PAUFIQUE JEAN-JACQUES (FR)
PATENT ABSTRACTS OF JAPAN vol. 1999, no. 08 30 June 1999 (1999-06-30)
| 1. | Procédé d'extraction d'un principe actif riche en polyphénols, type acides phénoliques, notamment pour augmenter la production de HSP 72 face à des stress engendrés par la chaleur et/ou les rayonnements UVB, caractérisé en ce qu'il comprend la succession des étapes suivantes : solubilisation de Salix, salix alba ou salixpurpurea ou salix viminalis ou salix daphnoides ou salix fragilis ou salix pentandra, dans de l'eau, hydrolyse entre 20°C et 50°C et à pH acide compris entre 1,0 et 4,0 en présence d'une protéase, séparation des phases soluble et insoluble par tout moyen ou toute combinaison de moyens, par exemple : décantation, filtration ou centrifugation, et filtration stérilisante pour atteindre une flore mésophile totale inférieure 100 germes/9, et une absence de levures et de moisissures. |
| 2. | Principe actif obtenu par solubilisation aqueuse de Salix, salixalba ou salix purpurea ou salix viminalis ou salix daphnoides ou salix fragilis ou salix pentandra, et hydrolyse en présence d'une protéase de cette solution, caractérisé en ce qu'il présente : un taux de matière sèche obtenu par passage dans un étuve à 105°C pendant 16 heures, compris entre 20 et 200 g/I, plus particulièrement compris entre 40 et 100 9/l. un pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante, compris entre 3,0 et 7,0, plus particulièrement entre 4,0 et 7,0. un taux de polyphénols totaux, exprimés en équivalents d'acide gallique compris entre 1,0 et 20,0 g/I, plus particulièrement entre 1,0 et 10,0 9/1 et spécifiquement entre 1,0 et 5,0 g/l. |
| 3. | Traitement cosmétique pour stimuler la synthèse des protéines de stress HSP 72 et assurer une action antiâge au moyen du principe actif de la revendication 3, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger de 0,5% à 10,0% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution et avec des excipients adaptés, éventuellement et à appliquer cette préparation sur la peau. |
| 4. | Traitement cosmétique selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger 2,0 à 5,0% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution et avec des excipients adaptés, éventuellement et à l'appliquer sur la peau. |
| 5. | Traitement cosmétique pour assurer la protection cellulaire contre les dommages photoinduits, au moyen du principe actif de la revendication 2, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger de 0,5% à 10% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution et avec des excipients adaptés, éventuellement et à appliquer cette préparation sur la peau. |
| 6. | Traitement cosmétique selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger 2 à 5% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution et avec des excipients adaptés, éventuellement et à appliquer cette préparation sur la peau. |
| 7. | Traitement cosmétique pour lutter contre le vieillissement cellulaire de la peau au moyen du principe actif de la revendication 2, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger de 0,5% à 10,0% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution et avec des excipients adaptés, éventuellement et à appliquer cette préparation sur la peau. |
| 8. | Traitement cosmétique selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger 2,0 à 5,0% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution et avec des excipients adaptés, éventuellement et à l'appliquer sur la peau. |
| 9. | Traitement cosmétique pour diminuer les rides, au moyen du principe actif de la revendication 2, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger de 0,5% à 10,0% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution et avec des excipients adaptés éventuellement et à appliquer cette préparation sur la peau. |
| 10. | Traitement cosmétique selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger 2 à 5% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution et avec des excipients adaptés, éventuellement et à l'appliquer sur la peau. |
La peau est soumise à de nombreux stress et notamment ceux engendrés par la chaleur et les rayonnements UV, au cours d'expositions au soleil de trop longue durée et/ou de trop forte intensité.
Toutes les cellules des organismes vivants (hommes, animaux, plantes, bactéries) répondent notamment à ce type de stress par la synthèse de protéines spécifiques appelées protéines de choc thermique ou Heat Shock Proteins (HSP). Ces protéines constituent un système important de la protection cellulaire en biologie cutanée.
Les HSP sont classées en 5 classes selon leur poids moléculaire et leur homologie de séquence : HSP 110, HSP 90, HSP 70, HSP 60 et HSP 27.
La première fonction de ces protéines est celle de thermotolérance.
Ainsi, lorsque l'on soumet des kératinocytes à un traitement thermique d'une
heure à 40°C ou 41°C, on provoque une augmentation du taux d'ARNm et de la synthèse des HSP.
Une telle réaction permet de limiter la dénaturation pendant le stress.
Ces protéines jouent un rôle prépondérant dans la construction et mme la réparation des dommages induits.
Ces protéines assurent non seulement un rôle de protection mais aussi la reproduction de protéines fonctionnelles, le maintien des fonctions cellulaires et la restauration des fonctions métaboliques basiques, tout en permettant l'élimination des radicaux délétères.
Les HSP 70 représentent les protéines les plus étudiées car elles sont majoritairement synthétisées par les cellules eucaryotes.
On distingue dans cette catégorie deux formes l'une constitutive, HSP 73 ou 70 et une forme inductible, notamment sous les effets de stress, HSP 72.
On retrouve cette forme inductible dans les fibroblastes et les kératinocytes.
Les HSP 72 sont induites par la chaleur mais aussi par les UVB.
On sait aussi (Muramatsu. T & al, 1966, British Journal of Dermatology, 134 : 1035-1038) que l'inductibilité des HSP 72 diminue avec l'âge. Des études immunohistochimiques ont montré un niveau d'induction plus faible sur des explants de peau de donneurs âgés que sur des explants de donneurs jeunes.
Dans le cas plus spécifique des fibroblastes, une étude récente (Conrad-Gutsmann & al, 1998, Experimental cell research 241 : 404-413) a montré également que les fibroblastes de jeunes donneurs expriment des taux de HSP 72 plus élevés que des donneurs âgés, que ce soit avant ou après le stress thermique.
La présente invention a pour but de proposer un procédé d'extraction d'un principe actif à partir de salix qui est riche en polyphénols (type acides
phénoliques), pour stimuler l'induction de HSP 72 avec un effet anti-âge et pour assurer la protection des cellules cutanées.
A cet effet, le procédé d'extraction d'un principe actif riche en polyphénols, notamment pour augmenter la production de HSP 72 face à des stress engendrés par la chaleur et/ou les rayonnements UVB, se caractérise en ce qu'il comprend la succession des étapes suivantes : -solubilisation de Salix, salix alba ou salix purpurea ou-alix viminalis ou salix daphnoides ou salix fraqilis ou salixpentandra dans de l'eau, - hydrolyse entre 20°C et 50°C et à pH acide en présence d'une protéase, - séparation des phases soluble et insoluble par tout moyen ou toute combinaison de moyens, par exemple. décantation, filtration ou centrifugation, -filtration stérilisante pour atteindre une flore mésophile totale inférieure à 100 germes/9, et une absence de levures et de moisissures.
Le principe actif obtenu est caractérisé par les paramètres suivants : - un taux de matière sèche obtenu par passage dans une étuve à 105°C pendant 16 heures, compris entre 20 et 200 g/I, plus particulièrement compris entre 40 et 100 g/t.
- un pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante, compris entre 3,0 et 7,0, plus particulièrement entre 4,0 et 7,0.
- un taux de polyphénols totaux, exprimés en équivalent d'acide gallique compris entre 1,0 et 20,0 g/I, plus particulièrement entre 1,0 et 10,0 9/1 et spécifiquement entre 1,0 et 5,0 g/I.
L'invention couvre aussi des traitements cosmétiques.
La description qui va suivre est faite en regard des dessins annexés sur lesquels les différentes figures représentent :
- figure 1, un tableau de l'expression d'HSP 72 obtenu en présence du principe actif selon la présente invention, - figure 2, un tableau comparatif de l'expression d'HSP 72 en fonction de l'âge, - figure 3, un tableau des résultats des effets anti-rides - figure 4, un tableau des résultats de fatigabilité de la peau, - figure 5, un tableau de l'activité anti-radicalaire, - figure 6, un tableau du taux de protection vis-à-vis des agressions UVA/UVB, et - figure 7, un tableau des résultats obtenus par action du principe actif vis-à-vis des interleukines relâchées.
1/PROCEDE D'EXTRACTION : Le procédé selon la présente invention consiste à réaliser la succession des étapes suivantes : -solubilisation de Salix, salix alba ou salix purpurea ou salix viminalis ou salixdaphnoidesou salixfrapilisou salixpentandradans de l'eau, -hydrolyse à 20 °C environ et à pH acide, en présence d'une protéase, - décantation, - séparation des phases soluble et insoluble par tout moyen ou toute combinaison de moyens, par exemple. décantation, filtration ou centrifugation.
-concentration éventuelle de la fraction active d'au moins 30%, et -filtration stérilisante pour atteindre une flore mésophile totale inférieure à 100 germes/9, et une absence de levures et de moisissures, notamment par passage sur une membrane microporeuse à 0,22 Nm.
2 CARACTERISATION DU PRINCIPE ACTIF OBTENU
Taux de matière sèche : La matière sèche est obtenue par passage du principe actif extrait dans une étuve à 105°C pendant 16 heures. La quantité de matière sèche obtenue est comprise entre 20 et 200 g/I, plus particulièrement comprise entre 40 et lOû 9/1.
Mesure du pH : Le pH est mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante. Le pH est compris entre 3,0 et 7,0, plus particulièrement entre 4,0 et 7,0.
Polyphénols totaux : La détermination est réalisée par réaction des polyphénols en présence de ferricyanure de potassium et par une détection consécutive des complexes colorés formés, à 715 nm.
On compare ensuite par rapport à un étalon d'acide gallique couvrant la plage concernée de mesures.
On obtient les résultats suivants exprimés en équivalent d'acide gallique : taux de polyphénols totaux compris entre 1,0 et 20,0 g/I, plus particulièrement entre 1,0 et 10, 0 9/1 et spécifiquement un taux compris entre 1,0 et 5,0 g/L Stabilité : De plus, le principe actif, à des dosages compris entre 1 et 5 % en volumes, est tout à fait stable dans des milieux ayant un pH compris entre 2,0 et 10,0 et stable en température jusqu'à 80°C pendant plusieurs heures.
3/EFFETS DU PRINCIPE ACTIF SUR LA SYNTHESE DES HSP 72 L'étude est conduite sur des kératinocytes humains avec induction thermique et sans induction thermique.
Etude de ta synthèse des HSP 72 avec et sans induction thermique.
Pour se protéger rapidement des dommages thermo et UV-induits, les cellules cutanées produisent des protéines de stress. Pour le vérifier et l'analyser, on soumet des kératinocytes à un stress thermique évolutif. Un témoin positif est réalisé par chauffage à 44°C, pendant lh sans principe actif.
Le stress thermique consiste à porter les kératinocytes humains à 44°C pendant 15 minutes, puis toujours à 44°C mais pendant 30 minutes, en l'absence et en présence du principe actif tel qu'extrait précédemment, à raison de 0,5 ; 1,0 et 2,0 % en volume.
Parallèlement, en sorte de permettre un comparatif et de vérifier que les polyphénols sont bien à l'origine de l'activité recherchée, on teste un mélange modèle composé principalement d'acide chlorogénique et d'acide p. coumarique, avec une concentration de 2% en volume.
Afin de visualiser les protéines de stress ainsi produites, on les révèle par une coloration marron à l'aide d'un système péroxydase. Plus la coloration est intense et plus le niveau d'expression HSP 72 est important. Le niveau est estimé au microscope à l'aide d'une échelle colorimétrique qualitative, au sein d'une mme étude pour ne pas fausser les interprétations.
Les résultats sont exprimés par des-ou + sachant que l'échelle est la suivante : - pas de présence d'HSP 72 :- -faible présence d'HSP 72 : + - moyenne présence d'HSP 72 : ++ - forte présence d'HSP 72 : +++ - très forte présence d'HSP 72 : ++++ ou +++++ Les résultats sont exprimés dans le tableau de la figure 1.
Sans induction thermique, le principe actif stimule la synthèse de ces HSP 72, dès 1%.
On obtient avec le principe actif selon la présente invention, sensiblement les mmes résultats qu'avec le mélange modèle de polyphénols.
On note aussi que plus le traitement thermique est important et plus l'expression des HSP 72 est élevée.
On remarque aussi que, en présence de principe actif selon la présente invention, les cellules traitées expriment de façon plus intense ces HSP 72.
De plus, on constate une accélération de la réponse puisque le taux d'HSP 72 obtenu pendant 30 minutes sans principe actif est semblable à celui obtenu en 15 minutes dès la présence de 1% de principe actif.
Etude de l'expression des HSP 72 en fonction de l'âge : On vient de noter, que plus le stress thermique est important, plus l'expression des HSP 72 est significative.
On peut aussi comparer l'intensité de cette réponse en fonction de l'âge du donneur.
Les essais sont menés de la mme façon que précédemment mais les explants de peau ont deux provenances, celle d'un sujet jeune (19 ans) et celle d'un sujet âgé (77 ans).
Les essais sont menés avec trois durées croissantes d'induction thermique et une mme température 44°C.
Les résultats de la figure 2 montrent que l'expression est améliorée dans les deux cas, ce qui est particulièrement satisfaisant pour le sujet âgé sur lequel on montre que le principe actif a bien un effet.
Cette expression est amplifiée sur le jeune sujet.
Plus le stress thermique est important, plus la réponse en HSP 72 est intense, toutefois l'intensité de cette réponse HSP 72 est plus rapide pour les kératinocytes du jeune donneur.
Le principe actif permet de doper l'activité de synthèse et la vitesse d'induction des HSP 72 pour les kératinocytes du donneur âgé.
Le principe actif compense ta baisse d'activité due au vieillissement cellulaire.
4/ETUDE DE L'EFFET ANTI-RIDES DU PRINCIPE ACTIF La quantification in vivo sur 12 volontaires de l'efficacité anti-rides du principe actif de la présente invention a été évaluée dans une formule cosmétique contenant 5% de principe actif. On effectue une prise d'empreintes au niveau des pattes d'oie avant et après le traitement biquotidien pendant 28 jours contre placebo. Le test statistique utilisé est le test de Student sur données appariées.
Les résultats sont analysés en ce qui concerne les paramètres suivants : surface totale ridée, longueur totale des rides, nombre de rides, profondeur moyenne des rides. Ces résultats figurent dans le tableau de la figure 3.
On constate une diminution significative de chacun des paramètres surface totale ridée, longueur des rides et nombre de rides.
A titre d'exemples non limitatifs, on indique ci-après un produit ou composition cosmétique comprenant le principe actif de la présente invention, seul ou associé à au moins un autre principe actif.
Exemple 1 : Emulsion de jour anti-rides - Montanov 68 3,0% (cire de glucoside) - Cetiol SB45 1,0% (beurre de karité) - Tween 80 2,0% (polysorbate 80) - Stearic acid 1,0% - Emulgin BI 1,0% (cétéareth-12) -Lanol 1688 10% (cétéaryl octanoate) - Miglyol 812 2,0% (caprylic/capric triglycéride)
-Isohexadecane 3,0% - IPP 2,0% (palmitat d'isopropyl) - Sepigel 305 0,1% (polyacrylamide/isoparaffineCi3-i4/laureth7) - Carbopol ETD2020 0,1% (carbomère) -Butylène glycol 10% - Conservateur 0,5% - Principe actif 5,0% - Eau qsp 100% 5/ETUDES DES PROPRIETES BIOMECANIQUES DE LA PEAU Le test est conduit sur 20 volontaires, de sexe féminin et âgées de 31 à 62 ans. Ce test est réalisé avec une émulsion contenant 5% du principe actif contre placebo.
On mesure la fatigabilité de la peau avant et après un traitement biquotidien. L'analyse statistique utilisée est le test de Student sur données appariées.
Les résultats sont présentés dans le tableau de la figure 4.
On constate une diminution significative de la fatigabilité de la peau.
A titre d'exemple non limitatif, on indique ci-après un produit ou composition cosmétique comprenant comme seul principe actif, celui de la présente invention.
Exempte 2 : Lait corporel raffermissant - Montanov 202 3,0% (cire de glucoside) - Ceteth 20 1,0% - Sepigel 501 2,0% (isoparaffineCl3- 14/isostéaryl/isostéarate/sodium polyacrylate/polyacrylamide/polysorbate 60)
-Butylène glycol 5,0% - DC 200 1,0% (diméthicone) - Lanol 1688 3,0% (cetearyl octanoate) - Lanol 99 5,0% (isononyl isononanoate) - Conservateur 1,0% - Principe actif 5,0% - Eau qsp 100% 6/ACTIVITE PHOTOPROTECTRICE DU PRINCIPE ACTIF Activité anti-radicalaire : Les tests sont conduits sur des cultures cellulaires de kératinocytes humains afin de déterminer si le principe actif présente une action protectrice vis-à-vis des radiations UVA et UVB.
A cet effet, les cellules sont soumises à une irradiation avec une intensité de 5 à 20 joules/cm2 pour les UVA et de 0,05 à 0,40 joules/cm2 pour les UVB, préférentiellement 9 joules/cm2 pour les UVA et 0,17 joules/cm2 pour les UVB.
On mesure ensuite la viabilité cellulaire de ces kératinocytes par une mesure de densité optique suite à une coloration au M. T. T, ledit colorant n'étant susceptible d'tre absorbé que par les cellules vivantes.
Les résultats sont regroupés dans le tableau de la figure 5.
On constate une forte activité anti-radicalaire, bien supérieure à celle obtenue avec le modèle polyphénolique, vis-à-vis des radicaux libres UVA et UVB induits. Cet effet est dose-dépendant.
Activité anti-apoptose : L'étude est conduite sur des explants de peau et montre l'activité photoprotectrice du principe actif selon l'invention vis-à-vis de l'apparition des cellules épidermiques"coup de soleil"ou dites"sunburn cells".
Ces cellules présentent des lésions de l'ADN et les caractéristiques des cellules en apoptose, avec notamment un cytoplasme éosinophile.
Après irradiation aux UVB, on assure un comptage des cellules"coup de soleil"au microscope, après coloration des coupes histologiques des explants.
On obtient les résultats mentionnés dans le tableau de la figure 6.
Le principe actif présente une forte activité protectrice et limite fortement !'apparition de cellules"coup de soleil".
Activité anti-irritante : Une telle activité peut tre avantageusement mesurée par dosage du taux d'interleukine-la libérées dans un milieu de culture de kératinocytes humains soumis à un stress oxydatif provoqué par les rayons UVA + UVB.
Le dosage du taux d'Interleukine-la libérées dans le surnageant de culture de kératinocytes soumis à des UVA et UVB est réalisé par la méthode ELISA. Les valeurs sont données en pg/l.
La comparaison est de nouveau effectuée avec un mélange modèle polyphénolique.
Le principe actif selon la présente invention provoque une diminution du taux d'interleukine-la.
Les résultats sont mentionnés dans le tableau de la figure 7.
Cet effet est également dose-dépendant.
Exemple 3 : Gel de protection solaire - Lanol 99 3,0% (isononyl isononanoate)
- Allantoine 0,1% - Carburer 0,5% -Triethanolamine 3,0% -TEA salicylate 5,0% - Glycerol 5,0% - BMDM hydantdine 0,3% - Principe actif 3,0% - Conservateur 1,0% - Eau Qsp 100% Le procédé a permis d'extraire un principe actif particulier et ce principe actif tel qu'il vient d'tre caractérisé peut tre utilisé pour des traitements cosmétiques pour assurer une protection cellulaire anti-âge.
Dans ce cas, on mélange de 0,5% à 10,0% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution avec des excipients adaptés, éventuellement et on applique cette préparation sur la peau.
Plus particulièrement, on peut réaliser un traitement cosmétique avec 1,0 à 3,0 % de principe actif dans une mme forme galénique que précédemment.
On peut ainsi assurer un traitement cosmétique pour stimuler la synthèse des protéines de stress HSP 72 et assurer la protection contre les dommage photo-induits au moyen de ce mme principe actif en associant de 0,5% à 10,0% de principe actif et plus particulièrement de 1 à 3% dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution avec des excipients adaptés, éventuellement et on applique cette préparation sur la peau.