L'hypertension artérielle est une affection dont les causes restent généralement inconnues. Des facteurs extrinsèques qui peuvent participer comprennent l'obésité, un mode de vie sédentaire, l'absorption excessive d'alcool ou de sel et le stress. Des facteurs intrinsèques suggérés en tant que facteurs jouant un rôle comprennent la rétention de fluide, l'activité du système nerveux sympathique et la constriction des vaisseaux sanguins. L'hypertension artérielle peut contribuer directement ou indirectement à des maladies du coeur, du système vasculaire périphérique et cérébral, du cerveau, de l'oeil et du rein.

Le traitement de l'hypertension artérielle comprend l'utilisation d'agents diurétiques, d'agents de blocage adrénergique, d'inhibiteurs de l'enzyme de conversion d'angiotensine, d'antagonistes des récepteurs d'angiotensine, d'antagonistes du calcium et de vasodilatateurs directs.

Néanmoins un certain nombre de patients restent réfractaires à tous les traitements, aggravant ainsi le risque de maladies diverses liées à leur hypertension et en particulier l'installation d'une insuffisance cardiaque chronique. II'est donc souhaitable d'identifier des composés nouveaux pour le traitement de l'hypertension artérielle.

Les présents inventeurs ont identifié des composés nouveaux qut sont efficaces dans ta réduction de t'hypertension artérielle et quii, ainsi,, sont

utiles dans le traitement de l'hypertension artérielle et des maladies auxquelles elle contribue indirectement et directement.

Ces composés se comportent en particulier comme de puissants inhibiteurs de l'aminopeptidase A (également dénommée APA ou EC 3.4. 11.7) qui est une métallopeptidase à zinc très conservée d'une espèce à l'autre, y compris l'homme. Il a été démontré que l'APA agissait sur la régulation centrale de la pression artérielle (A. Reaux et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA, 1999,96, 13415-13420 et M. C. Fournié-Zaluski et al., Proc Natl Acad Sci. USA 2004 ; 101, 7775-7780). La présente invention montre que de manière inattendue, l'introduction d'un groupe R2 sur une structure non peptidique conduit à l'obtention de composés inhibiteurs de l'APA ayant une affinité et une sélectivité pour l'APA élevée, alors que ces composés n'ont pas d'activité vis-à-vis d'une autre aminopeptidase, l'aminopeptidase N (APN).

En conséquence, la présente invention comprend des composés de formule (1) : dans laquelle chaque groupement R'est identique à l'autre groupement R1 et représente : - un groupe alkyle en Ci à C6, alcényle en C2 à C6 ou alcynyle en C2 à C6, - un groupe (CH2) nbenzyle dans lequel n est égal à 0 ou 1, - un groupe (CH2) m (cycloalkyle en C3 à C6) dans lequel m est égal à 0 ou 1, chacun des groupes alkyle, alcényle, alcynyle, benzyle ou cycloalkyle étant substitué par un ou deux groupe (s) représenté (s) par le groupement A.

Le groupement A représente : -un groupe carboxylate COOH ou COOR, R représentant un groupe alkyle en C1 à C6 ou CH2phényle ;

un groupe sulfonate SO3H ou SO3R', R'représentant un groupe alkyle en Ci à C6 ou CH2phényle ; un groupe phosphonate PO3H2 ou P03R2"R"', R"et R"'représentant indépendamment H, un groupe alkyle en Cl à C6 ou CH2phényle ; chaque groupement R2 est identique à l'autre groupement R2 et représente un groupe alkyle en Cl à C6, alcényle en C2 à C6 ou alcynyle en C2 à C6, chaque groupe alkyle, alcényle ou alcynyle étant libre ou substitué par le groupement B.

Le groupement B représente : un groupe carboxylate, COOH ou COOR', R'représentant un groupe alkyle en CI à C6 ou CH2phényle ; un groupe phényle libre ou substitué par un ou plusieurs radicaux choisis parmi un atome d'halogène, un radical hydroxyle éventuellement protégé, un groupe alkyle en Ci à C4, un groupe cyano, un groupe carboxyle libre, salifié, estérifié ou un groupe amide Chaque groupement R3 est identique à l'autre groupement R3 et représente un atome d'hydrogène.

Des composés (1) préférés selon l'invention sont ceux dans lesquels R'est choisi entre des groupes alkyle en Cl à C6, alcényle en C2 à C6 et benzyle, chacun de ces groupes étant substitué par un ou deux groupe (s) représenté (s) par le groupement A et/ou dans lesquels R2 est choisi entre un groupe alkyle en Ci à C6 et un groupe alcényle en C2 à C6, chacun de ces groupes pouvant être substitué par un ou deux groupe (s) représenté (s) par le groupement B.

D'autres composés (1) préférés selon l'invention sont ceux dans lesquels R1 représente un groupe éthyle substitué par un groupe sulfonique, phosphonique ou carboxylique, libre, salifié ou estérifié et R2 représente un groupe éthyle substitué par un groupe phényle éventuellement substitué.

Un composé (1) particulièrement préféré est l'acide 4,4'-dithiobis- (3, 3'-amino-6, 6'-phényl-1-1'-hexane sulfonique), et notamment f'acide 4 (S), 4' (S), 3 (S), 3' (s)-4'-dithiobis-(3,3'-amino-6,6'-phényl-1-1'-hexane sulfonique).

Dans un autre aspect, a présente invention a pour objet une

méthode pour la prévention ou le traitement de l'hypertension artérielle et des maladies indirectement et directement liées, comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé de la présente invention.

Dans un autre aspect, la présente invention propose des compositions pharmaceutiques comprenant un composé de la présente invention, de préférence en association avec un diluant ou support pharmaceutiquement acceptable.

Dans un autre aspect, la présente invention propose un composé de la présente invention destiné à être utilisé en thérapeutique, et en particulier en médecine humaine.

L'invention concerne également l'utilisation d'un composé de formule (1) en tant qu'inhibiteur sélectif à l'égard de l'aminopeptidase A.

Dans un autre aspect, la présente invention propose l'utilisation d'un composé de la présente invention pour la production d'un médicament destiné au traitement de l'hypertension artérielle et de maladies indirectement et directement liées.

Dans un autre aspect, la présente invention propose une méthode de traitement d'un patient souffrant d'hypertension artérielle et de maladies indirectement et directement liées, comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé de la présente invention.

La présente invention propose des méthodes pour la prévention ou le traitement de l'hypertension artérielle et de maladies auxquelles l'hypertension artérielle contribue directement ou indirectement. Ces maladies comprennent des maladies du coeur, du système vasculaire périphérique et cérébral, du cerveau, de l'oeil et du rein. En particulier, les maladies comprennent l'hypertension artérielle primaire et secondaire, un ictus, l'ischémie myocardique, l'insuffisance cardiaque et l'insuffisance rénale, l'infarctus du myocarde, une maladie vasculaire périphérique, la protéinurie diabétique, le syndrome X, le glaucome, les maladies neurodégénératives et les troubles de la mémoire. Par ailleurs l'hypertension, en particulier centrale, est éventuellement reliée à une hyperexpression vasculaire de l'APA. Celle-ci s'accroît encore dans les tumeurs. De ce fait, les composés de la présente

invention pourraient avoir un potentiel thérapeutique dans le cadre des pathologies ischémiques ou tumorales (Marchio S, et al., Cancer Cell, 2004, 5 : 151-162).

L'invention concerne donc également l'utilisation d'un composé de formule (1) pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de pathologies ischémiques ou tumorales dans lesquelles l'APA est impliquée : Telle qu'elle est utilisée dans le présent mémoire, l'expression "composé de la présente invention"désigne un composé de formule (I) ou un de ses sels ou produit de solvatation pharmaceutiquement acceptable.

L'expression"alkyle en Cl à C6", telle qu'elle est utilisée dans le présent mémoire, désigne un groupe hydrocarboné à chaîne droite ou ramifiée contenant 1 à 6 atomes de carbone. Des exemples de groupes alkyle, de la manière utilisée dans le présent mémoire, comprennent, mais à titre non limitatif, les groupes méthyle, éthyle, propyle, butyle, isopropyle, n-butyl et tertiobutyle.

L'expression"alcényle en C2 à C6", telle qu'elle est utilisée dans le présent mémoire, désigne un groupe hydrocarboné à chaîne droite ou ramifiée ayant 1 à 6 atomes de carbone, contenant une ou plusieurs doubles liaisons.

Des exemples de groupes alcényle, de la manière utilisée dans le présent mémoire, comprennent, mais à titre non limitatif, le groupe vinyle et des groupes similaires.

L'expression"alcynyle en C2 à Ce", telle qu'elle est utilisée dans le présent mémoire, désigne un groupe hydrocarboné à chaîne droite ou ramifiée ayant 1 à 6 atomes de carbone, contenant une ou plusieurs triples liaisons. Un exemple de groupe alcynyle, de la manière utilisée dans le présent mémoire, comprend, mais à titre non limitatif, le groupe éthynyle.

L'expression"cycloalkyle en C3 à C6"désigne un noyau carboné cyclique non aromatique ayant 3 à 6 atomes de carbone. Ce noyau peut contenir facultativement jusqu'à 2 doubles liaisons carbone-carbone. Les groupes cycloalkyle comprennent, à titre d'exemple mais non à titre limitatif, les groupes cyclopentyle et cyclohexyle.

De préférence, R11 est choisi entre des groupes alkyle en Cl'à'C6,,

alcényle en C2 à C6 et benzyle substitués avec un ou deux groupes représentés par le groupement A répondant à la définition précitée.

De préférence, R2 est choisi entre des groupes alkyle en CI à C6 et alcényle en C2 à C6, chaque groupe alkyle ou alcényle étant facultativement substitué avec un ou plusieurs groupes représentés par le groupement B défini ci-dessus.

Bien que les groupes préférés pour chaque variable aient été généralement énumérés ci-dessus séparément pour chaque variable, des composés appréciés de la présente invention comprennent ceux dans lesquels plusieurs variables ou chaque variable dans la formule (I) sont (est) choisie (s) parmi les groupes appréciés, plus appréciés ou préférés pour chaque variable.

En conséquence, la présente invention est destinée à comprendre toutes les associations de groupes appréciés, plus appréciés et préférés.

L'homme de l'art reconnaîtra que des stéréocentres existent dans les composés de formule (I). En conséquence, la présente invention comprend tous les stéréo-isomères et isomères géométriques possibles de la formule (I) et comprend non seulement des composés racémiques mais également les isomères optiquement actifs. Lorsqu'un composé de formule (I) est désiré sous forme d'un énantiomère unique, il peut être obtenu par résolution du produit final ou par synthèse stéréospécifique à partir de la matière de départ isomériquement pure ou bien de n'importe quel intermédiaire convenable. La résolution du produit final, d'un intermédiaire ou d'une matière de départ peut être effectuée par n'importe quel procédé convenable connu dans ce domaine.

Voir, par exemple, Stereochemistry of Carbon Compounds par E. L. Eliel (Mcgraw Hill, 1962) et Tables of Resolving Agents par S. H. Wilen. En outre, dans les cas où des formes tautomères des composés de formule (I) sont possibles, la présente invention est destinée à comprendre toutes les formes tautomères des composés.

Le spécialiste de la chimie organique notera que de nombreux composés organiques peuvent former des complexes avec des solvants dans lesquels ils ont été amenés à réagir ou à partir desquels ils sont précipités ou cristall'isés. Ces, complexes sont connus sous le nom de"produits de

solvatation". Par exemple, un complexe avec l'eau est connu sous le nom de "hydrate". Les produits de solvatation du composé de formule (I) entrent dans le cadre de la présente invention.

Le spécialiste de la chimie organique notera également que de nombreux composés organiques peuvent exister sous plus d'une forme cristalline. Par exemple, la forme cristalline peut varier d'un produit de solvatation à l'autre. Ainsi, toutes les formes cristallines des composés de formule (I) ou de leurs produits de solvatation pharmaceutiquement acceptables sont incluses dans le cadre de la présente invention.

L'homme de l'art notera également que les composés de la présente invention peuvent être également utilisés sous forme d'un de leur sel ou produit de solvatation pharmaceutiquement acceptable. Les sels physiologiquement acceptables des composés de formule (I) comprennent des sels classiques formés à partir d'acides ou de bases inorganiques ou organiques pharmaceutiquement acceptables ainsi que des sels d'addition d'ammonium quaternaire. Des exemples plus spécifiques de sels d'acides convenables comprennent les sels formés avec les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphorique, nitrique, perchlorique, fumarique, acétique, propionique, succinique, glycolique, formique, lactique, maléique, tartrique, citrique, palmoïque, malonique, hydroxymaléique, phénylacétique, glutamique, benzoïque, salicylique, fumarique, toluènesulfonique, méthane- <BR> <BR> sulfonique, naphtalène-2-sulfonique, benzènesulfonique, hydroxynaphtoïque, iodhydrique, malique, stéroïque, tannique, etc. D'autres acides tels que l'acide oxalique, bien que n'étant pas en eux-mêmes pharmaceutiquement acceptables, peuvent être utiles dans la préparation de sels utiles comme intermédiaires dans l'obtention des composés de la présente invention et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Des exemples plus spécifiques de sels basiques convenables comprennent les sels de sodium, de lithium, de potassium, de magnésium, d'aluminium, de calcium, de zinc, de N, N"-dibenzyléthylène-diamine, de chloroprocaïne, de choline, de diéthanofamine, d'éthylènediamine, de N'-méthylgfucamine et de procaïne. Des références ci-après à un composé conforme à la présente invention concernent

à la fois les composés de formule (I) et leurs sels et produits de solvatation pharmaceutiquement acceptables.

Les composés de la présente invention et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables sont administrés convenablement sous forme de compositions pharmaceutiques. Ces compositions peuvent être présentées convenablement à des fins d'utilisation de manière classique en mélange avec un ou plusieurs supports ou excipients physiologiquement acceptables. Le ou les supports doivent être"acceptables"en ce sens qu'ils doivent être compatibles avec les autres ingrédients de la formulation et ils ne doivent pas être néfastes pour le sujet les recevant.

Bien qu'il soit possible d'administrer thérapeutiquement les composés de la présente invention sous forme de la substance chimique brute, il est préférable de présenter l'ingrédient actif sous forme d'une formulation pharmaceutique.

En conséquence, la présente invention propose en outre une formulation pharmaceutique comprenant un composé de formule (I) ou un de ses sels ou produit de solvatation pharmaceutiquement acceptable en association avec un ou plusieurs supports pharmaceutiquement acceptables et, facultativement, d'autres ingrédients thérapeutiques et/ou prophylactiques.

Les formulations comprennent celles convenables pour l'administration orale, parentérale (y compris sous-cutanée, par exemple par injection ou au moyen d'un comprimé à dépôt, intradermique, intrathécal, intramusculaire, par exemple par dépôt, et intraveineuse), rectale et topique (y compris dermique, buccale et sublinguale) ou sous une forme convenable pour l'administration par inhalation ou insufflation, bien que la voie convenant le mieux puisse dépendre, par exemple, de l'état et de l'affection du receveur. Les formulations peuvent être présentées convenablement sous une forme posologique unitaire et peuvent être préparées par n'importe lequel des procédés bien connus dans le domaine de la pharmacie. Tous les procédés comprennent l'étape consistant à mettre en association les composés ("ingrédients actifs") avec le support qui comprend un ou plusieurs ingrédients accessoires. En générât, l'es formulations sont préparées en mettant

uniformément et intimement en association l'ingrédient actif avec des véhicules liquides ou des supports solides finement divisés ou bien avec ces deux types de supports et ensuite, si nécessaire, en façonnant le produit en la formulation désirée.

Les formulations convenables pour l'administration orale peuvent être présentées sous forme d'unités discrètes telles que des capsules, cachets ou comprimés (par exemple des comprimés à mâcher, en particulier pour une administration pédiatrique), chacun contenant une quantité prédéterminée de l'ingrédient actif ; sous forme d'une poudre ou de granules ; sous forme d'une solution ou d'une suspension dans un liquide aqueux ou un liquide non aqueux ; ou sous forme d'une émulsion liquide huile-dans-eau ou d'une émulsion liquide eau-dans-huile. L'ingrédient actif peut également être présenté sous forme d'un bol, d'un électuaire ou d'une pâte.

Un comprimé peut être préparé par compression ou moulage, facultativement avec un ou plusieurs ingrédients accessoires. Des comprimés produits par compression peuvent être préparés en comprimant dans une machine convenable l'ingrédient actif sous une forme à écoulement libre telle qu'une poudre ou des granules, facultativement en mélange avec d'autres excipients classiques tels que des liants (par exemple un sirop, la gomme arabique, la gélatine, le sorbitol, la gomme adragante, un mucilage d'amidon, la polyvinylpyrrolidone ou l'hydroxyméthylcellulose), des charges (par exemple le lactose, le saccharose, la cellulose microcristalline, l'amidon de maïs, le phosphate de calcium ou le sorbitol), des lubrifiants (par exemple le stéarate de magnésium, l'acide stéarique, le talc, le polyéthylèneglycol ou la silice), des agents de délitement (par exemple la fécule de pomme de terre ou le glycolat d'amidon sodique) ou des agents mouillants tels que le laurylsulfate de sodium.

Des comprimés moulés peuvent être préparés en moulant dans une machine convenable un mélange du composé pulvérisé humidifié avec un diluant liquide inerte. Les comprimés peuvent être facultativement enrobés ou entaillés et peuvent être formulés de manière à provoquer. la libération lente ou contrôlée de l'ingrédient actif qui s'y trouve. Les comprimés peuvent être enrobés par des procédés bien connus dans ce domaine.

En variante, les composés de la présente invention peuvent être incorporés à des préparations liquides orales telles que des suspensions, solutions ou émulsions aqueuses ou huileuses, des sirops ou élixirs, par exemple. En outre, des formulations contenant ces composés peuvent être présentées à l'état de produits secs destinés à une reconstitution avec de l'eau ou un autre véhicule convenable avant utilisation. Ces préparations liquides \ peuvent contenir des additifs classiques tels que des agents de mise en suspension, par exemple le sirop de sorbitol, la méthylcellulose, le glucose/sirop de sucre, la gélatine, l'hydroxyéthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, un gel de stéarate d'aluminium ou des matières grasses comestibles hydrogénées ; des agents émulsionnants tels que la lécithine, le monooléate de sorbitanne ou la gomme arabique ; des véhicules non aqueux (qui peuvent comprendre des huiles comestibles) tels que l'huile d'amande, l'huile de coprah fractionnée, des esters huileux, le propylèneglycol ou l'alcool éthylique ; et des conservateurs tels que le p-hydroxybenzoate de méthyle ou de propyle ou l'acide sorbique. Ces préparations peuvent également être formulées à l'état de suppositoires, contenant par exemple des excipients classiques pour suppositoires tels que le beurre de cacao ou d'autres glycérides.

Les formulations pour l'administration parentérale comprennent des solutions injectables stériles aqueuses et non aqueuses qui peuvent contenir des antioxydants, des tampons, des agents bactériostatiques et des solutés qui rendent la formulation isotonique avec le sang du receveur choisi ; et des suspensions aqueuses et non aqueuses stériles qui peuvent comprendre des agents de mise en suspension et des agents épaississants. Les formulations peuvent être présentées dans des récipients à dose unique ou doses multiples, par exemple des ampoules et flacons clos hermétiquement, et peuvent être stockées à l'état séché par congélation (lyophilisé) nécessitant seulement l'addition d'un véhicule liquide stérile, par exemple de l'eau pour préparations injectables, immédiatement avant utilisation. Des solutions et suspensions injectables extemporanées peuvent être préparées à partir de poudres, granules et comprimés stériles du type décrit précédemment.

Les formulations pour l'administration rectale peuvent être présentées à l'état de suppositoires avec les supports usuels tels que le beurre de cacao, une graisse dure ou le polyéthylèneglycol.

Les formulations pour l'administration topique dans la cavité buccale, par exemple pour l'administration buccale ou sublinguale, comprennent des tablettes comprenant l'ingrédient actif dans un excipient aromatisé tel que la saccharose et la gomme arabique ou la gomme adragante, et des pastilles comprenant l'ingrédient actif dans un excipient tel que la gélatine et le glycérol ou le saccharose et la gomme arabique.

Pour l'administration topique à l'épiderme, les composés peuvent être formulés à l'état de crèmes, de gels, de pommades ou de lotions ou sous forme d'un timbre transdermique.

Les composés peuvent également être formulés à l'état de préparations pour dépôt. Ces formulations à longue durée d'action peuvent être administrées par implantation (par exemple par voie sous-cutanée ou intramusculaire) ou bien par injection intramusculaire. Ainsi, par exemple, les composés peuvent être formulés avec des matières polymères ou hydrophobes convenables (par exemple sous forme d'une émulsion dans une huile acceptable) ou des résines échangeuses d'ions, ou sous forme de dérivés très faiblement solubles, par exemple sous forme d'un sel très faiblement soluble.

Pour l'administration intranasale, les composés de la présente invention peuvent être utilisés, par exemple, sous forme d'un liquide d'atomisation, d'une poudre ou de gouttes.

Pour l'administration par inhalation, les composés conformes à la présente invention sont délivrés convenablement sous forme d'un aérosol émis par pulvérisation par un récipient sous pression ou un nébuliseur, au moyen d'un agent propulseur convenable, par exemple le 1,1, 1, 2-trifluoréthane (HFA 134A) et le 1,1, 1,2, 3,3, 3-heptafluoropropane (HFA 227), le dioxyde de carbone ou un autre gaz convenable. Dans le cas d'un aérosol sous pression, la dose exacte peut être déterminée en installant une valve destinée à délivrer une quantité mesurée. Les capsules et cartouches constituées, par exempte, de gélatine, destinées à être utilisées dans un inhalateur ou insufflateur peuvent

être formulées de manière à contenir un mélange de poudres constitué d'un composé de la présente invention et d'un excipient en poudre convenable tel que le lactose ou l'amidon.

En plus des ingrédients mentionnés particulièrement ci-dessus, les formulations peuvent comprendre d'autres agents classiques dans ce domaine en rapport avec le type de formulation en question ; par exemple, les formulations convenables pour l'administration orale peuvent comprendre des agents aromatisants.

L'homme de l'art notera qu'une référence dans le présent mémoire à un traitement s'étend à la prophylaxie ainsi qu'au traitement de maladies ou symptômes établis. En outre, on notera que la quantité d'un composé de la présente invention requise pour l'utilisation dans un traitement varie en fonction de la nature de l'affection traitée et de l'âge et de l'état du patient et sera finalement laissée à la discrétion du médecin traitant ou vétérinaire. Cependant, en général, les doses utilisées pour le traitement d'un patient humain adulte sont comprises habituellement dans l'intervalle de 0,02 à 5000 mg par jour, de préférence de 1 à 1500 mg par jour. La dose désirée peut être présentée convenablement en une dose unique ou de manière fractionnée en plusieurs doses administrées à des intervalles appropriés, par exemple sous forme de deux, trois, quatre ou plus de quatre doses secondaires par jour. Les formulations conformes à la présente invention peuvent contenir 0,1 à 99 % de l'ingrédient actif, convenablement 30 à 95 % pour les comprimés et capsules et 3 à 50 % pour les préparations liquides.

Le composé de formule (I) destiné à être utilisé dans la présente invention peut être utilisé en association avec un ou plusieurs autres agents thérapeutiques, par exemple des antagonistes des récepteurs bêta- adrénergiques, des agents de blocage du canal calcium, des diurétiques du type thiazide, des antagonistes des récepteurs d'angiotensine et des inhibiteurs de l'enzyme de conversion d'angiotensine. Ainsi, la présente invention propose dans. un aspect supplémentaire l'utilisation d'une association comprenant un composé de formule (I) et un agent thérapeutique supplémentaire dans le traitement de l'hypertension artérielle.

Lorsque les composés de formule (I) sont utilisés en association avec d'autres agents thérapeutiques, les composés peuvent être administrés successivement ou simultanément par n'importe quelle voie convenable.

Les associations mentionnées ci-dessus peuvent être présentées convenablement à des fins d'utilisation sous forme d'une formulation pharmaceutique et, ainsi, des formulations pharmaceutiques comprenant une association répondant à la définition précitée conjointement de manière optimale avec un support ou excipient pharmaceutiquement acceptable constituent un aspect supplémentaire de la présente invention. Les différents constituants de ces associations peuvent être administrés successivement ou simultanément dans des formulations pharmaceutiques séparées ou combinées.

Lorsqu'ils sont combinés dans la même formulation, on notera que les deux composés doivent être stables et compatibles l'un avec l'autre et les autres constituants de la formulation et peuvent être formulés pour l'administration. Lorsqu'ils sont formulés séparément, ils peuvent être fournis dans n'importe quelle formulation convenable, commodément d'une manière connue pour de tels composés dans ce domaine.

Lorsqu'un composé de formule (I) est utilisé en association avec un second agent thérapeutique actif contre la même maladie, la dose de chaque composé peut différer de celle administrée lorsque le composé est utilisé seul. Les doses appropriées seront aisément déterminées par l'homme de l'art.

Les composés de formule (1) dans laquelle R1 représente un groupe alkyle substitué par un groupement A qui est un groupe S03H ou SO3R' et dans laquelle R2 représente notamment un groupe alkyle substitué par un groupe B qui peut être un groupe phényle libre ou substitué peuvent être préparés par les procédés suivants, les procédés A et B étant préférentiellement utilisés.

Ces procédés décrivent notamment la préparation de monomères intermédiaires pour la synthèse des composés disulfures (OUi composés dimères) de formule (1), qui peuvent qui ; peut être aisément obtenus par

oxydation à l'iode.

Ces composés disulfures sont des composés précurseurs ou "prodrugs"dont la structure dimère facilite le passage de la barrière hémato- encéphalique (BHE). Le monomère, qui est le composé actif, est ensuite libéré par un processus physiologique (M. C. Fournié-Zaluski et al., Proc Natl Acad Sci. USA 2004 ; 101, 7775-7780).

Dans le procédé A, une réaction d'oléfination permet la transformation du triméthylester de la N- (benzyloxycarbonyl)-a- phosphonoglycine en déhydroaminoacide 1 selon la méthode de U. Schmidt, H.

Griesser, V. Leitenberger, A. Lieberknecht, R. Mangold, R. Meyer, B. Rield.

Synthesis, 1992,487-490. Le composé 1 subit une réaction de Michael pour conduire à une cystéine (3-substituée 2 avec un rendement global de 30 à 60%.

Une procédure « one-pot » permet l'obtention d'un sulfonate a, (3-insaturé 3 ou d'un phosphonate ou d'un carboxylate a, (3-insaturé selon la méthode décrite par : C. David et al., Tetrahedron, 2000,56, 209-215. La réduction du composé 3 par le borohydrure de sodium donne le composé 4. La déprotection du composé 4 au reflux de l'acide trifluoroacétique en présence d'anisol permet après précipitation d'isoler le composé 5, qui peut être aisément transformé en disulfure (composé 5 dimère) par oxydation à l'iode.

Procédé A PO3Me OMe ZNH' I, ZNH Me * Me 0 RCH, R = Ph, PhCH, PhCH2CH2l -'"-' 1Rdt70-95% D ! BA ! Etz03PCH2S03CH2C n-BuLi 5a 5b 5c : 5d 5e : 5f : 4-MeOPhCH2CH2 5g 5h 50-60% SPMB SPMB 5 Rdt 70 % 3 Rdt 70-80% 12 EtOH S03H S03H \R . HN *Y Y* NH S S 5

Z représente un groupe protecteur convenable, par exemple un groupe benzyloxycarbonyle.

Dans le but de déterminer les préférences stéréochimiques des composés 5, une synthèse stéréosélective des quatre stéréo-isomères a été effectuée. Cette synthèse s'appuie sur l'obtention stéréosélective de cystéines (3-substituées 2 selon la méthode de : C. Xiong, et al., J. Org. Chem., 2002,67, 3514-3517.

Ces synthèses sont décrites dans les schémas des procédés B1- B4 ci-après. HO \/S'R'ssw ~ OH Na104/RuCl3 6 1) 2) H, (R) HO COOEt , NZ Nu 12a il sH CNO Eut20 : BF3 CH30 S3C"2CC"33 COOEt (s) (R) NHZ W NaBH4 TFA, reflux CH30 HS'so (R) ' NHZ 5e Procédé B1 HO COOEt HO COOEt 1) 8a-- 2) HaS04 covet iR) R) H H 9a 10b 11b /Cbz-OSu ! c30 SH COOEt 3 NHZ NZ PC 2e2 DIBALH Et2POCH2SOICH2tBu Y CH30 S (S) NHZ 4e2 TFA, t HS HS/ (s)) NH NH2 X Procédé B2 HO (R) AD-mix-p p OH v (R) 6 NaN3 1) -- 1) NaNg 1 (s) HO COOEt r (R) z'N3 12c oh | Et20 : BF3 i ' {"Y CH, 0, SO, CH, C (CH COOEt C (R) (S) (R) NHZ X NaBH4 t TFA, reflux CH30 HS S03H (R) (S) (S) NH2 NHZ 4e 5e3 Procédé B3 HO COOEt HO cOOEt/\ 1) LiBr (R) >--- 8b- 2) HaS04 (S) COOED H. 9b 10d 11d Cbz-OSu Cob SH GOOEt "3° (R) NHZ : BF3 NZ PC \/ 12d DIBALH Et2POCH2SO3CH2tBu CHO CH3O S (R) (R) //NHZ (3e 4 TFA, HS erz W ne2 Procédé B4

D'autres composés de formule (1) peuvent être préparés par des procédés analogues aux procédés ci-dessus et seront manifestes pour l'homme de l'art, comme par exemple le procédé illustré par le schéma 1 ci-après.

Schéma 1

Dans le schéma 1, Z représente un groupe protecteur convenable, par exemple un groupe benzyloxycarbonyle et les lettres a à j représentent les conditions suivantes : a : NaBH4, LiCI ; b : DMSO, (COC12) 2 ; c ; NaCN ; d ; HCI ; MeOH ; e : PhCh2Br, NaH puis DIBAL ; f : RCH2PPH3Br, nBuLi ; g : H2, Pd/C, Boc2O ; h ; Mitsunobu ; i : HCI, reflux ; j : 12, EtOH.

L'invention est illustrée de manière non limitative par les exemples suivants, dans lesquels la synthèse des monomères intermédiaires utilisables dans la synthèse des composés de formule (1) est décrite dans la partie « PREPARATIONS » et les numéros des composés se réfèrent aux procédés A et B décrits ci-dessus.

PREPARATIONS Dans les préparations 1 à 5 suivantes (procédé A), les lettres a à h se réfèrent aux composés pour lesquels la variable R a les définitions suivantes : a R=CH3 b R=Ph c R = (CH3) 2CHCH2- d R = PhCH2- e R = PhCH2CH2- f R = 4-MeOPhCH2CH2- g R = 2-MeOPhCH2CH2- h R = 4-Br-PhCH2CH2- avec Ph = phényle Les préparations 6 à 16 se réfèrent aux procédés B1 à B4 décrits plus haut.

Préparation 1 : Svnthèse des composés 1 A une solution du triester méthylique de la N-benzyolxycarbonyl ! a- phosphonoglycine 12, (5 mmolí, 1, 8 g) dans 10 ml de dichlorométhane on ajoute à 0°C, 0, 76 ml (5mmot) de diazabicycl'oundécène (DBU). Après 10 min on

additionne l'aldéhyde (5 mmol). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante une nuit. Le mélange réactionnel est dissous par 30 ml de dichlorométhane, on lave ensuite avec 2 x 10 ml, puis avec 2 x 10 ml d'une solution saturée de chlorure de sodium. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium puis concentrée sous pression réduite, l'huile obtenue est purifiée par filtration sur silice (20 g) éluant cyclohexane/acétate d'éthyle 9/1.

On a obtenu de la même manière les composés 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 1g et 1h qui ont été caractérisés par leur spectre 1H RMN dans CDCl3 à 400MHz.

Composé 1a : (2Z)-2-(N-benzyloxycarbonylamino)-but-2-ène-oate de méthyle Rdt 72%. RMN 1H (CDCI3) : 1,85 (d, 3H, J = 7 Hz, CH3), 3,75 (s, 3H, CH30), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 6,2 (s, 1H, NH), 6,78 (q, 1H, J = 7 Hz, CH=C), 7,43 (m, 5H, O-CH2-C6H5).

Composé 1b (2Z)-2- (N-benzyloxycarbonylamino)-3-phényl-pro-2-ène-oate de méthyle Rdt 55%. RMN 1H (CDCl3) : 3,75 (s, 3H, CH30), 5,15 (s, 2H, O- CH2-C6H5), 6,4 (s, 1H, NH), 7,43 (m, 5H, O-CH2-C6H5), 7,52 (d, 1H, J = 3 Hz, CH=C).

Composé 1c (2Z)-2- (N-benzyloxycarbonylamino)-5-méthyl-hex-2-ène-oate de méthyle Rdt 95%. RMN 1H (CDCl3) : 0,95 (d, 6H, J = 7 Hz, CH-CH3), 1,8 (hpt, 1H, J = 7Hz, CH-CH3), 2,1 (t, 2H, J = 7 Hz, CH-CH2), 3,75 (s, 3H, CH30), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 6.15 (s, 1H, NH), 6,78 (q, 1H, J = 7 Hz, CH=C), 7,43 (m, 5H, O-CH2-C6H5).

Composé 1d (2Z)-2-(N-benzyloxycarbonylamino)-4-phényl-but-2-ène-oate de méthyle Rdt 82%. RMN 1H(CDCl3) : 3,57 (d, 2H, J = 7 Hz, CH-CH2-C6H5),

3,75 (s, 3H, CH30), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 6,3 (s, 1H, NH), 6,78 (q, 1H, J = 7 Hz, CH=C), 7,2-7, 3 (m, 5H, CH2-C6H5), 7,43 (m, 5H, O-CH2-C6H5).

Composé 1e (2Z)-2- (N-benzyloxycarbonylamino)-5-phényl-pent-2-ène-oate d'éthyle Rdt 100%. RMN 1H (CDCl3) : 2,52 (q, 2H, J = 7Hz, CH2-CH2-CH), 2,80 (t, 2H, J = 7Hz, CH2-CH2-CH), 3,75 (s, 3H, CH30), 5,15 (s, 2H, 0-CH2- C6H5), 6,1 (s, 1H, NH), 6,68 (t, 1H, J = 7 Hz, CH=C), 7,2 (m, 2H, CH2-C6H5), 7,3 (m, 3H, CH2-C6H5), 7,43 (m, 5H, O-CH2-C6H5).

Composé 1f (2Z)-2- (N-benzyloxycarbonylamino)-5- (4-méthoxy-phényi)-pent-2-ène-oate d'éthyle Rdt 80%. RMN 1H (CDCl3) : 2,51 (q, 2H, J = 7Hz, CH2-CH2-CH), 2,72 (t, 2H, J = 7Hz, CH2-CH2-CH), 3,75 (s, 3H, CO2CH3), 3,8 (s, 3H, CH30), 5,15 (s, 2H, 0-CH2-C6H5), 6,1 (s, 1H, NH), 6,65 (t, 1H, J = 7 Hz, CH=C), 6, 8 (d, 2H, 4-CH30-C6H4), 7,1 (d, 2H, 4-CH30-C6H4), 7,3-7, 4 (5H, m, CH2- C6Hs) Composé 1g (2Z)-2- (N-benzyloxycarbonylamino)-5- (2-méthoxy-phényl)-pent-2-ène-oate d'éthyle Rdt 61%. RMN 1H (CDCI3) : 2,5 (m, 2H, CH2-CH2-CH), 2,75 (t, 2H, J = 7Hz, CH2-CH2-CH), 3,75 (s, 3H, C02CH3), 3,8 (s, 3H, CH30), 5,15 (s, 2H, 0- CH2-C6H5), 6,1 (s, 1H, NH), 6,7 (t, 1H, J = 7 Hz, CH=C), 6,85 (d, 1H, 2-CH30- C6H4), 6,9 (dd, 1H, 2-CH2O-C6H4), 7,1 (d, 1H, 2-CH3O-C6H4), 7,2 (t, 1H, 2- CH30-C6H4), 7,3-7, 4 (5H, m, CH2-C6H5).

Composé 1h (2Z)-2-(N-benzyloxycarbonylamino)-5-(4-bromo-phényl)-pent-2 -ène-oate d'éthyle Rdt 41%. RMN 1H (CDCl3) : RMN 1H (CDCl3): 2,51 (q, 2H,

J = 7Hz, CH2-CH2-CH), 2,72 (t, 2H, J = 7Hz, CH2-CH2-CH), 3,75 (s, 3H, C02CH3), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 6,1 (s, 1H, NH), 6,65 (t, 1H, J = 7 Hz, CH=C), 7,0 (d, 2H, 4-Br-C6H4), 7,3-7, 4 (5H, m, CH2-C6H5), 7,5 (d, 2H, 4-Br- C6H4).

Préparation 2 : Synthèse des composés 2 A une solution de 1 (5 mmol) et de 4-méthoxy-benzylmercaptan (10 mmol) dans 10 mi de toluène anhydre on ajoute 200 ut de pipéridine. Le mélange est porté à reflux 24 h sous argon. Le solvant est éliminé sous pression réduite. Après purification par chromatographie sur colonne (Eluant dichlorométhane) une huile est obtenue.

On a obtenu de la même manière les composés 2a, 2b, 2c, 2d, 2e, 2f, 2g et 2h qui ont été caractérisés par leur spectre 1H RMN dans CDC13 à 400MHz.

Composé 2a 2-Benzyloxycarbonylamino-3- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-butyrate de méthyle Rdt 73%. HPLC (80%) : Tr = 5,2 et 5,4 min RMN 1H (CDCI3) : 1,2 et 1,3 (d, 3H, J = 7 Hz, CH3), 3,1 et 3,3 (m, 1H,-CH-S), 3,6, 3,65, 3,7 et 3,75 (s, 8H, C02CH3, S-CH2, CH30), 4,5 et 4,6 (dd, 1H, CH-CO2), 5,15 (s, 2H, O-CH2- C6H5), 5,4 et 5,55 (d, 1H, NH), 6,2 (s, 1H, NH), 6, 78 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7,2 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7,43 (m, 5H, O-CH2-C6H5).

Composé 2b 2-Benzyloxycarbonylamino-3- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-3-phényl- propanoate de méthyle Rdt 60%. HPLC (80%) : Tr = 6,7 min. RMN 1H (CDCl3) : 3,5 et 3,6 (s, 2H,-CH2-S), 3,6 (s, 3H, CM30), 3,75 (s, 3H, CO2CH3), 4,1 et 4,15 (d, 1H, J = 4 Hz,-CH-S), 4,65 et 4,85 (dd, 1 H, CH-CO2), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 5,2 et 5,45 (d, 1H, NH), 6,75 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7,05 et 7,1 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7,43 (m, 10H, O-CH2-C6H5 et CH-C6H5).

Composé 2c 2-Benzyloxycarbonylamino-3- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-5-méthyl- hexènoate de méthyle Rdt 33%. HPLC (80%) : Tr= 8,3 et 9,3 min. RMN 1H (CDCI3) : 0,65 et 0,7 (d, 3H, CH-CH3), 0,8 (d, 3H, CH-CH3), 1,2-1, 4 (m, 2H, CH2-CH), 1,7 (m, 1H, CH-CH3), 2,9 et 3,2 (m, 1H, -CH-S), 3,55 (s, 2H,-CH2-S), 3,7 (s, 3H, CH30), 3,75 (s, 3H, C02CH3), 4,6 et 4,65 (dd, 1H, CH-C02), 5,15 (s, 2H, O- CH2-C6H5), 5,45 et 5,55 (d, 1H, NH), 6,75 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7,05 et 7,1 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7,43 (m, 5H, O-CH2-C6H5).

Composé 2d <BR> 2-Benzyloxycarbonylamino-3- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-4-phényl- butyrate de méthyle Rdt 45%. HPLC (80%) : Tr = 8,0 et 8, 4 min. RMN 1H (CDCl3) : 2,8, 2,90 et 3,05 (dd, 2H, S-CH-CH2), 3,4 (m, 1H, S-CH-CH2), 3,55 (s, 3H, CH30), 3,6 et 3,75 (s, 2H, -CH2-S), 3,8 (s, 3H, C02CH3), 4,55 (dd, 1H, CH-CO2), 5,05 et 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 5,5 (d, 1H, NH), 6,75 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7,05 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7,1-7, 43 (m, 10H, O-CH2-C6H5 et CH2-C6H5).

Composé 2e 2-Benzyloxycarbonylamino-3- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-5-phényl- pentanoate de méthyle Rdt 84%. HPLC (80%) : Tr = 8,3 et 9,1 min. RMN 1H (CDCI3) : 1,7- 2,0 (m, 2H, CH-CH2-CH2), 2,5-2, 75 (m, 2H, CH-CH2-CH2), 2,8 et 3,1 (m, 1H, S- CH-CH2), 3,55 et 3,65 (s, 2H, -CH2-S), 3,7 (s, 3H, CH30), 3,8 (s, 3H, C02CH3), 4,6 et 4,7 (dd, 1H, CH-CO2), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 5,4 et 5,6 (d, 1H, NH), 6,80 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7, 0 et 7, 1 (d, 2H, J = 7 Hz, S-C6H4), 7,2-7, 43 (m, 10H, O-CH2-C6H5 et CH2-C6H5).

Composé 2f 2-Benzyloxycarbonylamîno-3- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-S- (4-méthoxy- phényl)-pentanoate de méthyle Rdt 71 %. HPLC (80%) : Tr = 7,9 et 8, 4 min. RMN 1H (CDCl3) : 1,7- 1,9 (m, 2H, CH-CH2-CH2), 2,45 et 2,83 (m, 2H, CH-CH2-CH2), 2,86 et 3,1 (m, 1H, S-CH-CH2), 3,55 et 3,65 (s, 2H,-CH2-S), 3,7 (s, 3H, CH30), 3,8 (m, 6H, CO2CH3 et CH30), 4,65-4, 7 (dd, 1H, CH-CO2), 5,13 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 5,45 et 5,53 (d, 1 H, NH), 6,8 (m, 4H, H Aromatique), 6,9-7, 2 (m, 4H, H Aromatique), 7,3-7, 4 (m, 5H, CH2-C6H5).

Composé 2q 2-Benzyloxycarbonylamino-3- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-5- (2-méthoxy- phényl)-pentanoate de méthyle Rdt 62%. HPLC (80%) : Tr = 8,9 et 9,6 min. RMN 1H (CDCl3) : 1,7- 1,9 (m, 2H, CH-CH2-CH2), 2,56 et 2,83 (m, 2H, CH-CH2-CH2), 2,86 et 3,1 (m, 1 H, S-CH-CH2), 3,55 et 3,7 (s, 2H,-CH2-S), 3,63 et 3,66 (s, 3H, CH30), 3,8 (s, 6H, C02CH3 et CH30), 4,66 et 4,76 (dd, 1H, CH-C02), 5,13 (s, 2H, O-CH2- C6H5), 5,45 et 5,53 (d, 1 H, NH), 6,76-6, 95 (m, 4H, H Aromatique), 7,03 (m, 1 H, H Aromatique), 7,06 (d, 1H, H Aromatique), 7,15-7, 25 (m, 2H, H Aromatique), 7,3-7, 4 (m, 5H, CH2-C6H5).

Composé 2h 2-Benzyloxycarbonylaniino-3- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-5- (4-bromo- phényl)-pentanoate de méthyle Rdt 57%. HPLC (80%) : Tr= 15,1 et 15,9 min. RMN 1H (CDCI3) : 1,6-1, 8 (m, 2H, CH-CH2-CH2), 2,5-2, 7 (m, 2H, CH-CH2-CH2), 2,8 et 3,1 (m, 1H, S-CH-CH2), 3,55 et 3,65 (s, 2H, -CH2-S), 3,7 (s, 3H, CH30), 3,8 (m, 3H, C02CH3), 4,6-4, 7 (dd, 1H, CH-CO2), 5,13 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 5,45 et 5,6 (d, 1H, NH), 6,6-6, 8 (m, 4H, H Aromatique), 7,1-7, 2 (m, 4H, H Aromatique), 7,3- 7,4 (m, 5H, CH2-C6H5).

Préparation 3 : Synthèse des composés 3 A une solution de diéthoxyphosphorylméthanesulfonate de néopentyl (2 équivalents) dans du THF anhydre (4,5 ml/mmol) on ajoute goutte à goutte à-78°C, une solution de n-butyl lithium 1,6 M dans l'hexane (2 équivalents). Après 30 min sous agitation, on ajoute une solution du composé 2 (1 équivalent) dans du THF anhydre (1 ml/mmol) suivi de l'introduction goutte à goutte d'une solution d'hydrure de diisobutylaluminium 1,6 M dans le toluène (2 équivalents). Le mélange réactionnel est maintenu à-78°C 4 h, on laisse ensuite revenir à température ambiante une nuit. Les solvants sont éliminés sous pression réduite, le résidu est additionné de 10 ml/mmol d'éther et de 5 ml/mmol d'HCI 2N. Le mélange est agité 30 min, la phase organique est séparée, la phase aqueuse est extraite deux fois avec un volume d'éther équivalent. Les phases organiques sont réunies, séchées sur Na2SO4 et concentrées sous pression réduite. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur silice. Après élimination des solvants le produit 3 est obtenu sous forme d'une huile.

On a obtenu de la même manière les composés 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g et 3h qui ont été caractérisés par leur spectre 1H RMN dans CDC13 à 400 MHz.

Composé 3a 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-pent-1-ène-1- sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 42%. HPLC (80%) : Tr = 8,1 et 8,4 min. RMN 1H (CDCI3) : 1,0 (s, 9H, C (CH3) 3), 1,2 et 1,3 (d, 3H, J = 7 Hz, CH3), 2,8 (m, 1H,-CH-S), 3,6-3, 9 (m, 7H, SO3CH2, S-CH2, CH30), 4,6 (m, 1H, CH-N), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 5,2 (d, 1H, NH), 6,3 (d, 1H, CH=CH-S03), 6,7 (dd, 1H, CH=CH-S03), 6,8 (m, 2H, S-C6H4), 7,2 (m, 2H, S-C6H4), 7,43 (m, 5H, O-CH2-C6H5).

Composé 3b <BR> <BR> <BR> 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-4-phényl-but-1- ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 42%. HPLC (80%) : Tr= 10,8 min. RMN 1H (CDCI3) : 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 3,4 (m, 2H, S-CH2), 3,6 (s, 2H, SO3CH2), 3,8 (s, 3H, CH30), 3,9 (m, 1H, -CH-S), 4,8 (m, 1H, CH-N), 5,05 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 5,1 (d, 1H, NH), 6,1 (d, 1H, CH=CH-SO3), 6,7 (dd, 1H, CH=CH-S03), 6,8 (m, 2H, S-C6H4), 7,2 (m, 2H, S-C6H4), 7,43 (m, 10H, H aromatique).

Composé 3c <BR> <BR> <BR> 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6-méthyl-hept-1- ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 56%. HPLC (80%) : Tr= 14,4 et 15,4 min. RMN 1H (CDCI3) : 0,6 et 0,8 (d, 6H, J = 7 Hz, CH (CH3) 2), 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 1,2-1, 4 (m, 2H, CH2-CH), 1,7 (m, 1H, CH (CH3) 2), 2,7 (m, 1H,-CH-S), 3,6-3, 9 (m, 7H, S03CH2, S-CH2, CH30), 4,6 (m, 1H, CH-N), 5,05 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 5,1 (d, 1H, NH), 6,3 (d, 1H, CH=CH-SO3), 6,7 (dd, 1H, CH=CH-SO3), 6,8 (m, 2H, S-C6H4), 7,2 (m, 2H, S-C6H4), 7,43 (m, 5H, H aromatique).

Composé 3d <BR> <BR> <BR> 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-5-phényl-pent-1- ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 76%. HPLC (80%) : Tr= 12,7 min. RMN 1H (CDCI3) : 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 2,8 (m, 3H, CH2-CH-S), 3,6-3, 9 (m, 7H, SOsCHz, S-CH2, CH30), 4,6 (m, 1H, CH-N), 5,05 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 5,1 (d, 1H, NH), 6,3 (d, 1H, CH=CH-S03), 6,7 (dd, 1H, CH=CH-S03), 6,8 (m, 2H, S-C6H4), 7,0 (m, 2 H, H aromatique), 7,2 (m, 2H, S-C6H4), 7,43 (m, 8H, H aromatique).

Composé 3e 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6-phényl-hex-1- ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 74%. HPLC (80%) : Tr = 15, 1 et 16, 0 min. RMN 1H (CDCl3) :

0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 1, 8 (m, 2H, CH2-CH-S), 2,6 (m, 2H, CH2-CH2-CH-S), 2,8 (m, 1H, CH-S), 3,6-3, 9 (m, 7H, S03CH2, S-CH2, CH30), 4,6-4, 7 (m, 1H, CH-N), 5,05 et 5,2 (d, 1H, NH), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 6,3 (d, 1H, CH=CH-SO3), 6,7 (dd, 1H, CH=CH-S03), 6,8 (m, 2H, S-C6H4), 7,0-7, 1 (m, 5 H, H aromatique), 7,2 (m, 2H, S-C6H4), 7,43 (m, 5H, H aromatique).

Composé 3f 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- (4-méthoxy- phényl)-hex-1-ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 59%. HPLC (80%) : Tr = 13,2 et 14,0 min. RMN 1H (CDCl3) : 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 1,8 (m, 2H, CH2-CH-S), 2,6 (m, 2H, CH2-CH2-CH-S), 2,8 (m, 1H, CH-S), 3,6-3, 9 (m, 10H, SO3CH2, S-CH2, CH30), 4,6-4, 7 (m, 1H, CH- N), 5,05 et 5,2 (d, 1H, NH), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 6,3 (d, 1H, CH=CH-SO3), 6,7 (dd, 1H, CH=CH-SO3), 6,8 (m, 4H, H aromatique), 7,2 (m, 4H, H aromatique), 7,43 (m, 5H, H aromatique).

Composé 3q 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- (2-méthoxy- phényl)-hex-1-ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 62%. HPLC (80% B) : Tr= 15,74 et 16,17 min. 1H RMN (CDCl3) : 1 (s, 9H, C (CH3) s), 1,8 (m, 2H, CH2-CH-S), 2,6 (m, 2H, CH2-CH2-CH- S), 2,8 (m, 1H, CH-S), 3,6-3, 8 (m, 10H, S03CH2, S-CH2, CH30), 4,7-4, 8 (m, 1H, CH-N), 5,15 (m, 2H, O-CH2-C6H5), 5,2 (d, 1H, NH), 6,3 (d, 1H, CH=CH- SO3), 6,7 (dd, 1H, CH=CH-SO3), 6,8 (m, 2H, H aromatique), 7,03-7, 25 (m, 4H, H aromatique), 7,43 (m, 7H, H aromatique).

Composé 3h 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- (4-bromo- phényl)-hex-1-ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 45%. HPLC (80%) : Tr = 21, 8 et 23,3 min. RMN 1H (CDCl3) : 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 1, 8 (m, 2H, CH2-CH-S), 2,6 (m, 2H, CH2-CH2-CH-S), 2, 8 (m, 1H, CH-S), 3,6-3, 9 (m, 7H, SO3CH2, S-CH2, CH3O), 4, 6-4,7 (m, 1H, CH-N),

5,2 (d, 1H, NH), 5,15 (m, 2H, O-CH2-C6H5), 6,3 (d, 1H, CH=CH-SO3), 6,7 (dd, 1H, CH=CH-S03), 6,8 (m, 2H, H aromatique), 6,9-7, 2 (m, 4H, H aromatique), 7,43 (m, 7H, H aromatique).

Préparation 4 : synthèse des composés 4 A une solution d'un composé 3 (1 équivalent) dans de l'éthanol absolu (5 ml/mmol) on ajoute du borohydrure de sodium (1 équivalent). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante une nuit. Les solvants sont éliminés sous pression réduite, le résidu est additionné de 10 ml/mmol d'acétate d'éthyle et de 5 ml/mmol d'eau. La phase organique est séparée, la phase aqueuse est extraite deux fois avec un volume d'acétate d'éthyle équivalent. Les phases organiques sont réunies, séchées sur Na2SO4 et concentrées sous pression réduite. L'huile obtenue est purifiée par HPLC semi- préparative. Après élimination des solvants le produit 16 est obtenu sous forme d'une huile.

On a obtenu de la même manière les composés 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g et 4h qui ont été caractérisés par leur spectre 1H RMN dans CDC13 à 400 MHz et par spectroscopie de masse electrospray.

Composé 4a 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-pentane-1- sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 30%. HPLC (80%) : Tr = 7,5 et 7,7 min. RMN'H (CDC13) : 1,0 (s, 9H, C (CH3) 3), 1,2 et 1,3 (d, 3H, J = 7 Hz, CH3), 1,8-2, 1 (m, 2H, CH2CH2- SO3), 2,8 (m, 1H,-CH-S), 3,0 (m, 2H, CH2-CH2-SO3), 3,6-3, 9 (m, 8H, S03CH2, CH-S-CH2, CH30), 4,7-5, 0 (d, 1H, NH), 5,15 (m, 2H, O-CH2-C6H5), 6,8 (m, 2H, S-C6H4), 7,2 (m, 2H, S-C6H4), 7,43 (m, 5H, O-CH2-C6H5). ES+ : 546 M+Na+ Composé 4b 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (, 4-méthoxy-bonzylsulfanyl)-4-phényi- butane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyl'e Rdt 62%. HPLC (80%) : Tr = 10,3 min. RMN 1H (CDCl3) : 1, 0 (s,

9H, C (CH3) 3), 1,8 (m, 1H, CH2CH2-SO3), 2,1 (m, 1H, CH2CH2-SO3), 3,2 (m, 2H, CH2-CH2-SO3), 3,4 (m, 1H,-CH-S), 3,7-3, 8 (m, 7H, S03CH2, S-CH2, CH30), 4,05 (m, 1H, CH-S), 4,8 (d, 1H, NH), 5,15 (m, 2H, O-CH2-C6H5), 6,8 (m, 2H, S- C6H4), 7,05 (m, 2H, S-C6H4), 7,43 (m, 10H, H aromatique). ES+ : 608 M+Na+ Composé 4c 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6-méthyl- heptane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 80%. HPLC (80%) : Tr = 13,8 et 14,5 min. RMN 1H (CDCI3) : 0,6 et 0,8 (d, 6H, J = 7 Hz, CH (CH3) 2), 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 1,2-1, 4 (m, 2H, CH2-CH), 1,6-1, 8 (m, 2H, CH2CH2-S03), 2,0 (m, 1H, CH (CH3) 2), 2,7 (m, 1H,- CH-S), 3,2 (m, 2H, CH2-CH2-SO3), 3,6-3, 9 (m, 8H, S03CH2, S-CH2, CH30, CH- N), 4,9 (d, 1H, NH), 5,05 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 6,8 (m, 2H, S-C6H4), 7,2 (m, 2H, S-C6H4), 7,43 (m, 5H, H aromatique). ES+ : 588 M+Na+ Composé 4d 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-5-phényl- pentane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 76%. HPLC (80%) : Tr = 12,17 min. RMN 1H (CDCl3) : 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 1,6-1, 8 (m, 2H, CH2CH2-SO3), 2,6-3, 1 (m, 5H, CH2-CH-S, CH2CH2-SO3), 3,4-3, 6 (m, 2H, S-CH2), 3,7-3, 9 (m, 6H, S03CH2, CH-N, CH30), 4,9 (d, 1H, NH), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 6,75 (m, 2H, S-C6H4), 7,1 (m, 3 H, H aromatique), 7,2 (m, 2H, H aromatique), 7,3-7, 4 (m, 7H, H aromatique). ES+ : 622 M+Na+ Composé 4e 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6-phényl- hexane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 74%. HPLC (90%) : Tr = 15,6 et 16,5 min. RMN 1H (CDCl3) : 0, 9 (s, 9H, C(CH3)3), 1,8-2,1 (m, 4H, CH2-CH-S, CH2-CH2-SO3), 2,5 (m, 2H, CH2-CH2), 2,7-3,1 (m, 3H, CH-S, CH2CH2-SO3), 3,6-3, 8 (m, 7H, SO3CH2, S- CH2, CH3O) 3, 95 (m, 1H, CH-N), 4,85 et 4,95 (d, 1H, NH), 5,15 (s, 2H, O-CH2-

C6H5), 6,8 (m, 2H, S-C6H4), 7,0-7, 2 (m, 5 H, H aromatique), 7,2 (m, 2H, S- C6H4), 7,43 (m, 5H, H aromatique). ES+ : 636 M+Na+ Composé 4f 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- (4-méthoxy- phényl)-hexane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 59%. HPLC (80%) : Tr= 12,6 et 13,4 min. RMN 1H (CDCI3) : 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 1,8-2, 1 (m, 4H, CH2-CH-S, CH2-CH2-SO3), 2,5 (m, 2H, CH2-CH2), 2,7-3, 1 (m, 3H, CH-S, CH2CH2-SO3), 3,6-3, 8 (m, 10H, S03CH2, S- CH2, CH30, CH30), 3,95 (m, 1H, CH-N), 4,85 et 4,95 (d, 1H, NH), 5,15 (s, 2H, O-CH2-C6H5), 6,8 (m, 4H, H aromatique), 6,9-7, 1 (m, 4 H, H aromatique), 7,43 (m, 5H, H aromatique). ES+ : 666 M+Na+ Composé Composé 4g 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- (2-méthoxy- phényl)-hexane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 83%. HPLC (80%) : Tr= 14,7 et 15,3 min, RMN 1H (CDCI3) : 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 1,7-2, 1 (m, 4H, CH2-CH-S, CH2-CH2-SO3), 2,4 (m, 2H, CH2-CH2), 2,7-3, 1 (m, 3H, CH-S, CH2CH2-SO3), 3,6-3, 8 (m, 10H, SO3CH2, S- CH2, CH30, CH30), 4,0 (m, 1H, CH-N), 4,85 et 4,95 (d, 1H, NH), 5,15 (m, 2H, O-CH2-C6H5), 6, 8 (m, 4H, H aromatique), 6,9-7, 1 (m, 4 H, H aromatique), 7,43 (m, 5H, H aromatique). ES+ : 666 M+Na+ Composé 4h 3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- (4-bromo- phényl)-hexane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt 91%. HPLC (80%) : Tr=21, 7 et 22,8 min. RMN 1H (CDCI3) : 0,9 (s, 9H, C (CH3) 3), 1,6-1, 9 (m, 4H, CH2-CH-S, CH2-CH2-SO3), 2,45 (m, 2H, CH2-CH2), 2,65 (m, 1H, CH-S), 3, 1 (m, 2H, CH2CH2-SO3), 3,5-3, 8 (m, 7H, SO3CH2, S-CH2, CH30), 3,95 (m, 1 H, CH-N), 4,85 et 4,95 (d, 1H, NH), 5,1 (2H, s, O-CH2-C6H5), 6,8 (m, 4H, H aromatique), 6, 9-7, 1 (m, 4 H, H aromatique), 7,43 (m, 5H, H aromatique). ES+ : 700-702 M+Na+

Préparation 5 : synthèse des composés 5 Au composé 4 (1 équivalent) on ajoute de l'anisol (5 équivalents) et de l'acide trifluor acétique (7 ml/mmol). Le mélange réactionnel est porté à reflux sous argon 16 h. Le solvant est éliminé sous pression réduite. Le résidu est suspendu dans 5 ml/mmol de cyclohexane qui est ensuite éliminé sous pression réduite. Cette opération est répétée deux fois afin d'éliminer les traces d'acide trifluoroacétique. L'huile obtenue est additionnée d'éther, l'inhibiteur 5 précipite et est séché sous pression réduite après filtration.

On a obtenu de la même manière les composés 5a, 5b, 5c, 5d, 5e, 5f, 5g et 5h qui ont été caractérisés par leur spectre'H RMN dans CDC13 à 400 MHz et par spectroscopie de masse electrospray.

Composé 5a Acide 3-amino-4-mercapto-pentane-1-sulfonique Rdt 75%. RMN 1H (DMSO-D6) : 1,2 (d, 3H, J = 7 Hz, CH3), 1,8-2, 0 (m, 2H, CH2CH2-SO3), 2,6 (m, 2H, CH2-CH2-SO3), 2,8 (m, 1H,-CH-S), 3,1 (m, 1H, CHN), 7,9 (s, 3H, NH3+). ES+ : 222 M+Na+. ES' : 198 M-H Composé 5b Acide 3-amino-4-mercapto-4-phényl-butane-1-sulfonique Rdt 69%. RMN 1H (DMSO-D6) : 1,8-2, 1 (m, 2H, CH2CH2-SO3), 2,5-2, 7 (m, 3H, CH2-CH2-SO3 ; CHS), 3,6 (m, 1H, CHN), 7,1 (m, 5 H, H aromatique), 7,9 (s, 3H, NH3+), ES+ : 284 M+Na+, ES- : 260 M-H Composé 5c Acide 3-amino-4-mercapto-6-méthyl-heptane-1-sulfonique Rdt 50%. RMN 1H (DMSO-D6) : 0,7 et 0,8 (d, 6H, J = 7 Hz, CH (CH3) 2), 1,35 (m, 2H, CH2-CH (CH3) 2), 1,7-1, 9 (m, 2H, CH2CH2-SO3), 2,0 (m, 1H, CH (CH3) 2), 2,7 (m, 2H, CH2CH2-S03), 3,0 (m, 1H, CHS), 3,3 (m, 1H, CH- N) , 7, 9 (s, 3H, NH3+). ES- : 240 M-H

Composé 5d Acide 3-amino-4-mercapto-5-phényl-pentane-1-sulfonique Rdt 82%. RMN 1H (DMSO-D6) : 1,9-2, 1 (m, 2H, CH2CH2-SO3), 2,6-2, 7 (m, 4H, CH2-CH-S, CH2CH2-SO3), 2,9-3, 1 (m, 1H, CHS), 3,4 (m, 1H, CH-N), 7,1 (m, 5 H, H aromatique), 7,9 (s, 3H, NH3+). ES+ : 298 M+Na+. ES- : 274 M-H Composé 5e Acide 3-amino-4-mercapto-6-phényl-hexane-1-sulfonique Rdt 55%. RMN 1H (DMSO-D6) : 1,6 (m, 1H, CH2-CH-S), 1,7-2, 0 (m, 3H, CH2-CH2-CH-S, CH2CH2-SO3), 2,6-2, 7 (m, 3H, CH2-CH-S, CH2CH2- S03), 2,8 (m, 1H, CH2-CH-S), 2, 9 (m, 1H, CHS), 3,4 (m, 1H, CH-N), 7,1 (m, 5 H, H aromatique), 7,9 (s, 3H, NH3+), ES- : 288 M-H Composé 5f Acide 3-amino-4-mercapto-6- (4-méthoxy-phényl)-hexane-1-sulfonique Rdt 51%. RMN'H (DMSO-D6) : 1,6 (m, 1H, CH2-CH-S), 1,7-2, 0 (m, 3H, CH2-CH2-CH-S, CH2CH2-SO3), 2,6-2, 8 (m, 4H, CH2-CH-S, CH2CH2- S03), 2,9 (m, 1 H, CHS), 3,4 (m, 1 H, CH-N), 3,5-3, 8 (m, 3H, OCH3), 6,7 (m, 2 H, H aromatique), 7,0 (m, 2H, H aromatique), 7,9 (s, 3H, NH3+). ES+ : 342 M+Na+.

Composé 5ÇF Acide 3-ami (2-méthoxy-phényl)-hexane-1-sulfonique Rdt 80%. RMN 1H (DMSO-D6) : 1,3-1, 6 (m, 2H, CH2-CHS), 1,7-2, 1 (m, 2H, CH2CH2-SO3), 2,5-2, 8 (m, 4H, CH2-CH-S, CH2CH2-SO3), 2,9 (m, 1H, CHS), 3,4 (m, 1 H, CH-N), 3,5-3, 8 (m, 3H, OCH3), 6,6-7, 3 (m, 4 H, H aromatique), 7,8 (s, 3H, NH3+). ES+ : 342 M+Na+.

Composé 5h Acide 3-amino-4-mercapto-6-(4-bromo-phényl)-hexane-1-sulfonique Rdt 85%. RMN 1H (DMSO-D6) : 1, 6 (m, 1H, CH2-CH-S), 1,8-2, 0 (m, 3H, CH2-CH2-CHS, CH2CH2-SO3), 2,6 (m, 3H , CH2-CH-S, CH2CH2-SO3),

2,8 (m, 1H, CH2-CH-S), 2,9 (m, 1H, CHS), 3,4-3, 5 (m, 1H, CH-N), 7,1 (m, 2 H, H aromatique), 7,4 (m, 2H, H aromatique), 7,9 (s, 3H, NH3+). ES+ : 390-392 M+Na+.

Préparation 6 : synthèse du composé 6 (2E)-5-phényl-pent-2-ènoate d'éthyle A 32,6 ml (164 mmol, 1,1 équivalent) de triéthylphosphonoacétate dans 150 ml de dichlorométhane anhydre, on ajoute sous argon à 0°C goutte à goutte 24,7 ml (164 mmol, 1,1 équivalent) de diazabicycloundécène (DBU). Le mélange est agité 30 min. Après retour à 25°C, on additionne 19, 6 ml (149 mmol, 1 équivalent.) d'hydrocynamaldhéhyde. Après 16 h de réaction on additionne au milieu réactionnel 150 ml HCI 1 N. La phase organique est séparée, lavée avec 2 x 50 ml HCI 1N, puis 2 x 50 mi NaHCO3 10%. La phase organique est séchée sur Na2SO4, concentrée sous pression réduite. Le produit est purifié par filtration sur silice. On obtient une huile incolore.

Rdt 67%. RMN 1H (CDCI3) : 1,3 (t, 3H, J = 7 Hz, CH3-CH2), 2,5 (q, 2H, J = 7 Hz, Ph-CH2-CH2), 2,8 (t, 2H, , J = 7 Hz, Ph-CH2-CH2), 4,2 (q, 2H, J = 7 Hz, CH3-CH2), 5, 85 (d, 1H, J = 12 Hz, CH=CH-CO), 7,0 (td, 1H, J = 7 Hz, J = 12 Hz, CH=CH-CO), 7,2 (m, 3 H, H aromatique), 7,3 (m, 2H, H aromatique).

Préparation 7 : synthèse des composés 7 a-b A une solution de 50 g (1, 4 g/mmol) d'AD-mix et de 0, 36 g (3,7 mmol, 0,01 g/mmol) dans un mélange de 160 ml (4, 5 ml/mmol) d'alcool tertiobutylique et de 160 ml (4, 5 ml/mmol) d'eau, on ajoute à 25°C 7,3g (35,7 mmol, 1 équivalent) de (2Z)-5-phényl-pent-2-ènoate d'éthyle. Après 5 h de réaction, on additionne 45 g (357 mmol, 1, 3 g/mmol, 10 équivalents) de sulfite de sodium, le mélange est agité 30 min. Après dilution du milieu réactionnel par 150 ml d'acétate d'éthyle, la phase organique est séparée, séchée sur Na2SO4 puis concentrée sous pression réduite. Le produit est purifié par filtration sur silice. On obtient une huile incolore.

Les composés 7a et 7b ont été caractérisés par chromatographie sur couche mince (CCM) sur un support de silice avec un éluant cyclohexane :

acétate d'éthyle, par leur spectre 1H RMN dans CDC13 à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé 7a (2R, 3S)-2, 3-dihydroxy-5-phényl-pentanoate d'éthyle Rdt : 70%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 60 : 40) : Rf=0, 28. [a] 20D = = -29,8° (c = 1, MeOH). HPLC (50% B) : Rt=5, 5 min.

RMN 1H (CDCI3) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,95 (m, 3H, OH, CH2 C-OH), 2,74 (m, 1H, CH2Phe), 2,85 (m, 1H, CH2Phe), 3,08 (d, 1 H, OH), 3,93 (m, 1 H, CHCH2), 4,2 (d, 1H, CHCOOEt), 4,3 (q, 2H, COOCH2CH3), 7,15-7, 35 (m, 5H, Ph).

Composé 7b (2S, 3R)-2, 3-dihydroxy-5-phényl-pentanoate d'éthyle Rdt : 72%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 70 : 30) : Rf= 0,17. [a] 20D==+28, 7° (c=1, 1, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 3,6 min. 1H NMR (CDC13) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,95 (m, 2H, CH2 C-OH), 2,75 (m, 1H, CH2Phe), 2,85 (m, 1H, CH2Phe), 3,93 (m, 1H, CHCH2), 4,1 (d, 1H, CHCOOEt), 4,3 (q, 2H, COOCH2CH3), 7,15-7, 35 (m, 5H, Ph).

Préparation 8 : synthèse des sulfates cycliques 8 a-b A une solution de 6,9 g (29 mmol, 1 équivalent) de composé 7 et de 8 ml (58 mmol, 2 équivalents) de triéthylamine dans 60 ml (2 ml/mmol) de dichlorométhane anhydre on additionne à 0°C au goutte à goutte 2,1 ml (29 mmol, 1 équivalent) de chlorure de thionyle en 10 min. Le mélange est agité 5 min, dilué par 40 ml d'éther et lavé avec 30 ml d'eau. Le solvant est éliminé sous pression réduite et le résidu est suspendu dans un mélange de 180 ml d'eau, 80 ml de chloroforme et de 80 ml de tétrachlorure de carbone puis additionné de 9,6 g (45 mmol 1,5 équivalents) de périodate de sodium et d'une quantité catalytique de RuCl3. Après 1 h d'agitation à 25°C, le mélange est dilué par 150 ml d'éther, filtré sur Cellite#. La phase organique est lavée avec 40 mi NaHCO3 10%, séchée sur N'a2SO, puis concentrée sous pression réduite. Le

produit est purifié par filtration sur silice. On obtient une huile incolore.

Les composés 8a et 8b ont été caractérisés par CCM sur un support de silice avec un éluant cyclohexane : acétate d'éthyle, par leur spectre 1H RMN dans CDCl3 à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé 8a : Rdt : 78%. TLC (cyclohexane : acétate d'éthyle, 60 : 40) : Rf=0, 4.

[a] 20D == -75,66° (c = 1, MeOH). HPLC (70% B) : Rt=7, 2 min. RMN 1H (CDC13) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 2,3 (m, 2H, CH2 C-OH), 2,76 (m, 1H, CH2Phe), 2,89 (m, 1H, CH2Phe), 4,3 (q, 2H, COOCH2CH3), 4,87 (d, 1 H, CHCOOEt), 4,9 (m, 1 H, CHCH2), 7,2-7, 4 (m, 5H, Ph).

Composé 8b : Rdt : 70%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 60 : 40) : Rf=0, 4. [a] 20D == +78,3° (c = 1, 1, MeOH). HPLC (70% B) : Rt=7, 24min.'H NMR (CDC13) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 2,3 (m, 2H, CH2 C-OH), 2,8 (m, 1H, CH2Phe), 2,95 (m, 1H, CH2Phe), 4,3 (q, 2H, COOCH2CH3), 4,87 (d, 1 H, CHCOOEt), 4,9 (m, 1 H, CHCH2), 7,15-7, 4 (m, 5H, Ph).

Préparation 9 : synthèse des composés 9 a-b A une solution de 3, 3 g (11 mmol, 1 équivalent) du composé 8 dans 110 ml (10 ml/mmol) de THF anhydre, on ajoute 3, 8 g (44 mmol, 4 équivalents) de bromure de lithium. Le mélange est agité à 25°C jusqu'à complète disparition du composé 8. Après concentration sous pression réduite, le résidu est repris par 150 ml d'éther et 20 ml d'eau, puis additionné de 0,1 mi H2SO4 20%. La solution est agitée 24 h à 4°C. La phase organique est séparée, lavée avec 3 x 20 ml NaHCO3 10%, séchée sur Na2SO4 puis concentrée sous pression réduite. Le produit est purifié par filtration sur silice. On obtient une huile incolore.

Les composés 9a et 9b ont été caractérisés par CCM sur un support de silice avec un éluant cyclohexane : acétate d'éthyle, par leur spectre H RMN dans CDCis à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé 9a (2S, 3S)-2-bromo-3-hydroxy-5-phényl-pentanoate d'éthyle Rdt : 85%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 60 : 40) : Rf= 0, 5.

[a] D20 = -37,35° (c = 1, 004, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 6, 6 min. RMN 1H (CDC13) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,83 (m, 1H, CH2C-OH), 2,17 (m, 1H, CH2 C-OH), 2,75 (m, 2H, OH, CH2Phe), 2,9 (m, 1 H, CH2Phe), 4,03 (m, 1 H, CHCH2), 4,15 (d, 1H, CHCOOEt), 4,27 (q, 2H, COOCH2CH3), 7,2-7, 35 (m, 5H, Ph).

Composé 9b (2R, 3R)-2-bromo-3-hydroxy-5-phényl-pentanoate d'éthyle Rdt : 91%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 60 : 40) : Rf = 0, 5.

[α]D20 = +35,8° (c = 1, 85, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 6, 6 min. RMN 1H (CDC13) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,83 (m, 1H, H, CH2 C-OH), 2,17 (m, 1 H, CH2 C-OH), 2,75 (m, 2H, OH, CH2Phe), 2,9 (m, 1 H, CH2Phe), 4,03 (m, 1 H, CHCH2), 4,15 (d, 1H, CHCOOEt), 4,27 (q, 2H, COOCH2CH3), 7,2-7, 35 (m, 5H, Ph).

Préparation 10 : synthèse des composés 10a-d 1) A une solution de 1, 2 g (4 mmol, 1 équivalent) du composé 8 dans 24 ml (6 ml/mmol) d'acétone et 2, 5 ml (0,6 ml/mmol) d'eau, on ajoute 0,32 g (5 mmol, 1,25 équivalent) d'azoture de sodium. Le mélange est agité à 25°C jusqu'à complète disparition du composé 8. Après concentration sous pression réduite, le résidu est repris par 50 ml d'éther et 5 ml d'eau, puis additionné de 1 ml H2SO4 20%. La solution est agitée 24 h à 4°C. La phase organique est séparée, lavée avec 3 x 20 ml NaHC03 10%, séchée sur Na2SO4 puis concentrée sous pression réduite. Le produit est purifié par filtration sur silice. On obtient une huile incolore.

Les composés 10a, 10b, 10c et 10d ont été caractérisés par CCM sur un support de silice avec un éluant cyclohexane : acétate d'éthyle, par leur spectre H RMN dans CDCig à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé 10a (2S, 3S)-2-Azido-3-hydroxy-5-phényl-pentanoate d'éthyle Rdt : 84%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 60 : 40) : Rf= 0,55. [α]D20 = -28,7° (c = 1, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 5,65 min. RMN 1H (CDC13) : 1,3 (3H, t, COOCH2CH3), 1,9 (2H, m, CH2 C-OH), 2,37 (1H, d, OH), 2,7 (1H, m, CH2Phe), 2,9 (1H, m, CH2Phe), 3,95 (1H, m, CHCH2), 3,97 (1H, d, CHCOOEt), 4,3 (2H, q, COOCH2CH3), 7,2-7, 35 (5H, m, Ph).

Composé 10c (2R, 3S)-2-Azido-3-hydroxy-5-phényl-pentanoate d'éthyle Rdt : 86%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 60 : 40) : Rf=0, 58. [α]D20 = +15° (c = 1,082, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 5,72 min. RMN 1H (CDC13) : 1,35 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,86 (m, 1H, CH2 C-OH), 1,96 (m, 1H, CH2 C-OH), 2,15 (d, 1H, OH), 2,70 (m, 1H, CH2Phe), 2,85 (m, 1H, CH2Phe), 3,9 (d, 1H, CHCOOEt), 4,07 (m, 1H, CHCH2), 4,3 (q, 2H, COOCH2CH3), 7,15-7, 35 (m, 5H, Ph).

2) A 2,6 g (8,6 mmol, 1 équivalent) du composé 9 dans 9 ml (1 ml/mmol) de diméthylsulfoxyde anhydre, on additionne 1, 12 g (17,2 mmol, 2 équivalents) d'azoture de sodium. Le milieu réactionnel est agité à 25°C une nuit, puis dilué par 90 ml d'un mélange de cyclohexane et dichlorométhane 2 : 1. La phase organique est lavée avec 3 x 10 ml H2O, 1 x 10 ml d'une solution saturée de NaCI et séchée sur Na2SO4 puis concentrée sous pression réduite. Le produit est purifié par filtration sur silice. On obtient une huile incolore.

Composé 10b (2R, 3R)-2-Azido-3-hydroxy-5-phényl-pentanoate d'éthyle Rdt : 84%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 70 : 30) : Rf=0, 38. [α]D20 = +28,5° (c = 1, MeOH). HPLC (70% B) : Rt=5, 63 min.. RMN H (CDOs) : t3 (3H, t, COOCH2CH3), 1,9 (2H, m, CH2C-OH), 2,37 (1H, d, OH),

2,7 (1H, m, CH2Phe), 2,9 (1H, m, CH2Phe), 3,95 (1H, m, CHCH2), 3,97 (1H, d, CHCOOEt), 4,3 (2H, q, COOCH2CH3), 7,2-7, 35 (5H, m, Ph).

Composé 10d (2S, 3R)-2-Azido-3-hydroxy-5-phényl-pentanoate d'éthyle Rdt : 69%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 60 : 40) : Rf = 0, 58. [α]D20 = -11,7° (c = 0, 95, MeOH). HPLC (70% B) : Rut = 5, 76 min.

RMN 1H (CDCl3) : 1,35 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,86 (m, 1H, CH2C-OH), 1,96 (m, 1H, H, CH2 C-OH), 2,15 (d, 1H, OH), 2,70 (m, 1H, CH2Phe), 2,85 (m, 1 H, CH2Phe), 3,9 (d, 1H, CHCOOEt), 4,07 (m, 1H, CHCH2), 4,3 (q, 2H, COOCH2CH3), 7,15- 7,35 (m, 5H, Ph).

Préparation 11 : synthèse des composés 11a-d A 1,5 g (5, 7 mmol, 1 équivalent) du composé 10, dans 23 ml (4 ml/mmol) d'acétonitrile, on ajoute 1, 49 g (5,7 mmol, 1 équivalent) de triphénylphosphine. Le mélange est agité une heure à 25°C puis porté à reflux cinq heures. Après concentration du milieu réactionnel sous pression réduite, l'huile est purifiée par filtration sur silice. On obtient une huile incolore.

Les composés 11 a, 11 b, 11 c et 11 d ont été caractérisés par CCM sur un support de silice avec un éluant cyclohexane : acétate d'éthyle, par leur spectre 1H RMN dans CDCl3 à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé Composé 11a (2S, 3R)-3-Phénéthyl-aziridine-2-carboxylate d'éthyle Rdt : 84%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 60 : 40) : Rf = 0, 26. [a] 20D = +70° (c = 1,024, MeOH). HPLC (40% B) : Rt = 4,84 min. RMN 1H (CDC13) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,8 (m, 2H, CH2 C-NH), 2,3 (m, 1H, CHCH2), 2,33 (s, 1 H, CHCOOEt), 2,8 (m, 2H, CH2PhE), 4,2 (q, 2H, COOCH2CH3), 7,2-7, 35 (m, 5H, Ph).

Composé 11b

(2R, 3R)-3-Phénéthyl-aziridine-2-carboxylate d'éthyle Rdt : 68%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 50 : 50) : Rf=0, 31. [a] D20 = -14,38° (c = 1, 05, MeOH). HPLC (40% B) : Rt=4, 15 min. RMN 1H (CDCI3) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,85 (m, 1H, CH2 C-NH), 1,97 (m, 1H, CH2 C-NH), 2,27 (m, 1H, CHCH2), 2,63 (d, 1H, CHCOOEt), 2,68-2, 85 (m, 2H, CH2Phe), 4,18 (2q, 2H, COOCH2CH3), 7,1-7, 25 (m, 3H, Ph), 7,25-7, 35 (m, 2H, Ph).

Composé Composé 11c (2R, 3S)-3-Phénéthyl-aziridine-2-carboxylate d'éthyle : Rdt : 72%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 70 : 30) : Ru= 0, 2.

[af°D=-67, 38° (c=1, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 2, 73 min. RMN 1H (CDC13) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,8 (m, 2H, CH2 C-NH), 2,3 (m, 1H, CHCH2), 2,33 (s, 1H, CHCOOEt), 2,8 (m, 2H, CH2Phe), 4,2 (q, 2H, COOCH2CH3), 7,2- 7,35 (m, 5H, Ph).

Composé 11d (2S, 3S)-3-Phénéthyl-aziridine-2-carboxylate d'éthyle Rdt : 50%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 50 : 50) : Rf=0,31. [α]D20 = +12, 83 (c = 1, MeOH). HPLC (40% B) : Rt = 4, 07 min. RMN 1H (CDCI3) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,85 (m, 1H, CH2 C-NH), 1,97 (m, 1H, CH2C-NH), 2,27 (m, 1 H, CHCH2), 2,63 (d, 1H, CHCOOEt), 2,68-2, 85 (m, 2H, CH2Phe), 4,18 (2q, 2H, COOCH2CH3), 7,1-7, 25 (m, 3H, Ph), 7,25-7, 35 (m, 2H, Ph).

Préparation 12 : synthèse des composés 12 a-d A 0, 5 g (2, 3 mmol, 1 équivalent) du composé 11, dans 9 ml (4 !/mmo !) de pyridine, on ajoute 1, 14 g (4, 6 mmol, 2 équivalent) de benzyloxycarbonyl'succinimide et 0, 03 g (0, 24 mmol, 0,1 équivalent) de 4-diméthylaminopyridine. Le mélange est agité 24 h à 4°C. Après concentration du mi ! ieu réactionne ! sous pression réduite, l'huile est purifiée par filtration sur silice. On obtient une huile incolore.

Les composés 12a, 12b, 12c et 12d ont été caractérisés par CCM sur un support de silice avec un éluant cyclohexane : acétate d'éthyle, par leur spectre 1H RMN dans CDCl3 à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé 12a (2S, 3R)-N-benzyloxycarbonyl-3-Phénéthyl-aziridine-2-carboxylat e d'éthyle Rdt : 93%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 70 : 30) : Rf = 0, 47. [a] 20D = +30, 2° (c = 1,026, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 13, 7 min.

RMN 1H (CDCI3) : 1,25 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,87 (m, 2H, CH2 C-NH), 2,7-2, 9 (m, 4H, CH2Phe, CHCH2, CHCOOEt), 4,15 (q, 2H, COOCH2CH3), 5,15 (2d, 2H, OCH2Phe), 7,15-7, 3 (m, 5H, Ph), 7,3-7, 4 (m, 5H, Ph).

Composé 12b (2R, 3R)-N-benzyloxycarbonyl-3-Phénéthyl-aziridine-2-carboxylat e d'éthyle Rdt : 91 %. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf=0, 27. [α]D20 = +42,49° (c = 1,024, MeOH). HPLC (80% B) : Rt = 6, 6 min.

RMN 1H (CDCI3) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,9-2 (m, 2H, CH2 C-NH), 2,75 (m, 2H, CH2Phe, 2,85 (m, 1 H, CHCH2), 3,2 (d, 1 H, CHCOOEt), 4,2 (q, 2H, COOCH2CH3), 5,15 (m, 2H, OCH2Phe), 7,1-7, 3 (m, 5H, Ph), 7,3-7, 4 (m, 5H, Ph).

Composé 12c (2R, 3S)-N-benzyloxycarbonyl-3-Phénéthyl-aziridine-2-carboxylat e d'éthyle Rdt : 90%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 70 : 30) : Rf = 0, 47. [α]D20 = -28,6° (c = 1, 05, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 13,84 min.

RMN 1H (CDCI3) : 1,25 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,87 (m, 2H, CH2 C-NH), 2,7-2, 9 (m, 4H, CH2Phe, CHCH2, CHCOOEt), 4,15 (q, 2H, COOCH2CH3), 5,15 (2d, 2H, OCH2Phe), 7,15-7, 3 (m, 5H, Ph), 7,3-7, 4 (m, 5H, Ph).

Composé 12d (2S,3S)-N-benzyloxycarbonyl-3-Phénéthyl-aziridine-2-carbox ylate d'éthyle Rdt : 81%. CCM (cyclohexane : acétate déthyle, 70 : 30) :

Ru=0, 49. [α]D20 = -39,58° (c = 0, 53, MeOH). HPLC (70% B) : Rt=11, 43 min.

RMN'H (CDC13) : 1,3 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,9-2 (m, 2H, CH2 C-NH), 2,75 (m, 2H, CH2Phe, 2,85 (m, 1 H, CHCH2), 3,2 (d, 1 H, CHCOOEt), 4,2 (q, 2H, COOCH2CH3), 5,15 (m, 2H, OCH2Phe), 7,1-7, 3 (m, 5H, Ph), 7,3-7, 4 (m, 5H, Ph).

Préparation 13 : synthèse des composés 2e14 A une solution refroidie à 0°C de 0,65 g (1,8 mmol, 1 équivalent) du composé 12, dans 11 ml (6 ml/mmol) de dichlorométhane anhydre, on ajoute successivement 1, 0 g, 1 ml (6,4 mmol, 3,6 équivalents) de 4-méthoxybenzylmercaptan puis au goutte à goutte 0,7 ml (5,5 mmol, 3 équivalents) de BF3 éthérate. Le mélange est agité 24 h à 4°C. Après addition de 18 ml de NaHCO3 10% (10 ml/mmol) et de 18 ml de dichlorométhane, la phase organique est séparée, séchée sur Na2SO4 et concentrée sous pression réduite. L'huile obtenue est purifiée par filtration sur silice. On obtient une huile incolore.

Les composés 2e1-4 ont été caractérisés par CCM sur un support de silice avec un éluant cyclohexane : acétate d'éthyle, par leur spectre'H RMN dans CDC13 à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé 2e, (2S, 3R)-2-Benzyloxycarbonylaminoi-3-(4-méthoxy-benzylsulfanyl)- 5- phényl-pentanoate d'éthyle Rdt : 38%. CCM (n-heptane : acétate d'éthyle, 75 : 25) : Rf=0, 25.

[a] D20 = -96,1° (c = 0, 282, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 23 min . RMN 1H (CDC13) : 1,15 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,75 (m, 1H, CH2CHS), 1,8 (m, 1 H, CH2CHS), 2,55 (m, 1H, CHS), 2,76 (m, 1H, CH2Phe), 2,83 (m, 1H, CH2Phe), 3,7 (2d, 2H, SCH2), 3,8 (s, 3H, OCH3), 3,96-4, 17 (m, 2H, COOCH2CH3), 4,65 (dd, 1H, CHCOOEt), 5,13 (m, 2H, OCH2Phe), 5,43 (d, 1H, NH), 6,83 (d, 2H, Ar), 6,96 (d, 2H, Ar), 7,1-7, 25 (m, 5H, Ph) 7, 3-7,4 (m, 5H, Ph).

Composé 2e2

(2S, 3S)-2-Benzyloxycarbonylamino-3- (4-méthyl-benzylsulfanyl)-5-phényl- pentanoate d'éthyle Rdt : 79%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 70 : 30) : Rf=0, 36. [a] 20D =-19° (c = 1,004, MeOH). HPLC (80% B) : Rt = 11,8 min. RMN 1H (CDC13) : 1,25 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,77 (m, 1H, CH2CHS), 1,93 (m, 1H, CH2CHS), 2,6-2, 77 (m, 2H, CH2Phe), 3,1 (m, 1H, CHS), 3,57 (s, 2H, SCH2), 3,8 (s, 3H, OCH3), 4,07-4, 23 (2m, 2H, COOCH2CH3), 4,7 (d, 1H, CHCOOEt), 5,13 (s, 2H, OCH2Phe), 5,55 (d, 1H, NH), 6,8 (d, 2H, Ar), 7,1 (d, 2H, Ar), 7,15- 7,4 (m, 10H, Ph).

Composé 2e3 (2R, 3S)-2-Benzyloxycarbonylamino-3-(4-méthyl-benzylsulfanyl)-5- phényl- pentanoate d'éthyle Rdt : 43%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf=0, 24. [α]D20 = +96, 0° (c = 0,3, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 23 min. RMN 1H (CDC13) : 1, 15 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,75 (m, 1H, CH2CHS), 1,8 (m, 1H, CH2CHS), 2,55 (m, 1H, CHS), 2,76 (m, 1H, CH2Phe), 2,83 (m, 1H, CH2Phe), 3,7 (2d, 2H, SCH2), 3,8 (s, 3H, OCH3), 3,96-4, 17 (m, 2H, COOCH2CH3), 4,65 (dd, 1H, CHCOOEt), 5,13 (m, 2H, OCH2Phe), 5,43 (d, 1H, NH), 6,83 (d, 2H, Ar), 6,96 (d, 2H, Ar), 7,1-7, 25 (m, 5H, Ph) 7,3-7, 4 (m, 5H, Ph).

Composé 2e4 (2R, 3R)-2-Benzyloxycarbonylamino-3- (4-méthyl-benzylsulfanyl)-5-phényl- pentanoate d'éthyle Rdt : 64%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 70 : 30) : Rf=0, 36. [a] 20D = +20, 2° (c = 0,5, MeOH). HPLC (70% B) : Rt = 25,81 min. RMN 'H (CDC13) : 1,25 (t, 3H, COOCH2CH3), 1,77 (m, 1H, CH2CHS), 1,93 (m, 1H, CH2CHS), 2,6-2, 77 (m, 2H, CH2Phe), 3,1 (m, 1H, CHS), 3,57 (s, 2H, SCH2), 3,8 (s, 3H, OCH3), 4,07-4, 23 (2m, 2H, COOCH2CH3), 4,7 (dí, 1H, CHCOOEt), 5,13 (s, 2H, OCH2Phe), 5,55 (d, 1H, NH), 6,8 (d, 2H, Ar), 7, 1 (d, 2H, Ar), 7,15- 7,4 (m, 10H, Ph).

Préparation 14 : synthèses des composés 3es A une solution de diéthoxyphosphorylméthanesuifonate de néopentyl (2,0 équivalents) dans du THF anhydre (4,5 ml/mmol) on ajoute goutte à goutte à-78°C, une solution de n-butyllithium 1,6 M dans l'hexane (2 équivalents). Après 30 min. sous agitation, on ajoute une solution du composé 2 (1 équivalent) dans du THF anhydre (1 ml/mmol) suivi de l'introduction goutte à goutte d'une solution d'hydrure de diisobutylaluminium 1,6 M dans le toluène (2 équivalents). Le mélange réactionnel est maintenu à-78°C 4h, on laisse ensuite revenir à température ambiante une nuit. Les solvants sont éliminés sous pression réduite, le résidu est additionné de 10 ml/mmol d'éther et de 5 ml/mmol d'HCI 2N. Le mélange est agité 30 min, la phase organique est séparée, la phase aqueuse est extraite deux fois avec un volume d'éther équivalent. Les phases organiques sont réunies, séchées sur Na2SO4 et concentrées sous pression réduite. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur silice. Après élimination des solvants le produit 3 est obtenu sous forme d'une huile.

Les composés 3e14 ont été caractérisés par CCM sur un support de silice avec un éluant cyclohexane : acétate d'éthyle, par leur spectre 1H RMN dans CDCts à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé 3e, (3R, 4S)-3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- phényl-hex-1-ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt : 27%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf=0, 17. [a] 20D =-39, 2° (c = 1, 1, MeOH). HPLC (80% B) : Rt = 15,33 min. RMN H (CDC13) : 0,95 (s, 9H, 3x CH3), 1,8 (m, 1H, CH2CHS), 1,93 (m, 1H, CH2CHS), 2,65 (m, 2H, CH2Phe), 2,83 (m, 1H, CHS), 3,6-3, 7 (m, 2H, S03CH2), 3,7 (s, 2H, SCH2), 3,75 (s, 3H, OCH3), 4,63 (m, 1H, CHNH), 5,07 (m, 3H, OCH2Phe, NH), 6, 3 (d, 1H, C=CHS03), 6,75 (dd, 1H, CH=CS03), 6,8 (d, 2H, Ar), 7,07 (d, 2H, Ar), 7,1-7, 5 (m, 10H, Ph).

Composé 3e2

(3S, 4S)-3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- phényl-hex-1-ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt : 54%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf= 0, 37. [α]D20 = -56,5° (c = 1, 01, MeOH). HPLC (80% B) : Rt = 16,37 min. RMN 1H (CDCl3) : 0,95 (s, 9H, 3x CH3), 1,7-1, 9 (m, 2H, CH2CHS), 2,5-2, 8 (m, 3H, CH2Phe, CHS), 3,63 (s, 2H, SO3CH2), 3,7-3, 85 (2d, 2H, SCH2, s, 3H, OCH3), 4,75 (m, 1H, CHNH), 5,1 (m, 2H, OCH2Phe), 5,2 (d, 1H, NH), 6,35 (d, 1H, C=CHSO3), 6,75-6, 9 (m, 3H, CH=CS03, Ar), 7 (d, 2H, Ar), 7,15-7, 4 (m, 10H, Ph).

Composé 3e3 (3S, 4R)-3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- phényl-hex-1-ène-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt : 20%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf=0, 17 [a] D20 = + 38,5° (c = 1, 0, MeOH). HPLC (80% B) : Rt = 15,33 min. RMN 1H (CDC13) : 0,95 (s, 9H, 3x CH3), 1,8 (m, 1H, CH2CHS), 1,93 (m, 1H, CH2CHS), 2,65 (m, 2H, CH2Phe), 2,83 (m, 1H, CHS), 3,6-3, 7 (m, 2H, SO3CH2), 3,7 (s, 2H, SCH2), 3,75 (s, 3H, OCH3), 4,63 (m, 1H, CHNH), 5,07 (m, 3H, OCH2Phe, NH), 6,3 (d, 1H, C=CHSO3), 6,75 (dd, 1H, CH=CS03), 6,8 (d, 2H, Ar), 7,07 (d, 2H, Ar), 7,1-7, 5 (m, 10H, Ph).

Composé 3e4 (3R, 4R)-3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- phényl-hex-1-ène-1-suifonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt : 35%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf = 0, 37. [a] D20 = +55,4° (c = 0, 95, MeOH). HPLC (80% B) : Rt = 16,37 min.

RMN 1H (CDCI3) : 0,95 (s, 9H, 3x CH3), 1,7-1, 9 (m, 2H, CH2CHS), 2,5-2, 8 (m, 3H, CH2Phe, CHS), 3,63 (s, 2H, SO3CH2), 3,7-3, 85 (2d, 2H, SCH2, s, 3H, OCH3), 4,75 (m, 1H, CHNH), 5,1 (m, 2H, OCH2Phe), 5,2 (d, 1H, NH), 6,35 (d, 1H, C=CHS03), 6,75-6, 9 (m, 3H, CH=CS03, Ar), 7 (d, 2H, Ar), 7,15-7, 4 (m" 10H, Ph).

Préparation 15 : synthèse des composés 4e14 A une solution d'un composé 3 (1 équivalent) dans de l'éthanol absolu (5 ml/mmol) on ajoute du borohydrure de sodium (1 équivalent). Le mélange réactionnel est agité à 25°C une nuit. Les solvants sont éliminés sous pression réduite, le résidu est additionné de 10 ml/mmol d'acétate d'éthyle et de 5 ml/mmol d'eau. La phase organique est séparée, la phase aqueuse est extraite deux fois avec un volume d'acétate d'éthyle équivalent. Les phases organiques sont réunies, séchées sur Na2SO4 et concentrées sous pression réduite. L'huile obtenue est purifiée par HPLC semi-préparative. Après élimination des solvants le produit 16 est obtenu sous forme d'une huile.

Les composés 4e14 ont été caractérisés par CCM sur un support de silice avec un éluant cyclohexane : acétate d'éthyle, par leur spectre 1H RMN dans CDC13 à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé Composé 4e1 (3R, 4S)-3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- phényl-hexane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle : Rdt : 60%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf=0, 15. [a] D20 = -33,7° (c = 0, 4, MeOH). HPLC (80% B) : Rt = 14, 37 min. RMN H (CDCI3) : 0,97 (s, 9H, 3x CH3), 1,8 (m, 1H, CH2CHS), 1,9 (m, 1H, CH2CHS) ), 1,9-2, 05 (m, 2H, CH2C-NH), 2,6 (m, 2H, CH2Phe), 2,8 (m, 1H, CHS), 3,07 (m, 2H, CH2SO3), 3,63 (m, 2H, SOsCHs), 3,75 (s, 3H, OCH3), 3,83 (s, 2H, SCH2), 3,93 (m, 1H, CHNH), 4,97 (d, 1H, NH), 5,05 (m, 2H, OCH2Phe), 6,8 (d, 2H, Ar), 7,07 (d, 2H, Ar), 7,1-7, 4 (m, 10H, Ph).

Composé 4e2 (3S, 4S)-3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- phényl-hexane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt : 63%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf=0, 12. [a] 20D = -36,4° (c = 0, 936, MeOH). HPLC (80% B) : Ru = 15, 2 min. RMN 1H (CDCl3) : 1 (s, 9H, 3x CH3), 1, 75 (m, 1H, CH2CHS), 1, 8-2, 1 (m, 3H !, CH2CHS, CH2C-NH), 2, 5 (m, 1H, CHS), 2, 6 (m, 1H, CH2Phe), 2,73 (m, 1H,

CH2Phe), 3 (m, 2H, CH2SO3), 3,67 (m, 2H, SO3CH2), 3,8 (s, 3H, OCH3), 3,83 (s, 2H, SCH2), 3,97 (m, 1H, CHNH), 4,9 (d, 1H, NH), 5,1 (m, 2H, OCH2Phe), 6,83 (d, 2H, Ar), 7,05 (d, 2H, Ar), 7,1-7, 4 (m, 10H, Ph).

Composé 4e3 (3S, 4R)-3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- phényl-hexane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt : 83%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf=0,15. [a] D20 = +31,7° (c = 0,4, MeOH). HPLC (80% B) : Rt = 14,25 min. RMN 1H (CDCl3) : 0,97 (s, 9H, 3x CH3), 1,8 (m, 1 H, CH2CHS), 1,9 (m, 1H, CH2CHS)), 1,9-2, 05 (m, 2H, CH2C-NH), 2,6 (m, 2H, CH2Phe), 2,8 (m, 1H, CHS), 3,07 (m, 2H, CH2SO3), 3,63 (m, 2H, SO3CH2), 3,75 (s, 3H, OCH3), 3,83 (s, 2H, SCH2), 3,93 (m, 1H, CHNH), 4,97 (d, 1H, NH), 5,05 (m, 2H, OCH2Phe), 6,8 (d, 2H, Ar), 7,07 (d, 2H, Ar), 7,1-7, 4 (m, 10H, Ph).

Composé 4e4 (3S, 4R)-3-Benzyloxycarbonylamino-4- (4-méthoxy-benzylsulfanyl)-6- phényl-hexane-1-sulfonate de 2, 2-diméthylpropyle Rdt : 67%. CCM (cyclohexane : acétate d'éthyle, 80 : 20) : Rf= 0,12. [a] 20d = + 35, 8° (c = 0,8, MeOH). HPLC (80% B) : Rt = 15,0 min. RMN 1H (CDCI3) : 1 (s, 9H, 3x CH3), 1,75 (m, 1H, CH2CHS), 1,8-2, 1 (m, 3H, CH2CHS, CH2C-NH), 2,5 (m, 1H, CHS), 2,6 (m, 1H, CH2Phe), 2,73 (m, 1H, CH2Phe), 3 (m, 2H, CH2SO3), 3,67 (m, 2H, SO3CH2), 3,8 (s, 3H, OCHs), 3,83 (s, 2H, SCH2), 3,97 (m, 1H, CHNH), 4,9 (d, 1H, NH), 5,1 (m, 2H, OCH2Phe), 6,83 (d, 2H, Ar), 7,05 (d, 2H, Ar), 7,1-7, 4 (m, 10H, Ph).

Préparation 16 : synthèse des composés 5e1-4 Au composé 4 (1 équivalent) on ajoute de l'anisol (5 équivalents) et de l'acide trifluoroacétique (7 ml/mmol). Le mélange réactionnel est porté a reflux sous argon 16 heures. Le solvant est éliminé sous pression réduite. Le résidu, est suspendu dans 5 ml/mmol de cyclohexane qui est ensuite éliminé, sous pression réduite. Cette opération est répétée deux fois afin d'éliminer tes

traces d'acide trifluoroacétique (TFA). L'huile obtenue est additionnée d'éther, le composé 5 précipite et est séché sous pression réduite après filtration. Le composé 5 est ensuite purifié par HPLC semi-préparative. Après lyophilisation on obtient un solide incolore.

Les composés 5e1-4 ont été caractérisés par leur spectre 1H RMN dans DMSO-D6 + TFA à 400 MHz et par leur pouvoir rotatoire spécifique.

Composé 5e1 (3R, 4S)-Acide 3-amino-4-mercapto-6-phényl-hexane-1-sulfonique Rdt : 54%. [α]20D = -19, 8 (c = 0,77, H2O). HPLC (gradient 10-90% B en 30 min) : Rt= 12,66 min. ES-MS [M+Na] + 312. RMN 1H (DMSO-D6+TFA) : 1, 65 (m, 1H, CH2CHS), 1,73-2 (m, 3H, CH2CHS, CH2C-NH2), 2,6 (m, 3H, CH2 S03H, CH2Phe) 2,8 (m, 1H, CH2Phe), 2,93 (m, 1H, CHSH), 3,47 (m, 1H, CHNH2), 7,1-7, 3 (m, 5H, Ph), 7,9 (s, 3H, NH3+) Composé 5e2 (3S, 4S)-Acide 3-amino-4-mercapto-6-phényl-hexane-1-sulfonique Rdt : 49%. [a] 20D = -33, 9 (c = 0,44, H20). HPLC (gradient 10-90% B en 30 min) : Rt = 12,68 min. ES-MS [M+Na] + 312. RMN 1H (DMSO-D6+TFA) : 1,65 (m, 1H, CH2CHS), 1,87 (m, 1H, CH2CHS), 1,97 (m, 2H, CH2C-NH2), 2,6 (m, 3H, CH2 S03H, CH2Phe) 2,8 (m, 1 H, CH2Phe), 2,93 (m, 1 H, CHSH), 3,4 (m, 1H, CHNH2), 7-7,3 (m, 5H, Ph), 7,9 (s, 3H, NH3+).

Composé 5e3 (3S, 4R)-Acide 3-amino-4-mercapto-6-phényl-hexane-1-sulfonique Rdt : 40%. [a] 20D = = +22, 4 (c =0,1, Hz0) ° HPLC (gradient 10- 90% B en 30 min) : Rt = 12,63 min. ES-MS [M+Na] + 312,17. RMN'H (DMSO- D6+TFA) : 1,65 (m, 1H, CH2CHS), 1,73-2 (m, 3H, CH2CHS, CH2C-NH2), 2, 6 (m, 3Ht, CH2 SO3Hi, CH2Phe) 2,8 (m, 1H, CH2Phe), 2,93 (m, 1H, CHSH), 3, 47 (m, 1H, CHNH2), 7,1-7, 3 (m, 5H, Ph), 7,9 (s, 3H, NH3+) Composé 5e4

(3R, 4R)-Acide 3-amino-4-mercapto-6-phényl-hexane-1-sulfonique Rdt : 53%. [a] 20D = = +30,5 (c =0,1, H20). HPLC (gradient 10- 90% B en 30 min) : Rt= 12,67 min. ES-MS [M+Na] + 312 14. RMN 1H (DMSO- D6+TFA) : 1,65 (m, 1H, CH2CHS), 1,87 (m, 1H, CH2CHS), 1, 97 (m, 2H, CH2C- NH2), 2,6 (m, 3H, CH2 S03H, CH2Phe) 2,8 (m, 1H, CH2Phe), 2,93 (m, 1H, CHSH), 3,4 (m, 1H, CHNH2), 7-7,3 (m, 5H, Ph), 7,9 (s, 3H, NH3+).

Exemple 1 : Svnthèse du composé 5e dimère Au composé 5e (1 équivalent) en solution dans de l'éthanol (0,1 ml/mmol) on additionne goutte à goutte sous agitation à 25°C une solution aqueuse 0,1 M d'iode jusqu'à persistance de la coloration. Après concentration sous pression réduite, l'huile cristallise en présence d'éther. Le produit est séché sous pression réduite après filtration.

Le composé 5e dimère a été caractérisé par son spectre'H RMN dans DMSO-D6 à 400 MHz et par spectrométrie de masse électrospay.

Composé 5e dimère Acide 4, 4'-dithiobis- (3, 3'-amino-6, 6'-phényl-1-1'-hexane sulfonique) Rdt 85%. RMN 1H (DMSO-D6) : 1,6 (m, 2H, CH2-CH-S), 1,7-2, 0 (m, 6H, CH2-CH2-CH-S, CH2CH2-SO3), 2,6-2, 8 (m, 8H, CH2-CH-S, CH2CH2- SO3, CH2-CH-S), 2,9-3, 2 (m, 2H, CHS), 3,6 (m, 2H, CH-N), 7,1 (m, 10 H, H aromatique), 7,9-8, 1 (m, 6H, NH3+). ES- : 275 M-H+. ES+ : 599 M+Na+ Exemple 2 : détermination des constantes d'inhibition des composés vis- à-vis de l'APA.

Les composés 5 ont été testés in vitro sur l'aminopeptidase A recombinante pour déterminer leur affinité pour l'APA.

Le dosage de l'activité APA est basé sur le protocole de Goldbarg adapté à l'échelle de dosage sur microplaques (Pro Bind O 3915) (Chauvel et all., J. Med. Chem., 1994,37, 1339-1346).

Principe In vitro, en présence d'ions calcium, l'APA hydrolyse l'α-L-glutamyl-ß- napthtylamide (glußNa) en glutamate et ß-naphtylamine (ßNa). Une réaction de diazotation en milieu acide permet de révéler le ß-naphtylamine par formation d'un complexe de couleur violette : une mesure de spectrophotométrie permet alors de connaître la quantité de complexe formé et, par référence à une gamme étalon réalisée avec des concentrations croissantes de ß-naphtylamine, d'en déduire l'activité enzymatique de l'échantillon.

Réactifs Le substrat GlupNa et le ß-naphtylamine (Bachem) sont solubilisés dans le diméthylsulfoxyde et l'HCI 0,1 N respectivement, et conservés à-20 °C à la concentration de 10-2 M. La réaction de diazotation se fait en présence de nitrite de sodium (87 mM), de sulfamate d'ammonium (130 mM) et de dichlorhydrate de N-(1-naphtyl) éthylènediamine (23 mM).

Réaction enzymatique La réaction a lieu à pH 7,4 en tampon Tris-HCI 50 mM, en présence de calcium (CaCl2, 4 mM) ; l'échantillon à doser est incubé à 37 °C en présence de substrat (GlupNa, 200 p. M) et en absence ou en présence de différentes concentrations de l'inhibiteur à tester dans un volume final de 100 ffi La réaction est arrêtée par addition de 10 µl d'HCI 3N. Une gamme étalon de P-naphtylamine en milieu acide (ajouter 10 µl d'HCl 0,1 N) est effectuée en parallèle.

Révélation du produit formé On ajoute dans chaque puits : - 25 il de nitrite de sodium (mélanger, attendre 5 min à température ambiante), - 50 µl de sulfamate d'ammonium (agiter, attendre 5 min à température ambiante), puis -25 pI de dichlorhydrate de N- (1-naphtyl) éthylènediamine 23 mMi (mélanger,, attendre la stabilisation de la couleur violette environ 30 min à 37 °C).

L'absorbance est ensuite mesurée à 540 nm.

Le composé EC 33 (acide (S) 3-amino 4-mercaptobutylsulfonique) décrit dans la demande WO 99/36066), monomère du composé RB 150 (acide 4,4'-dithiobis 3-amino butane-1-sulfonique) décrit dans la demande WO 2004/007441, a servi de composé de référence.

EC 33 RB 150 Les résultats sont rapportés dans les tableaux 1 et 2 ci-après.

Tableau 1 composés EC 33 5a 5b 5c 5d 5e 5f 5g 5h Ki (µM) 0,304 >100 8,00 4,00 0,380 0,08 0,092 0,096 0,110 Les résultats montrent que les composés 5d, 5e, 5f, 5g et 5h qui possèdent une chaîne R2 alkyle en Cl ou C2 substituée par un groupe phényle éventuellement substitué présentent une activité inhibitrice du même ordre ou supérieure à celle du composé de référence.

Tableau 2 composés EC 33 5e1'Se2 5e3 5e4 Ki (µM) 0,304 1,92 0,03 1,04 0,84 Les résultats montrent que le compose 5e2, de configuration (S), (S), présente l'activité inhibitrice de l'APA la plus élevée, supérieure d'un facteur 10 à celle d'u, composé d'e référence.