組成物の投与による治療に応答する� �込みのあるNASH、又はNAFLD患者とは、血中遊� �脂肪酸濃度の高い被験者である。血中遊離� �肪酸濃度の測定は、本発明の属する技術分� �における通常の知識を有する者が実施しう� �任意の方法によって、一般的に測定可能で� �る。また、例えば、SRL株式会社等の受託臨� �検査事業者に委託する等によっても測定可� �である。基準値は140~850(μEq/L)とされるが、� �事の影響を受けやすいため、例えば、一夜� �食するなど条件を一定にして測定すること� �望ましい。血中遊離脂肪酸濃度の高い状態� �長く続いている被験者が望ましく、例えば6� ��月以上、より望ましくは1年以上継続してい る被験者が望ましい。血中遊離脂肪酸濃度が 高いとは、健常者の血中遊離脂肪酸濃度の平 均値と比較して高値を示すことをいう。

 本願発明のω3PUFAsを有効成分として含有� �る医薬組成物の投与による治療に応答する� �込みのあるNASH、又はNAFLD患者とは、本発明� �医薬組成物投与により、血中トリグリセリ� �値(TG)が低下する被験者である。中でも、投� ��開始前に血中のTG濃度は基準値以上で、本� �明の医薬組成物投与開始から1~6ヶ月程度は� �TGの低下がほとんど見られないが、その後次 第にTG値の低下が見られる被験者がより望ま� ��い。

 本願発明のω3PUFAsを有効成分として含有す� �医薬組成物の投与による治療に応答する見� �みのあるNASH、又はNAFLD患者とは、NASHの初期� ��被験者である。例えば、Bruntらの分類によ� �ば、線維化分類(staging)のステージ1もしくは2 の被験者である。Bruntらは、NASHの病理所見を 炎症(grading)と線維化の程度(staging)で評価・分 類した。中でも線維化の程度(staging)は、以下 の4段階に分類されている。
ステージ1:中心静脈周囲性線維化(肝細胞周囲 性) 限局性、あるいは広範囲、
ステージ2:中心静脈周囲性線維化と門脈域の� ��維化、
ステージ3:中心静脈周囲性線維化と架橋形成� ��伴う門脈域の線維化、
ステージ4:肝硬変

 本願発明のω3PUFAsを有効成分として含有� �る医薬組成物の投与による治療に応答する� �込みのあるNASH、又はNAFLD患者とは、体内の� �化度が高い被験者である。例えば、活性酸� �種(ROS)の産生が促進している被験者、鉄の過 剰蓄積のある被験者である。血清フェリチン の上昇、血清チオレドキシン濃度、8-イソプ� ��スタン値の上昇により評価することができ� ��。

 本願発明のω3PUFAsを有効成分として含有� �る医薬組成物の投与による治療に応答する� �込みのあるNASH、又はNAFLD患者とは、炎症が� �度に起こっている被験者である。例えば、MC P1、高感度CRPなどの測定により評価できる。

 本願発明のω3PUFAsを有効成分として含有� �る医薬組成物の投与による治療に応答する� �込みのあるNASH、又はNAFLD患者とは、AST、ALT� �上昇している被験者である。

 本願発明のω3PUFAsを有効成分として含有� �る医薬組成物の投与による治療に応答する� �込みのあるNASH、又はNAFLD患者とは、アディ� �ネクチン遺伝子、TNF遺伝子の1塩基遺伝子多� ��性(SNP)のある被験者にも好ましく用いられ� �。

 本発明の治療方法は、上記ω3PUFAsに応答� �る見込みのある被験者を選択し、被験者の� �肪酸組成比、他の検査、若しくはマーカー� �又はこれらの組み合わせを指標に、EPA-E等の ω3PUFAsを有効成分とする医薬組成物を、必要� ��あれば、その他の併用薬、食事制限などを� ��み合わせて治療し、検査数値の目標値を達� ��するまで投与する、NASHの治療方法でもある 。

 本発明の第6の態様は、肝生検によってNAS Hと診断され、かつ、血漿中トリグリセリド(T G)が正常値より高い(高トリグリセライド血症 )の被験者のための、ω3PUFAsを有効成分として 含有する、NASHの改善、治療用医薬組成物で� �る。動脈硬化性疾患予防ガイドライン2007年� ��(日本動脈硬化学会編集・発行)における診� �基準に従い、血漿中TGが高い、又は高トリグ リセライド血症とは、空腹時採血による検査 により、トリグリセリドが150mg/dL以上を示す� ��とをいう。

 また、「脂質異常症の被験者」にも望まし� ��用いられる。「脂質異常症」の語は、動脈� ��化性疾患予防ガイドライン2007年版(日本動� �硬化学会編集・発行)における診断基準に従� ��、高LDLコレステロール血症、すなわち、空� ��時採血による血清中LDLコレステロール値が1 40mg/dL以上、低HDLコレステロール血症、すな� �ち、空腹時採血による血清中HDLコレステロ� �ル値が40mg/dL未満、及び高トリグリセライド( トリグリセリドと同義、以下同)血症、すな� �ち、空腹時採血による血清中トリグリセラ� �ド値が150mg/dL以上、の少なくとも一つに該当 する状態を意味する。
 また、「脂質異常症」の語は、米国の国立� ��生研究所(NIH)が2001年5月に発行したATPIIIガイ ドライン(ATP III Guidelines At-A-Glance Quick Desk� �Reference)に従って、血清中LDLコレステロール� ��が130mg/dL以上、血清総コレステロール値が20 0mg/dL以上、血清中HDLコレステロール値が40mg/d L未満の少なくとも一つに該当する状態であ� �てもよい。

 本発明の第7の態様は、「肝生検によって NASHと診断された被験者」又は、「画像診断� �によって脂肪肝と判定された被験者で、か� �、AST又はALTの上昇を認める被験者」のため� �、ω3PUFAsを有効成分として含有するNASHの改� �、治療用医薬組成物である。

 「脂肪肝」の判定は、肝細胞の1/3以上に� ��肪滴が存在すれば脂肪肝と診断されるが、� ��義には、肝細胞の10%以上に脂肪肝を認めれ� ��脂肪肝と診断する。一般的に脂肪肝の判定� ��、超音波、エコー、CT、MRIなど画像診断に� �って行われるが、特に限定されない。例え� �、エコー輝度からbright liverと表現される所� ��を認めれば脂肪肝と診断できる。

 AST(GOTともいう)、ALT(GPTともいう)の上昇と は、通常、正常上限の2~4倍になることをいい 、ASTの正常値は10~40IU/L程度、ALTの正常値は5~4 0IU/L程度といわれているが、正常値(基準値)� �診断の目安であって、医療施設によっても� �なる。AST、及びALTが正常でも肝生検によっ� �NASHと診断されることもある。

 本発明の医薬組成物は、このような被験� ��に対して好ましく用いられ、投薬開始時期� ��特に限定されないが、好ましくは、上記診� ��を初めて受けてから、3年以内に投薬を開始 することが望ましく、より望ましくは1年以� �に投薬を開始することが望ましい。

 本発明の第8の態様は、肝生検によってNASH� �診断され、かつ、AST、又はALTの上昇を認め� �被験者のAST、又はALTを低下させるための、ω 3PUFAsを有効成分として含有するNASHの改善、� �療用医薬組成物である。AST、又はALTを低下� �せるとは、投薬開始前の検査数値を低下さ� �ればよいが、好ましくは投薬開始前の検査� �値の2/3に、より好ましくは1/2に、さらに好� �しくは正常値(基準値)といわれる程度にまで 低下させることが望ましい。
 本発明の医薬組成物の使い方は上述のとお� ��である。

 本発明の第9の態様は、被験者の血漿中、 血清中、又は肝臓中のOA/SA比、SA/PA比、OA/PA比 、他の検査、若しくはマーカー、又はこれら の組み合わせを、肝生検によるNASH確定診断� �代わるNASH発症のマーカーとして使用する方� ��である。ここでの脂肪酸組成比、他の検査� ��又はマーカーは、本発明の第1から3の態様� �記載したとおり組み合わせて使用され、診� �の信頼性を高めることができる。

 本発明の第10の態様は、被験者の脂肪酸� �成比、他の検査、若しくはマーカー、又は� �れらの組み合わせを指標として、脂肪肝を� �つ被験者の中で、NASHに移行する可能性の高� ��被験者を見出す方法である。例えば、被験� ��のOA/SA比、SA/PA比、又はOA/PA比が継続的に高� ��を示す場合には、NASH発症の危険性が高い。 OA/SA比が1ヶ月以上、3ヶ月以上、6ヶ月以上、1 年以上高値が持続する場合、NASH発症の危険� �が高まる。

 本発明の第11の態様は、脂肪肝をもつ被� �者の中で、NASHに移行する可能性の高い被験� ��を見出し、検査値を指標に治療を開始する� ��期を見出し、治療を開始するNASHの予防方法 である。OA/SA比が1ヶ月以上、3ヶ月以上、6ヶ� ��以上、1年以上高値が持続する場合、又は、 OA/SA比が前回の測定と比較して、上昇が続い� ��いる被験者は、他の検査、マーカーと総合� ��に判断して、NASHの予防を開始することが望 ましい。

 本発明の第12の態様は、ω3PUFAsを有効成分 として含有する、NASHによる肝臓の線維化を� �善するための医薬組成物である。改善する� �めの指標としては、OA/SA比を指標とすること ができる。本発明の医薬組成物は、好ましく は、食事療法と組み合わせて、血漿中OA/SA比� ��指標として、それが前回の測定値より低下� ��るように投与する。

 すなわち、好ましくは食事療法と組み合� ��せて、血漿中OA/SA比が前回の測定値と比較� �て低下するように投与される、ω3PUFAsを有効 成分として含有する、NASHによる肝臓の線維� �を改善するための医薬組成物である。

 対象となる被験者は、好ましくは、すで� ��肝臓が線維化している被験者である。具体� ��には、好ましくは、例えば、Matteoniらの分� �によれば、type3後期からtype4に分類される被� ��者(脂肪肝プラス肝細胞風船様腫大プラス肝 線維化あるいはマロリー形成)である。例え� �、線維化マーカー(ヒアルロン酸、IV型コラ� �ゲン、TIMP-1など)で肝の線維化が起きている� ��判断される被験者が好ましい。

 本発明の第13の態様は、ω3PUFAsを有効成分 として含有する、脂肪肝を有する被験者の肝 臓の線維化を抑制するための医薬組成物であ る。また、ω3PUFAsを有効成分として含有する� ��NAFLD、又はNASH患者の、肝癌への移行を抑制� ��るための医薬組成物である。本発明の非ア� ��コール性脂肪肝炎の予防/改善・治療方法を 用いることができる。

 本発明の第14の態様は、本願発明のω3PUFAsを 用いるNASH又はNAFLDの予防/改善・治療方法、� �は被験者の管理方法を宣伝する方法である� �本願発明のNASH又はNAFLDの治療方法、又は被� �者の管理方法に用いられるω3PUFAsを含有する 医薬組成物を宣伝する方法である。
 医師や被験者に対して、本願発明のNASH又は NAFLDの治療方法、又は被験者の管理方法に関� ��る情報を提供する。具体的には、被験者の� ��定期間における特定の脂肪酸組成の変動に� ��り、ω3PUFAsによるNASH治療効果の予測・評価� ��できること等の情報を提供し、宣伝するこ� ��ができる。宣伝方法の手段は問わないが、� ��えば、パンフレットの配布、電子媒体の頒� ��、インターネットを通じた情報提供などが� ��げられる。

 以上、本発明を実施するための最良の形� ��を説明したが、本発明の範囲から離れるこ� ��なく好ましい変更を行うことが可能である� ��とは言うまでも無い。

 以上述べてきた本発明の各態様で用いた� ��語について、さらに詳しく以下に説明する� ��

 多価不飽和脂肪酸(PUFAs)は、分子内に複数 の炭素-炭素二重結合を有する脂肪酸と定義� �れ、二重結合の位置により、ω3、ω6などに� �類される。ω3PUFAsとしては、α-リノレン酸、 EPA、ドコサヘキサエン酸(以下、DHAと記す)な� ��が例示される。本発明で用いられる「PUFAs� �の語は、特に断らない限りは、多価不飽和� �肪酸だけでなく、その製薬上許容される塩� �あるいはエステル、アミド、リン脂質、グ� �セリドなどの多価不飽和脂肪酸誘導体も含� �意味で用いられる。

 本発明で用いられるω3PUFAsは、合成品、� �合成品又は天然品のいずれでもよく、これ� �を含有する天然油の形態でもよい。ここで� �天然品とは、ω3PUFAsを含有する天然油から公 知の方法によって抽出されたもの、粗精製さ れたもの、あるいはそれらを更に高度に精製 したものを意味する。半合成品は、微生物な どにより産生された多価不飽和脂肪酸を含み 、また該多価不飽和脂肪酸あるいは天然の多 価不飽和脂肪酸にエステル化、エステル交換 等の化学処理を施したものも含まれる。本発 明では、ω3PUFAsとして、これらのうちの1種を 単独で、あるいは2種以上を組み合わせて用� �ることができる。

 本発明では、ω3PUFAsとして、具体的には� �EPA、DHA、α-リノレン酸及びこれらの製薬学� �許容しうる塩及びエステルが例示される。� �薬学上許容しうる塩及びエステルは、ナト� �ウム塩、カリウム塩などの無機塩基、ベン� �ルアミン塩、ジエチルアミン塩などの有機� �基、アルギニン塩、リジン塩などの塩基性� �ミノ酸との塩及びエチルエステル等のアル� �ルエステルやモノ-、ジ-及びトリ-グリセリ� �等のエステルが例示される。好ましくはエ� �ルエステルであり、特にEPA-E及び・又はDHA-E� ��好ましい。とりわけ好ましいのは、EPA-E(イ� ��サペント酸エチルエステル)である。

 ω3PUFAsの純度は特に限定されないが、通� �、本剤組成物の全脂肪酸中のω3PUFAsの含量と して、好ましくは25質量%以上、さらに好まし くは50質量%以上、さらに好ましくは70質量%以 上、より好ましくは85質量%以上であり、とり わけ好ましくは本剤組成物がω3PUFAs以外の他� ��脂肪酸成分を実質的に含まない態様である� ��

 例えば、EPA-E及びDHA-Eを用いる場合、EPA-E/ DHA-Eの組成比及び全脂肪酸中のEPA-E+DHA-Eの含� �比は特に問わないが、好ましい組成比とし� �、EPA-E/DHA-Eは、0.8以上であることが好ましく 、更に好ましくは、1.0以上、より好ましくは 、1.2以上である。EPA-E+DHA-Eは高純度のもの、� ��えば、全脂肪酸及びその誘導体中のEPA-E+DHA- E含量比が40質量%以上のものが好ましく、55質 量%以上のものがさらに好ましく、84質量%以� �のものがさらに好ましく、96.5質量%以上のも のが更に好ましい。他の長鎖飽和脂肪酸含量 は少ないことが好ましく、長鎖不飽和脂肪酸 でもω6系、特にアラキドン酸含量は少ないこ とが望まれ、2質量%未満が好ましく、1質量%� �満がさらに好ましい。

 本発明の組成物に用いられるEPA-E及び・� �はDHA-Eは、魚油あるいは魚油の濃縮物に比べ 、飽和脂肪酸やアラキドン酸等の心血管イベ ントに対して好ましくない不純物が少なく、 栄養過多やビタミンA過剰摂取の問題もなく� �用効果を発揮することが可能である。また� �エステル体のため主にトリグリセリド体で� �る魚油等に比べて酸化安定性が高く、通常� �酸化防止剤添加により十分安定な組成物を� �ることが可能である。

 このEPA-Eは、日本において、閉塞性動脈� �化症(ASO)及び高脂血症治療薬として入手可能 な高純度EPA-E(96.5質量%以上)含有軟カプセル剤 (商品名エパデール:持田製薬社製)を用いるこ とができる。また、EPA-EとDHA-Eの混合物は、� �とえば、米国で高TG血症治療薬として市販さ れているロバザ(Lovaza:グラクソ・スミス・ク� ��イン:EPA-E約46.5質量%、DHA-E約37.5質量%含有す� ��軟カプセル剤)を使用することもできる。

 ω3PUFAsとして、精製魚油も使用できる。� �た、ω3PUFAsのモノグリセリド、ジグリセリド 、トリグリセリドまたはこれらの組合せなど も好ましい態様の一つである。例えばインク ロメガ(lncromega)F2250、F2628、E2251、F2573、TG2162� �TG2779、TG2928、TG3525及びE5015(クローダ インタ ーナショナル ピーエルシー(Croda International� �PLC、Yorkshire、England))、及びEPAX6000FA、EPAX5000TG 、EPAX4510TG、EPAX2050TG、EPAX7010EE、K85TG、K85EE及� �K80EE(プロノバ バイオファーマ(Pronova Biopharm a、Lysaker、Norway))などの種々のω3PUFAs、その塩 及びエステルを含有する製品が市販されてお り、これらを入手して使用することもできる 。

 本発明の医薬組成物及び治療方法は、ω3P UFAsの他に、他の薬剤と組み合わせて、併用� �て用いられてもよい。本発明における他の� �剤は、特に限定されないが、本発明の効果� �減弱しないことが好ましく、例えば、肝庇� �剤、血糖降下剤、高脂血症治療薬、降圧剤� �抗酸化剤、抗炎症剤などが例示される。

 ここで肝庇護剤としては、例えば、ウル� ��デオキシコール酸やベタインがあげられる� ��また、血糖降下剤としては、例えば、メト� ��ルミンのようなビグアナイド薬、インスリ� ��やインスリン誘導体、トルブタミド、グリ� ��ラジド、グリベンクラミド、グリメピリド� ��ようなスルホニルウレア剤、ナテグリニド� ��レパグリニド、ミチグリニドのような速効� ��インスリン分泌促進剤、アカルボース、ボ� ��リボース、ミグリトールのようなαグルコ� �ダーゼ阻害剤、ピオグリタゾン、ロジグリ� �ゾン、トログリタゾンのようなチアゾリジ� �類等があげられる。また、高脂血症治療薬� �しては、例えば、プラバスタチン、シンバ� �タチン、アトルバスタチン、フルバスタチ� �、ピタバスタチン、ロスバスタチン、セリ� �スタチンのようなHMG-CoA還元酵素阻害剤やシ� ��フィブラート、クロフィブラート、クリノ� ��ィブラート、ベザフィブラート、フェノフ� ��ブラートのようなフィブラート系薬剤、あ� ��いはオルリスタットのような脂肪分解酵素� ��害剤、エゼチミブがあげられる。また、降� ��剤としては、例えば、カプトプリル、アラ� ��プリル、イミダプリル、エナラプリル、シ� ��ザプリル、テモカプリル、デラプリル、リ� ��ノプリル、ベナゼプリルのようなアンジオ� ��ンシン変換酵素阻害剤、ロサルタン、バル� ��ルタン、カンデサルタン、テルミサルタン� ��オルメサルタン、イルベサルタン、エプロ� ��ルタンのようなアンジオテンシン受容体阻� ��剤、アリスキレンのようなレニン阻害剤、� ��ムロジピン、ニフェジピン、ベニジピン、� ��カルジピン、ニルバジピン、シルニジピン� ��アゼルニジピン、マニジピン、ニトレンジ� ��ン、パルニジピン、ニソルジピン、エホニ� ��ピン、フェロジピン、アラニジピン、ジル� ��アゼム、ベラパミル、ベプリジルのような� ��ルシウム拮抗剤等があげられる。また、抗� ��化剤としては、例えば、ビタミンCやビタミ ンE等のビタミン類、Nアセチルシステイン、� ��ロブコールなどがあげられる。また、抗炎� ��剤としては、例えば、ペントキシフィリン� ��のサイトカイン産生抑制剤、ロイコトリエ� ��受容体拮抗剤、ロイコトリエン生合成阻害� ��、NSAIDs、COX-2選択的阻害剤、M2/M3拮抗剤、コ ルチコステロイド、ファルネシル酸プレドニ ゾロンなどのステロイド、Hi(ヒスタミン)受� �体拮抗剤、サラゾスルファピリジン、メサ� �ジンなどのアミノサリチル酸、等があげら� �る。また、免疫抑制剤としては、例えば、� �ザチオプリン、6-メルカプトプリン、タクロ リムスなどがあげられる。また、C型肝炎ウ� �ルス(HCV)用の抗ウイルス薬としては、例えば 、インターフェロン、プロテアーゼ阻害剤、 ヘリカーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤など があげられる。

 本発明において予防とは、疾患の発症を� ��防することのみでなく、発症時期を遅延さ� ��ることおよび発症率を低下させることも含� ��。本発明において改善とは、疾患の何らか� ��パラメーターを改善することのみでなく、� ��者の自覚症状や生活の質(Quality of life)を改 善することを含む。また、本発明において治 療とは、既に疾患を発症した患者に薬物を投 与することのみでなく、疾患を発症するリス クの高い患者に薬物を投与する予防的治療も 含む。

 本発明において、有効成分の「併用」と� ��、有効成分を組合せて用いることであり、� �3PUFAs及び他の薬剤を共に含む配合剤として� �与すること、及びω3PUFAsと他の薬剤とがそれ ぞれ別個の製剤として同時期にもしくは時間 差をおいて別々に投与されることを含む。「 別個の製剤として同時期にもしくは時間差を おいて別々に投与される」態様には、(1)ω3PUF Asを投与される被験者に、他の薬剤を有効成� ��として含有する組成物を投与する態様、及� ��(2)他の薬剤を投与される被験者に、ω3PUFAs� �効成分として含有する組成物を投与する態� �が含まれる。また、「併用」とは必ずしも� �験者の体内、例えば血中において同時に存� �する場合に限られないが、本発明において� �併用」とは、いずれか一方の薬剤の作用・� �果が被験者の体内に発現している状態で他� �の薬剤を投与する使用態様をいう。本発明� �組成物を用いてNAFLDもしくはNASHに関連する� �患の予防/改善または治療効果が得られるよ� ��な使用態様である。好ましくは、被験者の� ��内、例えば血中において同時に存在する使� ��態様が望ましく、また好ましくは、被験者� ��対して、一方の薬剤を投与してから24時間� �内に他方の薬剤を投与する使用態様が好ま� �い。

 本発明の医薬における併用の形態は、特� ��限定されず、有効成分が組み合わされてい� ��ばよい。このような薬剤の形態としては、� ��えば(1)有効成分を同時製剤化して得られる� ��一の製剤の投与、(2)有効成分を別々に製剤� ��して得られる2種類の製剤を組合せてキット とし、または組み合わせないで別々に用意し 、同一投与経路での同時投与に使用する。(3) 有効成分を別々に製剤化して得られる2種類� �製剤を組合せてキットとし、または組み合� �せないで別々に用意し、同一投与経路で時� �差をおいて投与する。(4)有効成分を別々に� �剤化して得られる2種類の製剤を組合せてキ� ��トとし、または組み合わせないで別々に用� ��し、異なる投与経路(同一被験者の異なる部 位から投与する)で同時に投与する。(5)有効� �分を別々に製剤化して得られる2種類の製剤� ��組合せてキットとし、または組み合わせな� ��で別々に用意し、異なる投与経路(同一被験 者の異なる部位から投与する)で時間差をお� �て投与する。

 これらの時間差をおいて投与する場合は� ��例えば、ω3PUFAsと他の薬剤の順序での投与� �または逆の順序での投与がある。同時に投� �する場合、投与経路が同一であれば投与直� �に両薬剤を混合してもよく、別々に投与し� �も良い、また種々の目的で計画的に投与時� �をずらして用いることができる。具体的な� �としては、一方の薬剤を投与し、その効果� �発現し始める時期もしくは十分に発現して� �る間に、他方の薬剤を投与して作用させる� �法がある。また、一方の薬剤を徐放化して1� ��1回投与とし、他方の薬剤を1日複数回、例� �ば2ないし3回投与としてもよいし、同様に1� �1回投与としてもよい。両薬ともに1日1回投� �、さらには1日1回同時投与あるいは配合剤と すれば、被験者の服薬の負担を軽減し、服薬 コンプライアンスが向上して予防/改善・治� �効果及び副作用軽減効果も増すことが期待� �れ、好ましい。また、例えば、両薬剤を投� �し、その効果が発現し始める時期もしくは� �分発現している時期に、一方の薬剤の投薬� �中止する方法がある。薬剤の投薬を中止す� �場合には、段階的に薬剤の用量を減量して� �よい。また、例えば、一方の薬剤の休薬期� �に他方の薬剤を投与する方法が挙げられる� �

 望ましくは、ω3PUFAs及び他の薬剤を併用� �た治療効果が、併用の場合と同じ用量のω3PU FAs及び他の薬剤を個々に用いて得られる治療 効果の和よりも大きな効果を得られる態様が 好ましい。ここでの治療効果とは、NAFLDもし� ��はNASHに関連する疾患の予防/改善または治� �効果あるいは肝硬変や肝癌への進行抑制で� �れば、特に限定されないが、上述の脂肪酸� �の改善の他、例えば、画像検査(超音波、CT� �MRIなど)、肝生検あるいは血漿中の線維化マ� ��カー(IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、TIMP-1� ��)により測定した肝線維化の程度、血清ASTや ALT値の減少、AST/ALT比の減少、アディポネク� �ンの増加、TNFα減少、高感度CRPの減少や血中 酸化ストレスマーカー(フェリチン、チオレ� �キシン)の減少、HOMA-IR改善などが例示される 。その他のNAFLDもしくはNASHに関連する生化学 的・病理学的あるいは病態パラメータにより 予防/改善または治療効果をモニタリングし� �もよい。

 本発明の組成物に用いられるω3PUFAs及び� �の薬剤の投与量及び投与期間は対象となる� �用を現すのに十分な量及び期間とされるが� �その剤形、投与方法、1日当たりの投与回数� ��症状の程度、体重、年齢等によって適宜増� ��することができる。

 経口投与する場合は、例えばEPA-E及び・� �はDHA-Eとして0.1~10g/日、好ましくは0.3~6g/日、 より好ましくは0.6~4g/日、さらに好ましくは0. 9~2.7g/日を1ないし3回に分けて投与するが、必 要に応じて全量を1回あるいは数回に分けて� �与してもよい。また、他の薬剤の投与量に� �じて減量することも可能である。投与時間� �食中ないし食後が好ましく、食直後(30分以� �)投与が更に好ましい。上記投与量を経口投� ��する場合、投与期間は1年以上、好ましくは 2年以上、より好ましくは3.5年以上、更に好� �しくは5年以上であるが、NASHに関連する病態 あるいは生化学的指標などが継続している間 、NASHの発症及び・又は再発の危険度が高い� �態が続いている間は投与を継続することが� �ましい。また、例えば1日おきに投与する、1 週間に2~3日投与する態様や、場合により1日~3 ヵ月程度、好ましくは1週間~1ヵ月程度の休薬 期間を設けることもできる。

 本発明の組成物に用いられる他の薬剤の� ��与量は、その薬剤単独での用法・用量の範� ��内で使用されることが好ましいが、その種� ��、剤形、投与方法、1日当たりの投与回数は 、症状の程度、体重、性別、年齢等によって 適宜増減することができる。ω3PUFAsの投与量� ��応じて減量することも可能である。副作用� ��減の観点で1日投与量をできるだけ減量し、 徐放化錠を使用して1日1回投与とすることが� ��り好ましい。上記投与量を経口投与する場� ��、投与期間は1年以上、好ましくは2年以上� �より好ましくは3.5年以上、更に好ましくは5� ��以上であるが、NASHに関連する病態あるいは 生化学的指標などが継続している間、NASHの� �症及び・又は再発の危険度が高い状態が続� �ている間は投与を継続することが望ましい� �また、例えば1日おきに投与する、1週間に2~3 日投与する態様や、場合により1日~3ヵ月程度 、好ましくは1週間~1ヵ月程度の休薬期間を設 けることもできる。

 ω3PUFAs及び他の薬剤の併用では、ω3PUFAs及 び・又は他の薬剤の用量を一般的に使用され る通常の用量より低く設定することも可能で ある。例えば、個々の薬剤を単独で治療効果 を得るには不十分な用量を用いることも可能 である。これにより、薬剤投与による副作用 を軽減することができる利点を有する。

 ω3PUFAs及び・又は他の薬剤単独の用量が� �治療効果を得るには不十分な用量であって� �ω3PUFAs及び他の薬剤を併用した治療効果が、 併用の場合と同じ用量のω3PUFAs及び他の薬剤� ��個々に用いて得られる治療効果の和よりも� ��きな効果を得られるような使用態様も望ま� ��い。

 ω3PUFAs単独の用量が、治療効果を得るに� �不十分な用量とは、被験者の個々の状態や� �型により変動し、限定されるものではない� �、例えば、EPA-E及び・又はDHA-Eの場合、1日あ たりの投与量が、0.1g以上2g未満、好ましくは 0.2g以上1.8g以下、さらに好ましくは0.3g以上~0. 9g以下、また好ましくは、0.3g以上~0.6g以下で� ��る。

 他の薬剤及びω3PUFAsの1日投与量、投与回� ��あるいは投与比率は、特に限定されないが� ��肝線維化の程度、血清ASTやALTの減少、AST/ALT 比の減少、アディポネクチンの増加、TNFαの� ��少や血中酸化ストレスマーカーの減少、HOMA -IR改善などの検査値を確認しながら適宜増減 できる。

 本発明の医薬組成物は、有効成分を化合� ��(精製の際に不可避的に含まれる他の成分を 含む場合もある)をそのまま投与するか、或� �は一般的に用いられる適当な担体または媒� �、賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、香味� �、必要に応じて滅菌水や植物油、更には無� �性有機溶媒あるいは無害性溶解補助剤(たと� ��ばグリセリン、プロピレングリコール)、乳 化剤、懸濁化剤(例えばツイーン80、アラビア ゴム溶液)、等張化剤、pH調整剤、安定化剤、 無痛化剤、嬌味剤、着香剤、保存剤、抗酸化 剤、緩衝剤、着色剤などの添加剤と適宜選択 組み合わせて適当な医薬用製剤に調製するこ とができる。添加剤として、たとえば乳糖、 部分α化デンプン、ヒドロキシプロピルセル� ��ース、マクロゴール、トコフェロール、硬� ��油、ショ糖脂肪酸エステル、ヒドロキシプ� ��ピルメチルセルロース、酸化チタン、タル� ��、ジメチルポリシロキサン、二酸化ケイ素� ��カルナウバロウなどを含有しうる。

 特に、ω3PUFAsは高度に不飽和であるため� �抗酸化剤たとえばブチレート化ヒドロキシ� �ルエン、ブレチート化ヒドロキシアニソー� �、プロピルガレート、没食子酸、医薬とし� �許容されうるキノン及びα-トコフェロール� �ら選ばれる少なくとも1種を抗酸化剤として� ��効量含有させることが望ましい。

 製剤の剤形は、本発明の有効成分の併用� ��態によっても異なり、特に限定されないが� ��経口製剤としては、例えば、錠剤、フィル� ��コーティング錠、カプセル剤、マイクロカ� ��セル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、経口用液� ��製剤、シロップ剤、ゼリー剤、吸入剤の形� ��、非経口製剤としては、例えば、軟膏、坐� ��、注射剤(乳濁性、懸濁性、非水性)あるい� �用時乳濁または懸濁して用いる固形注射剤� �輸液製剤、経皮吸収剤などの外用剤で、経� �及び静脈内あるいは動脈内、吸入、直腸内� �膣内あるいは外用を問わず被験者に投与さ� �るが、経口服用できる被験者に対しては、� �便な経口製剤が望ましく、とりわけカプセ� �たとえば、軟質カプセルやマイクロカプセ� �に封入して、あるいは錠剤、フィルムコー� �ィング錠での経口投与が好ましい。また、� �溶製剤や徐放化製剤として経口投与しても� �く、透析患者や嚥下困難な患者などにはゼ� �ー剤として経口投与することも好ましい。

 本発明の組成物は、ω3PUFAsと他の薬剤と� �別々に製剤して得られる2種類の製剤を組み� ��わせて使用する場合には、それぞれ公知の� ��法により製剤化する。また、本発明の組成� ��は、ω3PUFAsと他の薬剤とを有効成分とする� �合剤とすることができる。

 本発明の医薬組成物を、ω3PUFAsと他の薬� �とを有効成分とする配合剤とする場合には� �配合剤の剤形は特に限定されず、経口製剤� �しては、例えば、錠剤、フィルムコーティ� �グ錠、カプセル剤、マイクロカプセル剤、� �粒剤、細粒剤、散剤、経口用液体製剤、シ� �ップ剤、ゼリー剤の形で、非経口製剤とし� �は、例えば、注射剤、輸液製剤、経皮吸収� �などの外用剤で被験者に投与される。例え� �、徐放化した製剤、あるいは、2剤を時間差� ��放出する製剤なども含む。

 本発明の配合剤は、有効成分に加え、薬� ��的に許容され得る賦形剤を含むことができ� ��。適宜、公知の抗酸化剤、コーティング剤� ��ゲル化剤、嬌味剤、着香剤、保存剤、抗酸� ��剤、乳化剤、pH調整剤、緩衝剤、着色剤な� �を含有させてもよい。

 本発明の配合剤は、本発明の属する技術� ��野における通常の知識を有する者が実施し� ��る任意の方法によって製剤化することがで� ��る。好ましくは、常法に従って製剤化する� ��とが可能である。ω3PUFAsの粉末は、例えば� �(A)EPA-E、(B)食物繊維、(C)デンプン加水分解物 及び・又は低糖化還元デンプン分解物、及び (D)水溶性抗酸化剤を含有する水中油型乳化液 を、高真空下で乾燥させ、粉砕処理する(特� �平10-99046)など公知の方法により得られる。� �られたEPA-Eの粉体と、ビグアナイド系血糖降 下薬の粉体とを用いて、好ましくは常法に従 い、顆粒剤、細粒剤、散剤、錠剤、フィルム コーティング錠、チュアブル錠、徐放錠、口 腔内崩壊錠(OD錠)などを得ることができる。� �ュアブル錠であれば、例えば、EPA-Eをヒドロ キシプロピルメチルセルロースなどの水溶性 高分子溶液中に乳化し、得られた乳化液を乳 糖などの添加剤に噴霧して粉粒体を得(特開� �8-157362)、ビグアナイド系血糖降下薬の粉体� �混合して打錠することなど公知の方法によ� �得ることができる。徐放錠であれば、例え� �(1)EPA-E及びビグアナイド系血糖降下薬のいず れかを内層に、他方を外層に形成する、(2)各 成分を含有する円盤状のマトリックスを2層� �重ねる、(3)一成分を含有する粒状カプセル� �他方の成分を含有するマトリックス中に埋� �込む、(4)両剤を予め混合した後に何らかの� �放のための工夫が施される、などが挙げら� �る。各有効成分は放出速度を調整されてい� �ことが望ましく、両剤同時に放出されても� �いし、別々に時間差で放出されてもよい。� �腔内崩壊錠であれば、例えば特開平8-333243な ど、口腔用フィルム製剤であれば、例えば特 開2005-21124など、公知の方法に準じて製造す� �ことができる。

 本発明の配合剤は、有効成分の薬理作用� ��発現できるように、放出、吸収されること� ��望ましい。本発明の配合剤は、有効成分の� ��出性に優れる、有効成分の吸収性に優れる� ��有効成分の分散性に優れる、配合剤の保存� ��定性に優れる、被験者の服用利便性、ある� ��はコンプライアンスに優れる製剤の少なく� ��もいずれか1以上の効果を持つことが望まし い。

 本発明の組成物は、動物とりわけ哺乳動� ��のNAFLD、特にNASHの予防/改善または治療、再 発予防あるいは肝硬変や肝癌への進行抑制に 有効である。哺乳動物とは、例えば、ヒトや ウシ、ウマ、ブタなどの家畜動物やイヌ、ネ コ、ウサギ、ラット、マウスなどの家庭用動 物等があげられ、好ましくはヒトである。特 に、糖尿病、高脂血症、高TG血症、メタボリ� ��クシンドローム、高血圧、インスリン抵抗� ��を有するNASH患者において好ましく用いられ る。尿酸値の高い被験者、全身の炎症状態の 高い被験者、ω3PUFAs以外に多種類の薬剤を服� ��している被験者、ω3PUFAs以外の薬剤を服用� �より副作用の経験のある被験者などにも有� �である。また、配合剤やキット剤とするこ� �で被験者の服薬の負担を軽減し、服薬コン� �ライアンスを高めることで更に予防/改善ま� ��は治療効果を高めることができる。

 以下に本発明の実施例を示すが、本発明� ��、実施例に限定して解釈されるべきではな� ��。