L'acide chicorique lévogyre et l'acide chicorique dextrogyre sont présents à l'état naturel, dans certaines espèces végétales. En particulier, l'acide lévogyre est présent dans les espèces Echinacea, alors que l'acide dextrogyre est présent dans les espèces Chichorium.

L'acide chicorique lévogyre est l'un des principes actifs importants des préparations phytopharmacologiques à base d'extraits d'Echinacea. Il est utilisé pour ses propriétés immunostimulantes et antivirales. Plus précisément, cette-molécule stimule la production de phagocytes, bloque l'activité de la hyaluronidase, et inhibe de façon spécifique et non- . e cytotoxique l'intégrase du VIH de type 1 tout en montrant un effet synergétique lors d'essais in vitro de trithérapie contre ce virus à l'origine du SIDA.

Le développement de cette molécule comme médicament antiviral nécessite une production facile et économique. Or la source végétale, l'Echinacea, ne peut fournir une quantité suffisante de ce composé. Comme. pour d'autres composés actifs d'origine végétale, les recherches se sont donc orientées vers une synthèse chimique.

En dépit d'une structure chimique a priori simple, seuls deux procédés de synthèse ont été décrits à ce jour.

Scarpati et al. ont décrit, dans « Chicoric Acid (Dicaffeyltartaric acid) : Its isolation From Chicory (Chicorium intybus) and Synthesis », Tetrahedron, 1958, Vol. 4, pp. 43-48, un procédé de synthèse de l'acide chicorique impliquant la condensation du chlorure d'acide carbonylcaféique avec l'acide tartrique. Ce procédé présente des inconvénients importants, qui sont que le chlorure d'acide est très instable, et le rendement peu élevé.

Un autre procédé faisant intervenir le chlorure d'acyle d'un autre dérivé protégé de l'acide dihydroxycinnamique a été développé de nombreuses années plus tard par Zhao et Burke. Le procédé décrit dans « Facile Synthesis of (2R, 3R)- (-)- and (2S, 3S)- (+) -Chicoric Acid », Synthetic Communications, 28 (4), 737-740 (1998) implique la réaction d'un ester de di- tertiobutyle de l'acide tartrique et d'un chlorure de dihydroxycinnamoyle portant des groupes de protection acétyles sur ses fonctions phénoliques. La demande de brevet WO00/63152, de Burke et al., décrit le même procédé ainsi qu'un procédé impliquant la réaction d'un chlorure de dihydroxycinnamoyle portant des groupes de protection comprenant un diol ou une éthanolamine, ou un composé dihydroxy substitué par un groupement alkylester. Un tel procédé présente encore certains inconvénients en terme de rendements et de coût, en particulier en raison du coût élevé du diester.

Aucun autre procédé n'a été décrit à ce jour, en dépit des inconvénients cités.

Après de longues recherches, la Demanderesse a conçu et mis au point un nouveau procédé de synthèse de l'acide chicorique, présentant un rendement intéressant

et mis en oeuvre à partir de composés stables disponibles dans le commerce.

Le procédé mis au point comprend la réaction de deux molécules, dont certaines fonctions sont protégées par le même groupe de protection, pour obtenir un seul composé. Le même groupe de protection étant utilisé pour les deux molécules réagissantes, la déprotection du composé obtenu peut s'effectuer en une étape unique.

Le procédé selon l'invention est donc caractérisé en ce qu'il comprend une étape unique de déprotection.

Plus précisément, les groupements protecteurs sont des groupements benzyles, et l'étape de déprotection unique du procédé selon l'invention est une étape de débenzylation.

La Demanderesse a déterminé les conditions préférées pour que l'étape de déprotection soit chimiosélective, c'est-à-dire que la molécule soit déprotégée sans pour autant toucher les liaisons esters fragiles ni les doubles liaisons réductibles des unités cinnamoyles, et qu'ainsi on obtienne l'acide chicorique avec un bon rendement.

Un procédé de synthèse de l'acide chicorique selon l'invention comprend donc d) la diestérification de l'acide 3, 4- dibenzyloxycinnamique en présence de tartrate de dibenzyle pour obtenir le composé perbenzylé 2,3-bis (3,4-dibenzyloxy- cinnamoyl)-dibenzyl-tartrate, e) la débenzylation dudit composé perbenzylé pour obtenir l'acide chicorique.

La débenzylation est effectuée de préférence par hydrogénolyse en une étape au moyen de palladium avec un promoteur au silane. De manière plus préférée,

on mélange d'abord Pd (OAc) 2-Et3N avec le composé perbenzylé dans une solution de CH2C12 ; puis on ajoute goutte à goutte Et3SiH en excès (4 équivalents par groupe benzyle). Le meilleur résultat est obtenu en effectuant la réaction à une concentration en composé perbenzylé de 30 mM.

Un procédé de synthèse selon l'invention peut comprendre les étapes suivantes, à partir de composés disponibles dans le commerce : a) estérification de l'acide caféique, b) dibenzylation de l'ester obtenu, c) saponification pour obtenir l'acide 3,4- dibenzyloxycinnamique, d) diestérification de l'acide 3,4- dibenzyloxycinnamique en présence de tartrate de dibenzyle pour obtenir le composé perbenzylé 2,3-bis (3,4-dibenzyloxy- cinnamoyl)-dibenzyl-tartrate, e) débenzylation du composé perbenzylé pour obtenir l'acide chicorique.

Ce procédé est, représenté sur le schéma de réaction 1 ci-après. HO 0 EtO 0 SJ a g b EtONCO HO 4 4 (6) A etc 0 a b zu c6) HO OH HO OH 1 (4) BnO OH/ c %' Schéma 1 f HO COOBn HO O (9) HO (COOBN 2x --" j6 Bu0 Bn OBn Bn Bn0 H 2x HO \ 0 COOBN 0 O xCOOBn WNSY° BnO COON O COOH /\ 1 COOL BnO HO Zen Ho (12) (1)

Le rendement global de réaction du procédé selon l'invention comprenant les étapes a) à e) est supérieur à 60%, de préférence supérieur à 65%.

Dans un mode de mise en oeuvre particulier, les conditions opératoires de chaque étape sont les suivantes : a : EtOH, AcCl, rt, 2 jours b : BnBr, K2CO3, EtOH, reflux, 20h c : KOH, EtOH, reflux, 20h d : EDCI, DMAP, CH2Cl2, rt, 1 jour e : Pd (OAc) 2, Et3SiH, Et3N, CH2Cl2, rt, 18h Les composés 9,12 et 1 sont des molécules qui peuvent être présentes sous forme lévogyre et/ou dextrogyre.

Ainsi, le composé 9 est utilisé sous forme de (2R, 3R)- (+)-dibenzyl-L-tartrate (9a) ou de son énantiomère (2S, 3S)- (-)-dibenzyl-D-tartrate (9b). Les tartrates de dibenzyle lévogyre et dextrogyre (9a, 9b) sont disponibles dans le commerce et peu coûteux, ou peuvent facilement être préparés à partir de l'isomère d'acide tartrique correspondant, par exemple par chauffage à 200°C dans de l'alcool benzylique ou par traitement avec l'alcool benzylique en utilisant une quantité catalytique d'acide p-toluènesulfonique dans du benzène au reflux.

Le composé 12 est utilisé sous forme de (2R, 3R)- (-)-2, 3-bis (3,4-dibenzyloxycinnamoyl)-dibenzyl- L-tartrate (12a) ou sous forme de (2S, 3S)- (+)-2, 3- bis (3,4-dibenzyloxycinnamoyl)-dibenzyl-D-tartrate (12b).

Enfin, l'acide chicorique peut être sous forme lévogyre : acide (-) chicorique ou acide 2R, 3R-0-

dicaféoyltartarique (la) ; ou sous forme dextrogyre : acide (+) chicorique ou acide 2S, 3S-0- dicaféoyltartarique (lb).

Il est important de disposer d'un procédé permettant de synthétiser préférentiellement l'acide chicorique lévogyre ou l'acide chicorique dextrogyre.

En effet, les deux stéréoisomères ne présentent pas les mêmes propriétés et peuvent être utilisés de façon indépendante l'un de l'autre. En particulier, on a mis en évidence que l'acide chicorique lévogyre présente certaines propriétés intéressantes, en particulier immunostimulantes et anti-virales.

Dans le composé selon l'invention, les conditions de débenzylation permettent de respecter également la stéréospécificité de la réaction : si on utilise le composé lévogyre 12a, on obtient l'acide chicorique lévogyre la, alors que si on utilise le composé dextrogyre 12b, on obtient l'acide chicorique dextrogyre lb.

Dans ces conditions, le rendement de l'étape e) est de l'ordre de 92% pour l'acide chicorique lévogyre, et de l'ordre de 66% pour. l'acide chicorique dextrogyre.

Le composé 2,3-bis (3,4-dibenzyloxycinnamoyl)- dibenzyl-tartrate 12 est un composé nouveau. Comme déjà 'mentionné, il peut être sous forme lévogyre ou dextrogyre, ou sous forme d'un mélange de ces stéréoisomères, en particulier d'un racémate. Ce composé peut avoir une activité biologique intéressante et peut donc être utilisé dans une composition pharmaceutique.

Il peut également être utilisé pour synthétiser l'acide chicorique par débenzylation, comme on l'a

décrit plus haut dans le cadre de l'étape e) de débenzylation.

Le composé 12 peut être synthétisé par diestérification de l'acide 3,4-dibenzyloxycinnamique (7) en présence de tartrate de dibenzyle (9).

L'utilisation de (2R, 3R)- (+)-dibenzyl-L-tartrate (9a) permet d'obtenir de manière stéréospécifique le composé lévogyre (12a), alors que l'utilisation de (2S, 3S)- (-) -dibenzyl-D-tartrate (9b) permet d'obtenir de manière stéréospécifique le composé dextrogyre (12b).

Dans un mode de réalisation préféré, qui permet d'éviter toute racémisation, on utilise comme promoteur de la diestérification de l'étape d) un promoteur de type carbodiimide tel que l'hydrochlorure du 1- [3 (diméthylamino) propyl]-3-éthylcarbodiimide (EDCI) dans une solution de CH2C12 en présence de 4- diméthylaminopyridine à température ambiante.

Le composé 12 peut également être synthétisé à partir d'acide caféique disponible dans le commerce. En particulier, il peut être synthétisé par un procédé comprenant les étapes. a), b), c) et d) du procédé représenté sur le schéma 1 et détaillé ci-dessus, l'étape d) correspondant à l'étape mentionnée au paragraphe précédent.

Un objet de la présente invention est l'acide chicorique obtenu par le procédé selon l'invention, sous forme lévogyre ou dextrogyre, ou sous forme d'un mélange de ces stéréoisomères, en particulier d'un racémate.

L'acide chicorique (1) obtenu par le procédé selon l'invention, de même que le composé nouveau 2,3- bis (3,4-dibenzyloxycinnamoyl)-dibenzyl-L-tartrate (12), qu'ils soient lévogyres, dextrogyres ou en mélanges de

stéréoisomères, notamment en mélange racémique, peuvent être utilisés dans une composition pharmaceutique. Une telle composition pharmaceutique pourra en particulier avoir une action immunostimmulante et/ou antivirale.

L'invention sera décrite plus en détails au moyen d'exemples de mise en oeuvre de chaque étape du procédé de synthèse du schéma 1.

EXEMPLES Formation du caféoate d'éthyle (5) : A une solution glacée d'acide caféique (5.0 g, 27.8 mmol) dans de l'EtOH absolu (140 ml), on ajoute goutte à goutte du CH3COC1 fraîchement distillé (13.8 ml, 194.5 mmol). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 2 jours, puis est évaporé.

Le résidu solide est dissous dans 100 ml d'eau, et est extrait avec EtOAc (3 x 50 ml). La couche organique est lavée avec du NaHCO3 aqueux saturé (2 x 20 ml) et de la saumure. (2 x 20 ml), séchée sur Na2S04, filtrée et évaporée. La cristallisation du résidu solide à partir de EtOAc-hexanes (1 : 4) donne le composé 5 sous la forme de cristaux couleur ambre (5.48g, 95%).

Les données qualitatives de ce composé sont les suivantes : point d'ébullition 148-149°C ; IR (KBr) 3460,1680 cm~1 1H RMN dans [DG] acétone (250 MHz) 1.26 (t, J=7.0 Hz, 3H), 4.18 (q, J=7. 0 Hz, 2H), 6.27 (d, J = 15.9 Hz, 1H) ; 6.87 (d, J = 8.2 Hz, 1H) ; 7. 04 (dd, J = 2. 1,8. 2 Hz, 1H) ; 7.16 (d, J = 2.1 Hz, 1H) ; 7.54 (d, J = 15.9 Hz, 1H) ; 8.33 (bs, 2H) ; 13C RMN dans [D6] acétone (62.9 MHz) 5 166.6, 147.8, 145.4, 144.7, 126.8, 121.7, 115.6, 114.9, 114.4, 59.7, 13.9 ; EIMS m/z (intensité relative) 209 (MH+, 10), 208 (M+, 82), 180 (18), 163 (100).

Formation du 3,4-dibenzyloxycinnamate d'éthyle (6) : A une solution sous agitation du composé 5 (3.7 g, 17.8 mmol) dans EtOH absolu (100 ml), on ajoute K2CO3 en poudre (5.2 g, 37.5 mmol) et du bromure de benzyle (4.65 ml, 39.2 mmol), et le mélange est porté à reflux une nuit. L'EtOH est ensuite évaporé, et le résidu dissous dans EtOAc (50 ml). Cette couche organique est lavée avec 1M H3PO4 (15 ml) et de la saumure (2 x 15 ml), puis séchée sur Na2SO4.

L'évaporation du solvant donne un solide jaunâtre qui est purifiée par recristallisation à partir d'EtOH pour donner le composé 6 sous la forme d'une poudre blanc cassé (6.76 g, 98%).

Les données qualitatives de ce composé sont les suivantes : point d'ébullition 81-82°C ; IR (KBr) 1696 cm~1 1H RMN (CDC13, 250 MHz) a 1.34 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 4.26 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 5.18 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 5. 20 (s, 2H), 6. 26 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 6. 92 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7. 05-7. 49 (m, 12H), 7. 59 (d, J = 15.9 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 62.9 MHz) 15 167.1, 150.9, 148.9, 144.3, 136.8, 136.7, 128.5, 127.9, 127.2, 127.1, 122.7, 116.1, 114.2, 113.6, 71.2, 70.9, 60.3, 14. 3 ; EIMS m/z (intensité relative) 389 (MH+, 4), 388 (M+, 14), 297 (9), 91 (100).

Formation de l'acide 3,4-dibenzyloxycinnamique (7) : A une solution sous agitation de KOH éthanolique 1M (12 ml), on ajoute une solution de l'ester 6 (2. 9 g, 7.5 mmol) dans EtOH (15 ml), et le mélange est chauffé à reflux une nuit. Après évaporation de EtOH, le résidu est dissous dans 15 ml

d'eau, et extrait avec EtOAc (2 x 30 ml). La couche aqueuse est ensuite acidifiée en ajoutant HCl 10%, extraite avec EtOAc (3 x 30 ml) et séchée sur Na2SO4.

L'évaporation du solvant donne un solide blanc qui est recristallisé à partir d'EtOAc-hexanes pour donner le composé 7 sous la forme d'une poudre blanc cassé (2.29 g, 85%).

Les données qualitatives de ce composé sont les suivantes : point d'ébullition 190-192°C ; IR (KBr) 2576,2508, 1692,1670 cm-3, ; 1H RMN dans [D6] DMSO (250 MHz) 8 5.18 (s, 2H), 5. 20 (s, 2H), 6.44 (d, J = 15. 9 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8. 5 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.21-7. 55 (m, 12H), 12.27 (s, 1H) ; 13C RMN dans [D6] DMSO (62.9 MHz) 6 168. 1,150. 3,148. 5,144. 2, 137.3, 137.1, 128.6, 128.0, 127.8, 127.7, 127.6, 123.1, 117.2, 114.0, 113.0, 70.2, 70.0 ; EIMS m/z (intensité relative) 361 (MH+, 2), 360 (M+, 10), 269 (6), 91 (100).

Formation du (2R, 3R)- (-)-2, 3-bis (3,4- dibenzyloxycinnamoyl)-dibenzyl-L-tartrate (12a) : A une suspension sous agitation du composé 7 (1.20 g, 3.33 mmol) dans du dichlorométhane anhydre (8 ml), on ajoute successivement de la diméthylaminopyridine (406 mg, 3.33 mmol), une solution de tartrate de dibenzyle 9a (500 mg, 1.51 mmol) dans du dichlorométhane anhydre (3 ml), et de l'EDCI (1.27 g, 6.66 mmol). La solution jaune pâle résultante est agitée à température ambiante pendant 24 heures, après quoi le milieu réactionnel est dilué avec de l'acétate d'éthyle (30 ml) et de l'eau (5 ml). Après séparation de la phase organique, la phase aqueuse est extraite deux fois avec de l'acétate d'éthyle EtOAc (2 x 15 ml).

Les phases organiques sont alors combinées et lavées avec une solution molaire d'acide phosphorique (5 ml) et trois fois avec de la saumure (3 x 5 ml), puis séchées sur du sulfate de sodium. L'évaporation de l'acétate d'éthyle sous pression réduite conduit à un résidu solide qui est purifié par chromatographie sur une colonne de silice, éluée avec un mélange hexanes- acétate d'éthyle (3 : 2), pour donner le composé perbenzylé 12a sous la forme d'une mousse jaune (1.46 g, 95%).

Les données qualitatives de ce composé sont les suivantes : Point d'ébullition 45-47°C ; [a] D22 =-80. 8° (c = 1.93, CHCl3); IR (KBr) 1770, 1726 cm-1; 1H RMN (CDCl3, 250 MHz) # 5.12-5.30 (m, 12H), 5.94 (s, 2H), 6.23 (d, J = 15.9 Hz, 2H), 6.93-7. 52 (m, 36H), 7.59 (d, J = 15.9 Hz, 2H) ; 13C RMN (CDC13, 62.9 MHz) J 165.8, 165.5, 151.4, 148.9, 146.6, 136.7, 136.6, 134.7, 128.5, 128.4, 127.9, 127.4, 127.2, 127.1, 123.4, 114.0, 113.8, 113.6, 71.2, 70.8, 67.7 ; LSIMS m/z (intensité relative) 1037 (MNa+, 9), 1015 (MH+, 6), 1014 (M+, 7), 343 (100) ; Anal. Calc pour C64H54012 : C, 75.71 ; H, 5.37. Trouvé : C, 75.88 ; H, 5.44.

Formation du (2S, 3S)- (+)-2, 3-bis (3,4- dibenzyloxycinnamoyl)-dibenzyl-D-tartrate (12b) : Les composés 7 et 9b sont couplés selon la même procédure que celle décrite pour le composé 12a, afin d'obtenir le composé 12b sous la forme d'une mousse jaune (rendement 80%) . point d'ébullition 46-47°C ; [a] D22 = +70. 4° (c = 1.46, CHC13) ; toutes les autres

données spectroscopiques étant identiques à celles citées pour 12a.

Formation de l'acide (-)-chicorique (la) : Le composé perbenzylé 12a est soumis à une débenzylation chimiospécifique et stéréospécifique. Les conditions opératoires sont les suivantes : A du diacétate de palladium Pd (OAc) 2 (334 mg, 1. 49 mmol) maintenu sous argon, on ajoute une solution de triéthylamine (207 pL, 1.49 mmol) dans du dichlorométhane anhydre (10 ml). Le mélange est ensuite maintenu sous agitation à température ambiante pendant 5 minutes, après quoi le composé 12a (630 mg, 0.62 mmol) dans du dichlorométhane CH2Cl2 anhydre (10 mL) est ajouté goutte à goutte. Le mélange réactionnel devient marron et est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 5 minutes. On ajoute alors lentement le triéthylsilane Et3SiH (2.37 ml, 14.90 mmol), le mélange réactionnel s'assombrit immédiatement et est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 24 heures. On ajoute ensuite du méthanol EtOH (ca. 3 ml), puis le mélange est filtré et évaporé sous pression réduite pour conduire à une huile jaune. On dissout cette huile dans de l'acétate d'éthyle (30 ml) et on ajoute de l'eau (5 ml). Après séparation de la phase organique, la phase aqueuse est extraite avec de l'acétate d'éthyle (10 ml). Les phases organiques sont alors combinées et lavées avec une solution molaire d'acide phosphorique (5 ml) et trois fois avec de la saumure (3 x 5 ml), puis séchées sur du sulfate de sodium. L'évaporation de l'acétate d'éthyle sous pression réduite conduit à une huile de nouveau dissoute dans de l'acétate d'éthyle (2 ml) auquel on

ajoute de l'hexane (40 ml). Le précipité qui se forme est récupéré par filtration et séché sous vide pour donner l'acide (-)-chicorique (la) sous la forme d'un solide amorphe blanc cassé (271 mg, 92%).

Les données qualitatives de ce composé ainsi obtenu sont les suivantes : [α]D22 = -242.7° [c = 0.89, MeOH ; lit. [a] D25 =-384. 2° (c = 1. 075, MeOH)] ; IR (KBr) 3406,1707 cm-1 ; 1H RMN dans [D6] acétone (250 MHz) 6 5.94 (s, 2H), 6.44 (d, J = 15.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.16 (dd, J = 2.1, 8.2 Hz, 2H), 7. 27 (d, J = 2.1 Hz, 2H), 7. 70 (d, J = 15.8 Hz, 2H) ; 13C RMN dans [D6] acétone (62.9 MHz) 6 167.6, 166.3, 149.1, 147.6, 146.3, 127. 2,122. 9,116. 3, 115.4, 113.8, 71.6 ; LSIMS m/z (intensité relative) 497 (MNa+, 35), 475 (MH+, 7), 474 (M+, 9).

Formation de l'acide (+)-chicorique (1b) : Les mêmes conditions de débenzylation aboutissent à l'acide chicorique dextrogyre à partir du composé perbenzylé correspondant 12b, sous forme d'un solide amorphe blanc cassé (rendement 66e) : [a] D22 = +241. 6° [c = 0. 63, MeOH ; lit. [a] D25 = +340. 0° (c = 1. 075, MeOH)], toutes les autres données spectroscopiques étant identiques à celles citées pour le composé (la).