발명의명칭:신규한유사세라마이드화합물，� �를포함하는약학 조성물및화장료조성물

기술분야

[1] 본발명은천연세라마이드와유사한구조적특성 을가지는신규한유사

세라마이드화합물및이의용도에관한것으로,� �다상세하게는천연

세라마이드 1과유사한구조적인특성을가지는신규한유사� �라마이드화합물 및이회약학조성물및화장료조성물에관한것이 다.

배경기술

[2] 피부각질층 (stratum corneum： SC)은피부장벽기능의가장증요한구조로서 각질세포 (corneocytes)와각질세포간지질 (SC intercellular lipid)로이루어져 있다.각질세포간지질의다중층상구조는수분� �과도한유실을방지하고, 외부의알레르겐이나유해물질이피부로침투하 는것을억제하는역할을한다. 피부각질층의각질세포간에는스핑고지질 (sphingolipids),인지질 (phospholipids), 콜레스테를황산염 (cholesterol sulfate),중성지질 (neutral lipids)등다양한종류의 지질이존재하고，이러한지질들은각질세포사 이에존재하여피부속수분의 증발을방지하고,외부자극이나오염으로부터� �부를보호하는피부장벽의 기능을한다.피부에존재하는지질의한종류인� �라마이드는 N-아실레이티드 스핑고이드 (N-acylated sphingoid)화합물로서세포사멸과관여되는

신호전달물질이다.세포내의세라마이드합성� �세린 (serin)과

팔미토일-코엔자임 A(palmitoyl-CoA)두분자의복잡한생합성경로를통� � 이루어진다.인간피부각질층에는현재까지총 11종의세라마이드가존재하는 것으로보고되어 있으며，특히세라마이드 1이피부장벽기능에가장중요한 역할을한다고보고되어 있다.인간각질층내세라마이드 (Human SC

ceramide)의구조를살펴보면 C16이상의긴사슬지방산 (long chain fatty acid)이 기본구조를이루고있고，특히가장많이존재하 는세라마이드 1형태는 오메가 -하이드록시지방산 (omega-hydroxy fatty acid)과불포화

지방산 (unsaturated fatty acid)의결합으로형성된다.따라서기능성유사

세라마이드합성을위해서는긴사슬오메가 -하이드록시지방산 (long chain omega-hydroxy fatty acid)의원활한공급이필수적이라할수있다.

[3] 현재사용되고있는천연세라마이드는주로동물 의신경조직 (뇌，척수

등)에서추출하여사용하며,광우병 (BSE)등의안전성에대한우려로인하여 화장품원료로서는사용이불가능하다.또한합� �세라마이드는효모를이용한 발효공정과합성공정을거쳐생산되는세라마이 드로현재상업화된합성 세라마이드는세라마이드 3(ceramide III)와세라마이드 4(ceramide IV)가 존재한다.이러한합성세라마이드는 150~200만원 /kg의고가의가격으로인하여 화장품소재로서사용하기에한계를가지고있다 .

[4] 또한상기세라마이드 3(ceramide III)와세라마이드 4(ceramide IV)는피부장벽 형성에있어서기능적인한계를갖고있을뿐만아 니라용해성이매우낮아제형 내석출둥의문제점이있어고농도로사용하는것 이어렵다.

[5] 일반적인보습제에비하여세라마이드계열원료 를포함한생리학적지질 복합물 (physiologic lipid mixture)은손상된피부장벽기능의회복을 진하는 것으로보고된바있으며，특히아토피피부염환 자의증상개선에중간이상의 외용스테로이드제제와유사한효과를나타낸다 는임상시험결과가발표된 바도있다.이러한장점에도불구하고,유사세라� ��이드의경우고가의가격과 낮은용해도로인하여다양한제형에도입하기어 려운단점을지니고있다.

[6] 또한최근피부장벽기능에대한연구가집중되면 서，세라마이드또는유사 세라마이드를이용한피부장벽개선용보습제개 발이활발히이루어지고 있으나，현재까지개발되어진유사세라마이드 는대부분세라마이드 3의구조를 기본으로개발되어졌다 (한국등록특허공보제 10-0570553호).

[7] 이에본발명자들은긴사슬오메가 -하이드록시지방산 (long chain

omega-hydroxy fatty acid)을이용하여천연세라마이드 1과유사한구조적인 특성을가지는신규한유사세라마이드화합물을 합성하였으며,이를

이용함으로써피부장벽기능개선효과뿐아니라 각질형성세포의분화를 촉진하는효과가있음을확인하여，본발명을출 원하기에이르렀다.

발명의상세한설명

기술적과제

[8] 본발명의목적은피부장벽기능개선효과가뛰어 난천연세라마이드 1과 유사한구조적인특성을가지는신규한유사세라 마이드화합물，이의 약학적으로허용되는염또는용매화물을제공하 는것이다.

[9] 본발명은신규한유사세라마이드화합물，이의 약학적으로허용되는염또는 용매화물을유효성분으로함유하는피부장벽기 능개선과염증성피부질환 개선효과를가지는약학조성물을제공하는것이 다.

[10] 또한본발명의또다른목적은신규한유사세라마 이드화합물，이의

약학적으로허용되는염또는용매화물을유효성 분으로함유하는피부장벽 개선기능과피부보습강화효과를가지는화장료 조성물을제공하는것이다. 과제해결수단

[11] 본발명은하기화학식 1로표시되는유사세라마이드화합물,이의약학� ��으로 허용되는염또는용매화물을제공한다.

[12] [화학식 1]

[14] [상기화학식 1에서，

[15] ^은수소또는탄소수 (C1 C10)의하이드록시알킬이고，

[16] R ₂ 는각각독립적으로탄소수 (C4~C20)의선형또는분지형알킬이고， [17] m및 n은각각독립적으로 1내지 18의정수이다.]

[18] 본발명의일실시예에따른상기화학식 1로표시되는유사세라마이드

화합물은 ^은수소또는탄소수 (C1-C4)의하이드록시알킬이고, ¾는각각 독립적으로탄소수 (C5-C17)의선형또는분지형알킬일수있다.

[19] 또한，본발명의일실시예에따른상기화학식 1로표시되는유사세라마이드 화합물은상기 m및 n은각각독립적으로 5내지 15의정수일수있다.

[20] 본발명의 일실시예에따른유사세라마이드화합물은하기 구조로표시되는 유사세라마이드화합물일수있다.

[22] 또한본발명은상기화학식 1로표시되는유사세라마이드화합물，이의 약학적으로허용되는염또는용매화물을유효성 분으로함유하는피부장벽 기능개선과염증성피부질환개선효과를가지는 약학조성물을포함한다.

[23] 본발명의일실시예에따른상기염증성피부질환 은아토피피부염，알레르 7 비염,건선，접촉성피부염，습진성피부염，� �선피부염，지루피부염，포진성 피부염，편평태선，경화태선，괴저성농피증 ，천포창,수포성표피박리증， 맥관부종，안검염，알러지성결막염，퇴행성 또는염증성안구염，관절염， 류마티스관절염,척추염，전신성경화증，피� �근염，다발성근염,염증성근병변, 후천성면역결핍증，나병，세자리증후군,염� �성창자병또는스트레스성 질환일수있다.

[24] 본발명의일실시예에따른상기조성물은총중량 에대하여유사세라마이드 화합물，이의약학적으로허용되는염또는용매 화물을 0.005내지 20중량 %로 함유될수있다.

[25] 또한본발명은상기화학식 1로표시되는유사세라마이드화합물，이의

약학적으로허용되는염또는용매화물을유효성 분으로함유하는피부장벽 개선기능과피부보습강화효과를가지는화장료 조성물을포함한다.

[26] 본발명의일실시예에따른상기조성물은스킨로 션，스킨소프너，스킨토너， 아스트린젠트，로션，밀크로션，모이스쳐로 션，영양로션,맛사지크림，영양크림， 모이스처크림,핸드크림,파운데이션,에센스,� �양에센스，팩,비누，클렌징품， 클렌징로션，클렌징크림，바디로션또는바디 클린저제형일수있다.

[27] 본발명의일실시예에따른상기조성물은총중량 에대하여유사세라마이드 화합물,이의약학적으로허용되는염또는용매� �물을 0.005내지 20증량 %로 함유될수있다.

발명의효과

[28] 본발명은화학식 1로표시되는천연세라마이드 1과유사한구조적특성을 가지는신규한유사세라마이드화합물을제공하 며,본발명에따른화학식 1의 화합물，이의약학적으로허용되는염또는용매 화물은피부장벽기능개선 효과가뛰어나염증성피부질환의치료및예방이 가능하여，이는의약품이나 화장품조성물로서유용하다.

도면의간단한설명

[29] 도 1은본발명의실시예에따른인공피부완전도평� �를위해 TEER

(transepithelial electrial resistance)를즉정한결과이다.

[30] 도 2는본발명의실시예에따른인공피부분화촉진� �과측정을위해분화 지표단백질인필라그린 (filaggrin)의발현양상을면역조직화학염색으로� ��찰한 결과이다.

발명의실시를위한형태

[31] 본발명에따른유사세라마이드화합물및이의용 도에대하여이하상술하나, 이때사용되는기술용어및과학용어에있어서다 른정의가없다면,이발명이 속하는기술분야에서통상의지식을가진자가통 상적으로이해하고있는 의미를가지며，하기의설명에서본발명의요지 를불필요하게흐릴수있는 공지기능및구성에대한설명은생략한다.

[32] 본명세서에서사용되는용어를하기와같이정의 한다.

[33] "인공피부완전도 (integrity)평가"는인공피부의전기적저항성을측 정하여 피부장벽의개선정도를평가하는방법을의미한 다.

[34] 또한 "약학적으로허용되는염"은상기본발명에따른� ��사세라마이드

화합물의요망되는생물학적활성을보유하고바 람직하지않은독성효과를 최소한으로또는전혀나타내지않는염또는복합 체를지칭한다.

[35] 본발명은하기화학식 1로표시되는유사세라마이드화합물，이의약� �적으로 허용되는염또는용매화물을제공한다.

[38] [상기화학식 1에서，

[39] R _t 은수소또는탄소수 (C1-C10)의하이드록시알킬이고,

[40] R ₂ 는각각독립적으로탄소수 (C4-C20)의선형또는분지형알킬이고，

[41] m및 n은각각독립적으로 1내지 18의정수이다.]

[42] 또한본발명에따른하기화학식 1로표시되는유사세라마이드화합물은이에 한정되는것은아니나,안정적인라멜라층을형� �하기위한측면에서， 바람직하게는 ^이수소또는탄소수 (C1-C4)의하이드록시알킬이고, R ₂ 는각각 독립적으로탄소수 (C5-C17)의선형또는분지형알킬인유사세라마이� �� 화합물일수있으나，이에한정되지않는다.이� �，상기 m및 n은이에한정되는 것은아니나,제형내라멜라층의층간거리를피� �각질층과유사한 lOnm 이상으로유지하는측면에서，보다바람직하게 는 5내지 15의정수인유사 세라마이드화합물일수있다.

[43] 본발명에따른유사세라마이드화합물，이의약 제학적으로허용되는염또는 이꾀용매화물은하기구조로표시되는유사세라 마이드화합물들로부터 선택될수있으나，이에한정이있는것은아니다 .

[45] 본발명에따른화학식 1로표시되는유사세라마이드유도체는특별히 한정되지않으나，하기반웅식 1의경로를통하여이미알려져있는유기 통하여제조될수있다.

[46] [반웅식 1]

[47]

TEA

[48] 또한본발명에따른유사세라마이드화합물,이� �약학적으로허용되는염 또는용매화물을유효성분으로함유하는피부장 벽기능개선과염증성 피부질환개선효과를가지는약학조성물을제공 한다.

[49] 본발명에따른 "약제학적으로허용되는염 "은화학식 1로표시되는유사

세라마이드화합물이형성할수있는치료적으로 활성인，비 -독성염기또는산 부가염의형태일수있다.

[50] 이때，상기비 -독성염기는설페이트，피로설페이트，바이� �페이트，설파이트， 바이설파이트，니트레이트，포스페이트，모 노하이드로겐포스페이트, 디하이드로겐포스페이트,메타포스페이트,피� ��포스페이트클로라이드, 브로마이드,아이오다이드,플루오라이드，아� ��테이트，프로피오네이트, 데카노에이트，카프릴레이트，아크릴레이트 ，포메이트，이소부티레이트， 카프레이트,헵타노에이트，프로피올레이트� �옥살레이트，말로네이트， 석시네이트，수베레이트，세바케이트，푸마 레이트，말리에이트,

부틴 디오에이트，핵산 -1,6-디오에이트,벤조에이트，클로로벤조에이 트， 메틸벤조에이트，디니트로벤조에이트，하이 드록시벤조에이트，

메톡시벤조에이트，프탈레이트，테레프탈레 이트，벤젠설포네이트，

톨루엔설포네이트,클로로벤젠설포네이트,크� ��렌설포네이트,페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트,페닐부티레이트，시트� �이트，락테이트,

β-하이드록시부티레이트，글리콜레이트，말 레이트，타트레이트，

메탄설포네이트，프로판설포네이트，나프탈 렌 -1-설포네이트,

나프탈렌 -2-설포네이트또는만델레이트를포함하나，이 에제한되는것은 아니다.

[51] 또한상기산부가염은약학적으로허용가능한유 리산 (free acid)에의해

형성된산부가염일수있으며，이에한정되지는 않으나바람직하게는，염산, 질산，인산，황산，브름화수소산，요드화수 소산,아질산또는아인산과같은 무기산류이거나지방족모노또는디카르복실레 이트，페닐-치환된

알카노에이트，하이드록시알카노에이트또는 알칸디오에이트와같은방향족 산류이거나지방족또는방향족설폰산류이거나 아세트산，안식향산，구연산， 젖산，말레인산,글루콘산，메탄설폰산， 4-를루엔설폰산，주석산，푸마르산과 같은유기산일수있다.

[52] 상기용매화물의용매는특별히제한되지는않으 나，바람직하게는수화물또는 알콜화물일수있다.

[53] 또한본발명에관하여화합물의언급은특정의이 성질체형태가특히

언급되지않는다면각각의그의가능한이성질체 형태및이의흔합물인 화합물을포함하는것으로의도된다.

[54] 본발명에따른화합물은상이한다형형태로존재 할수있다.비록상기식에서 명시적으로표시되지는않았지만，그러한형태 는본발명의범위내에포함되는 것으로의도된다. [55] 상기염증성피부질환은아토피피부염，알레르 기비염，건선，접촉성피부염， 습진성피부염，광선피부염,지루피부염，포� �성피부염，편평태선，경화태선， 괴저성농피증，천포창，수포성표피박리증， 맥관부종，안검염,알러지성결막염, 퇴행성또는염증성안구염，관절염，류마티스 관절염，척추염，전신성경화증, 피부근염，다발성근염,염증성근병변，후천� �면역결핍증，나병,세자리증후군， 염증성창자병또는스트레스성질환일수있다.

[56] 본발명은약제학적으로허용가능한담체내에적 어도하나이상의본발명의 화합물을포함할수있다.

[57] 또한본발명의약학조성물은당해발명이속하는 기술분야에서통상의

지식을가진자가용이하게실시할수있는방법에 따라,약제학적으로허용되는 담체를포함할수있다.본발명의약학조성물에� �함되는약제학적으로 허용되는담체는제제시에통상적으로이용되는 것으로서，락토스，덱스트로스， 수크로스,솔비를,만니를，전분，아카시아고� ��，인산칼슘，알기네이트，젤라틴, 규산칼슘,미세결정성셀를로스，폴리비닐피� �리돈,셀를로스，물，시럽，메틸 셀를로스，메틸히드록시벤조에이트，프로필 히드록시벤조에이트，활석， 스테아르산마그네슘또는미네랄오일일수있으 나，이에한정되는것은 아니다.본발명의의약조성물은상기성분들이� �에윤활제，습윤제，감미제， 향미제,유화계，현탁제또는보존제등을추가� �포함할수있다.

[58] 본발명의약학조성물은당해발명이속하는기술 분야에서통상의지식을 가진자가용이하게실시할수있는방법에따라， 약제학적으로허용되는담체 및 /또는부형제를이용하여통상적인제제로제형� �함으로써단위용량형태로 제조되거나또는다용량용기내에내입시켜제조 될수있다.통상적인제형이라 함은예를들면경구 (정제，캡슐제，분말제)，구강내，혀밑，직� ��내，질내，비강 내，국소또는비경구 (정맥내，해면체내，근육내，피하또는관내� �포함)투여 제형을일컫는다.예를들면，본발명에따른화� �물은전분또는락토오즈를 함유하는정제형태이거나단독또는부형제를함 유하는캡슐형태또는맛을 내거나색을띄게하는화학약품을함유하는현탁 제형태로경구，구강내또는 혀밑투여될수있다.액체제제는현탁제 (예를들면,메틸샐를로오즈， 위텝솔 (witepsol)과같은반합성글리세라이드이거나행� �유 (apricot kernel oil)와 PEG-6에스테르의혼합물이거나 PEG-8과카프릴릭 /카프릭글리세라이드의 흔합물과같은글리세라이드흔합물로써，약제 학적으로허용가능한첨가제와 함께제조될수있다.또한,비경구적으로예를들� ��，정맥내，해면체내，근육내， 피하및관내를통하여주사되는경우무균의수용 액형태로서사용하는것이 가장바람직하며，이때상기용액은혈액과의등 장성을갖기위하여다른 물질들 (예를들면염 (salt)이거나만니를,글루코오스와같은단당류)� ��함유할 수도있다.

[59] 구체적으로본발명의일실시예에따른약학조성 물은정제,필,캡슐,과립， 분말,산제,액제,패치제，마이크로니들을이용 한경피흡수패치제또는 주사제의형태로사용될수있다.

[60] 본발명화합물은공정또는질환상태에따라요망 되는효과를생성하기에 층분한양으로상기약학조성물내에포함될수있 다.

[61] 상기약학조성물은총중량에대하여유사세라마 이드화합물，이의

약학적으로허용되는염또는용매화물을 0.005내지 20중량 %，바람직하게는 0.1내지 10중량 %로함유할수있으나，이에한정되지는않는다.� ��때，유사 세라마이드화합물，이의약학적으로허용되는 염또는이의용매화물의함량이 0.005중량 %미만일경우,효과가미미하고， 20중량 %초과일경우，안정성이 저하될뿐아니라제형에서의용해도가저하될수 있어바람직하지않다.

[62] 또한본발명은하기화학식 1로표시되는유사세라마이드화합물，이의

약학적으로허용되는염또는용매화물을유효성 분으로함유하는피부장벽 개선기능과피부보습강화효과를가지는화장료 조성물을제공한다.

[63] 상기화장료조성물은특별히한정되지는않으나 ，바람직하게는스킨로션， 스킨소프너，스킨토너，아스트린젠트，로션 ,밀크로션，모이스쳐로션，영양로션, 맛사지크림,영양크림，모이스처크림，핸드� �림，파운데이션，에센스，

영양에센스，팩，비누,클렌징품，클렌징로� �，클렌징크림，바디로션또는 바디클린저제형일수있다.또한본발명화합물� �용해성이우수하여화장료 조성물에용이하게사용될수있으며,이를유효� �분으로함유함으로써, 피부장벽개선기능과피부보습용으로사용될수 있다.

[64] 상기화장료조성물의제형은특별히한정되지는 않으나，바람직하게는용액, 유탁액，페이스트,크림,겔또는계면활성제함� ��클렌징일수있다.이때， 제형이용액또는유탁액일경우，담체성분으로 서용매，용매화제또는 유탁화제가이용되고，이에한정되지는않으나 바람직하게는물，에탄올， 이소프로판을，에틸카보네이트,에틸아세테� �트，벤질알코올,벤질

벤조에이트,프로필렌글리콜， 1,3-부틸글리콜오일，글리세를지방족에스테� �, 폴리에틸렌글리콜또는소르비탄의지방산에스 테를포함할수있다.또한 제형이페이스트，크림또는겔일경우,담체성� �으로동물섬유，식물섬유,왁스， 파라핀，전분,트라칸트，샐롤로오스유도체� �폴리에틸렌글리콜,실리콘， 벤토나이트,실리카,탈크또는산화아연이사용� ��수있으며，제형이

계면활성제함유클렌징인경우，담체성분으로 서지방족알코올설페이트, 지방족알코올에테르설페이트，설포숙신산모 노에스테르,이세티오네이트， 이미다졸리늄유도체，메틸타우레이트，사르 코시네이트，지방산아미드에테르 설페이트，알킬아미도베타인，지방족알코을 ，지방산글리세리드，지방산 디에탄올아미드,식물성오일,리놀린유도체또� ��에록실화글리세를지방산 에스테르가사용될수있다.

[65] 상기화장료조성물은총중량에대하여유사세라 마이드화합물,이의

약학적으로허용되는염또는이의용매화물을 0.005내지 20중량

바람직하게는 0.1내지 10증량 %로함유될수있으나，이에한정되지는않는다. 이때，유사세라마이드화합물,이의약학적으� �허용되는염또는이의 용매화물의함량이 0.005증량 %미만일경우，효과가미미하고, 20증량 %초과일 경우，안정성이저하될뿐아니라제형에서의용 해도가저하될수있어 바람직하지않다.

[66] 상기화장료조성물에는유사세라마이드화합물 ，이의약학적으로허용되는 염또는이의용매화물이외에기능성첨가물또는 일반적인화장료조성물에 포함되는성분이추가로포함될수있다.이때,상� ��기능성첨가물로는수용성 비타민，유용성비타민,고분자펩티드，고분� �다당，스핑고지질및해초 엑기스로이루어진군에서하나이상선택될수있 고，상기일반적인화장료 조성물에포함되는성분은유지성분，보습제， 에몰리엔트제，계면활성제，유기 또는무기안료,유기분체，자외선흡수제,방부� ��,살균제，산화방지제，식물 추출물， pH조정계，알콜，색소，향료，혈행촉진제，� ��감제，제한 (制汗)제또는 정제수일수있으며，당업자가용이하게선택하 여사용가능하다.

[67] 이하，본발명의이해를돕기위하여바람직한실 시예를제시한다.그러나

하기의실시예는본발명을보다쉽게이해하기위 하여제공되는것일뿐，하기 실시예는단지예시적인것이지본발명의범위를 어떤식으로든제한하기위한 것은아니다.

[68]

[69] [실시예 1]유사세라마이드화합물 1의제조

유사세라마이

[71] [단계 1] 16-(octanoyloxy)hexadecanoic acid의제조

[72] 16-하이드록시핵사도데카노익산 (16-Hydroxyhexadecanoic acid) 2.0g

(7.34mmol)을클로로포름 60ml로 70°C에서용해후옥타노일

클로라이드 (Octanoyl chloride) 1.38ml (8.07mmol)를첨가하였다.상기혼합물을 4시간동안환류교반시켰다.반웅온도를실온으� ��낮추고상기흔합물에 정제수와디클로로메탄 (Dichloromethane)을첨가하고교반시켰다.이를 정치하여유기층을분리하고,유기층을브라인 (brine)용액으로 1회씻어주고， 무수황산마그네슘 (MgS0 ₄ )로건조하고,여과하여여액을감압농축시� ��다. 잔여물을컬럼크로마토그래프 (Dichloromethane: Methanol = 50:1)로분리하여흰 고체인화합물을얻었다. (2.93g, 7.34mmol, 100% yield).

[73] [74] [단계 2] 16— (octanoyloxy)hexadecanoylketenedimer의제조

[75] 질소대기하에서 16-(octanoyloxy)hexadecanoic acid 2.0g (5.02mmol)을티오닐 클로라이드 (Thionyl chloride) 1.83ml (25.1mmol)에녹이고 2시간동안환류 교반시켰다.티오닐클로라이드 (Thionyl chloride)를진공으로제거하여만들어진

15- (chlorocarbonyl) pentadecyl octanoate을질소대기하에서 Toluene 12ml에 녹이고 Ice bath를이용하여반웅기온도를 0°C이하로냉각한뒤 TEA 1.4ml (10.04mmol)를천천히첨가하였다.첨가완료후 ice bath를제거하고반웅기 온도를서서히실온으로올린뒤 4시간교반시켰다.반응물에정제수를 첨가하고염산을첨가하여 pH3으로맞추고,정제수와에틸아세테이트 (Ethyl acetate)를추가로첨가하여교반시키고정치하여� ��기층을분리하였다.

유기층은브라인 (brine)용액으로 1회씻어주고，무수황산마그네슘 (MgS0 ₄ )로 건조시켰다.이를여과하여여액을감압농축시� �고，잔여물을컬럼

크로마토그래프 (Ethyl Acetate: Hexane = 1:30)로분리하여연노랑색고체인

16- (octanoyloxy)hexadecanoylketenedimer를얻었다. (270mg, 0.35mmol, 14% yield).

[76]

[77] [단계 3]유사세라마이드화합물 1의제조

[78] 16-(octanoyloxy)hexadecanoylketenedimer 270mg (0.35mmol)를에탄올 2.7ml에 녹이고，이용액에에탄올아민 (Ethanolamine) 0.043ml (0.7 lmmol)을첨가한뒤 60 ^o C에서 4시간동안교반시켰다. TLC로반응을확인하고용매를감압농축하여 제거시켰다.농축물에에틸아세테이트 (Ethylacetate)와，정제수를첨가하고 염산을첨가하여 pH3으로맞추고,교반，정치하여유기층을분리� �켰다.

유기층을무수황산마그네슴 (M _g S0 ₄ )로건조시키고，여과한여액을감압 농축시켰다.이의용매를완전히제거시키고，� �여물을컬럼

크로마토그래프 (Dichloromethane: Methanol = 40:1)로분리하여연노랑고체 화합물을얻었다. (186mg, 0.23mmol, 66% yield).

[79] Ή-NMR (600MHz, chloroform-dl): 6.74 (s, 1H), 4.05 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 3.71 (t, J = 5.4 Hz , 2H), 3.43-3.39 (m, 3H), 2.58-2.52 (m, 3H), 2.29 (t, J = 7.8 Hz, 4H), 1.84-1.80 (m, 2H), 1.62-1.55 (m, 10H), 1.31-1.25 (m, 60H), 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 6H).

[80] MS (ESI pos. ion) m/z: 822 (M+). Calc'd exact mass for C50H95NO7: 822.29.

[81]

[82] [실시예 2]유사세라마이드화합물 2의제조

유사세라마이드호ᅡ합 g 2

[84] [단계 1] 10-hydroxydecyl palmitate의제조

[85] 1,10-데칸디올 (1,10— Decandiol) 20.0g (114.76mmol)을클로로포름 600ml로

65 ⁰ C에서용해시킨후팔미토일클로라이드 (Palmitoyl chloride) 17.5ml

(57.38mmol)를천천히첨가시켰다.상기흔합물을 12시간동안환류교반시키고, 반웅물의용매를 300ml정도남을때까지농축시킨다.반응하고남은

1,10-Decandi이는여과하여제거하고.이의여액을� �전히농축시킨후잔여물을 컬럼크로마토그래프 (Dichloromethane: Methanol = 5으ᅳ1)로분리하여흰고체인 화합물을얻었다. (20.9g, 50.64mmol, 88% yield). _

[86]

[87] [단계 2] 10-(palmitoyloxy )decanoic acid의제조

[88] 클로로포름 629ml에피리디니움디클로메이트 (Pyridinium dichromate) 32.7g (151.9mmol)를첨가하고，상기현탁액에 10-하이드록시데실

팔미테이트 (10-hydroxydecyl palmitate) 20.9g (5().6rmnol)을클로로포름 209ml에 녹인용액을천천히첨가한뒤실온에서 24시간동안교반시켰다.반응물에 정제수를첨가하고교반하고정치하여유기층을 분리한뒤무수황산

마그네슘 (MgS0 ₄ )으로건조하고,여과한후여액을감압농축� ��켰다.잔여물을 컬럼크로마토그래프 (Dichloromethane: Methanol = 40:1)로분리하여흰색고체인 화합물을얻었다. (10.0g, 23.4mmol, 46% yield).

[89]

[90] [단계 3내지단계 ⁴ ] 10-(palmitoyloxy)decanoyl ketenedimer의제조

[91] 질소대기하에서 10-(palmitoyloxy)decanoic acid 5.0g (11.7mmol)을티오닐

클로라이드 (Thionyl chloride) 4.3ml (58.6mmol)에녹이고 2시간동안환류 교반시켰다.티오닐클로라이드 (Thionyl chloride)를진공으로제거하여만들어진 9-(chlorocarbonyl)nonyl palmitate을질소대기하에서를루엔 30ml에녹이고 Ice bath를이용하여반웅기은도를 0 ^o C이하로냉각한뒤트리에틸아민 (TEA) 3.3ml (23.4mmol)를천천히첨가시켰다.첨가완료후 ice bath를제거하고반웅기 、온도를서서히실온으로을린뒤밤새교반시켰 다.반웅물에정제수를첨가하고 연산을첨가하여 pH3으로맞추고，정제수와에틸아세테이트 (Ethyl acetate)를 추가로첨가하여교반하고정치하여유기층을분 리시켰다.유기층은 부라인 (brine)용액으로 1회씻어주고，무수황산마그네슘 (MgS0 ₄ )으로 건조하고，여과하여여액을감압농축시켰다.� �여물을컬럼

크로마토그래프 (Ethyl Acetate: Hexane = 1 : 10)로분리하여연노랑색고체인 10-(palmitoyloxy)decanoyl ketenedimer를얻었다. (1.47g, 0.35mmol, 30.8% yield).

[92]

[93] [단계 5]유사세라마이드화합물 2의제조

[94] 10-(palmitoyloxy)decanoyl ketenedimer 1.34g (1.64mmol)를에탄을 13ml에

녹이고,이용액에에탄을아민 (Ethanolamine) 0.2ml (3.28mmol)을첨가한뒤 40 ^o C에서밤새교반시켰다. TLC로반응을확인하고용매를감압농축하여 제거시켰다.농축물에에틸아세테이트 (Ethylacetate)와정제수를첨가하고 염산을첨가하여 pH3으로맞추고，교반，정치하여유기층을분리 하였다.

유기층을무수황산마그네슴 (MgS0 ₄ )로건조하고，여과한여액을감압농축하� � 용매를완전히제거시켰다.잔여물을컬럼크로� �토그래프 (Dichloromethane: Methanol = 40: 1)로분리하여연노랑고체화합물을얻었다. (810mg, 0.92mmol, 56% yield).

[95] Ή-NMR (600MHz, chloroform-dl) 6.69 (br s, 1H), 4.05 (m, 4H), 3.71 (t, J = 5.4 Hz , 2H), 3.44-3.38 (m, 3H), 2.56-2.49 (m, 3H), 2.29 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 1.82- 1.80 (m, 2H), 1.62- 1.54 (m, 10H), 1.29-1.21 (m, 68H), 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 6H).

[96] MS (ESI pos. ion) mix: 878 (M+). Calc'd exact mass for C54H103NO7: 878.40.

[97]

[98] [제조예 1]화장료조성물의제조

[99] 하기표 1의조성으로화장료조성물 (시험제형및대조제형)을제조하였다.

[100] 표 1

[Table 1]

[101]

[102] [시험예 1]인공피부완전도평가

[103] 인공피부 (Keraskin™ from MCTT, Seoul, Korea)에유사세라마이드인 미리스토일 /팔미토일옥소스테아라마이드 /아라카마이드엠이에이 (Myristoyl/pal mitoyl oxostearamide/arachamide MEA)(상품명： PC-9S)및실시예 1을함유하는 시험제형일정량을 (약 500mg)도포한후，도포전과 24시간후피부의

완전성 (integrity)을 TEER (trans-epithelial electrical resistance)측정을통하여 평가하였다.

[104] 대조제형은실시예 1을함유하지않는것을제외하고，상기와동일� �방법으로 피부의완전성 (integrity)을 TEER (trans-epithelial electrical resistance)측정을 통하여평가하여，그각각의결과를도 1에나타내었다.

[105] 그결과，실시예 1을함유하는시험제형의경우대조제형에비해 12.3 %이상의 피부완전성 (integrity)을유지하는데효과를가짐을확인할수� ��었다.

[106]

[107] [시함예 2]인공피부분화촉진효과측정

[108] 인공피부 (Keraskin™ from MCTT, Seoul, Korea)에유사세라마이드인

미리스토일 /팔미토일옥소스테아라마이드 /아라카마이드엠이에이 (Myristoyl/pal mitoyl oxostearamide/arachamide MEA)(상품명： PC-9S)및실시예 1을함유하는 시험제형일정량을 (약 500mg)도포하고， 24시간후분화지표단백질인 필라그린 (filaggrin)의발현양상을면역조직화학염색으로� ��찰하였다.

[109] 대조제형은실시예 1을함유하지않는것을제외하고,상기와동일한� ��법으로 분화지표단백질인필라그린 (filaggrin)의발현양상을면역조직화학염색으로 관찰하여,그각각의결과를도 2에나타내었다.

[110] 그결과，실시예 1을함유하는실시제형의경우，대조제형에비� �인공피부에서 분화지표단백질 (filaggrin)의발현이월등히증가되는것으로확인� ��어， 실시예 1을함유하는시험제형이피부의분화에효과가� �음을확인할수 있었다.